C. elegans의 주 화성 분석

요약

정량의 화학 주성 반응을 평가하는 방법 Caenorhabditis의 엘레이 설명되어 있습니다. 화성 지수 (CI)가 정확하게 특정 대상에 웜의 반응을 평가하고, 균주 및 그 화합물의 비교의 플랫폼으로 제공하는 방법으로 사용 하였다.

초록

많은 생물 화성은 음식 근원을 추구 유해 물질을 피하고, 짝을 찾기 위해 사용합니다. Caenorhabditis의 엘레 인상적 화성 동작이 있습니다.

악취 물질에 웜의 반응을 테스트 뒤에 전제는 지역에 배치하고 악취 물질에 대한 응답으로 유발의 움직임을 관찰하는 것입니다. 도 사용할 수있는 많은 분석과 함께, 중요한 샘플 크기를 유지하면서 서로 웜의 상호 작용을 최소화하면서, 제어 및 시험 영역 모두에 상대적인 시작 위치 웜 최적화가 진행 ^1-10 작업 남아있다. 여기에 설명 된 방법은 Bargmann 등 ^1.에 의해 개발 된 분석을 수정하여 이러한 문제를 해결하는 것을 목표로하고있다. 페트리 접시는 네 개의 사분면으로 나누어 져 있습니다, "테스트"두 표시된 두 개의 반대 사분면은 "컨트롤"을 지정합니다. 마취는 모든 테스트 및 제어 장소에 배치됩니다. 웜 circl와 접시의 중앙에 배치됩니다E는 비 운동성이 웜은 무시 될 수 있도록하기 위해 원점을 표시했다. 4 - 쿼드런트 시스템을 활용하여보다 한 2 개의 1에 관계없이 시작 원산지 어느 쪽의, 그들은 테스트 및 컨트롤 샘플에서 등거리로 웜의 움직임에 편견을 제거합니다. 이 웜을 지연 시키거나 그들의 의도 된 경로의 잘못된 해석을 항복, 더 우회 길을하도록 할 수 있습니다 악취 물질에 응답하기 위해 다른 웜의 클러스터를 통해 여행 강제 웜의 문제를 우회. 또한이 방법은 큰 샘플 크기를 가지고 있으며 연구원 무인 분석을 실행하고 할당 된 시간이 만료되면 웜 점수를함으로써 실질적인 이점을 보여줍니다.

서론

워드는 첫 번째 1973 ⁵ 화성 분석을 개발하고, 그 이후 지금까지 도달하는 응용 프로그램을 가지고 있습니다. 신경 생물학은 화성 분석의 다양한 사용의 혜택을있는 하나의 필드입니다. 후각 적응, 학습과 기억의 간단한 형태는 C로 입증되었습니다 화성 분석하기 ^6을 사용 엘레 간스. 그들은 또한 표시하는 데 사용되었는지 C. 엘레 에탄올 벌레의 행동 가소성을 보여줍니다뿐만 아니라 허용 오차 결과를 개발할 수 있지만, 또한 벌레가 인간 ³ 알코올 의존의 연구에 매우 유용 할 수 있음을 보여줍니다. 분석 심지어 C의 능력을 입증하기 위해 개발되었습니다 엘레은 협회가 chemoattractants과 음식 (OP50) ⁷ 사이의 웜에 의해 만들어진 것을 보여 단기 및 장기 기억 저장합니다. 또한 C.에 대한 현재 사용 가능한 광범위한 정보를 제공 elegans의 게놈 chemotaxiC. s의 동작 엘레은 돌연변이에게 ^1,8를 유도하여 여러 번 변경되었습니다. 여기에는 C의 개발과 같은 많은 흥미로운 기술의 가능성에 대한 수 생물학적 도구로 <....

프로토콜

1. 벌레를 준비 / 세척

1. 젊은 성인 ¹¹ 벌레를 동기화 할 수 있습니다.
2. 의 5 센티미터 주 화성의 접시에 S의 기초의 피펫 2 ㎖은 OP50 E.의 잔디를 취소 한 벌레를 개최 대장균. 웜이 버퍼에 플레이트 표면 세척하기 위해 필요한 접시를 기울이십시오.
3. microcentrifuge 관에 벌레-S 기초 솔루션의 피펫 1 ML.
4. 10 초는 6,600 rpm에서 PicoFuge를 사용하는 원심 분리기.
5. 그대로 벌레의 펠렛을 남겨 S의 기초를 대기음.
6. 벌레를 씻어 몇 번 반전, microcentrifuge 관에 1 ML S 기초 솔루션을 추가합니다.
7. 단계 1.4-1.6 다른 세 번 반복합니다.
8. 10 초 다섯 번째, 캘리포니아의 최종 볼륨에 상층 액을 흡입이 시간을 원심 분리기. 100 μL.
9. 각 2 μL 샘플 50 ~ 250 벌레가 보장 NGM 접시에 벌레의 피펫 2 μL. 조정S의 기초의 작은 또는 더 큰 볼륨 벌레를 현탁하여 필요에 따라 S의 기초에있는 벌레의 농도.
10. 즉시 1 시간에 대한 웜 세척 후 분석에 웜을 사용합니다.

결과

야생형 (N2) C. 비교 ODR-10 (KY10) 돌연변이로 엘레 간스.

우리는 알려진 C를 디 아세틸 사용 엘레은 화학 주성, 디 아세틸 ^1,12에 대한 수용체를 부족 돌연변이의에 야생형 벌레를 비교. 야생형 (N2) 웜에 대한 화학 주성 지수는 에탄올 및 0.839-0.100 ± 0.066이었다 ± 0.031-0.5 % 디 아세틸. 예상대로, 디 아세틸은 야생 형 웜 (P <0.003)에서 유의 한 chemoattractive 반응을 이끌어. 반면에 디 아세틸 수용체를 부족 ODR-10 (KY10) 돌연변이 컨트롤 (그림 3)에서 유의 한 차이를 보이지 않았다 아세틸 CI를했다.

저자	# 웜 / 판.......

토론

화성은 신경 및 세포 메커니즘의 복잡한 집합에 의해 제어하지만, 쉽게 객관적으로 화성 분석을 사용하여 정량화 할 수있다. 분석에서 최상의 결과를 얻으려면, 중요한 특정 단계를 수행해야합니다. 첫째, 벌레를 준비하는 것은 일관성있는 실험 결과를 산출 필수적이다. 서로 다른 삶의 단계에서 웜 다르게 ¹³ 동작, 그래서 혼합 단계 웜 왜곡 될 실험 결과. 둘째, 모든 E. 보장 잔류 세균이 분석을 방해 할 수 있으므로 대장균이 벌레를 세척하는 것은 매우 중요합니다. 마취, 0.5 M 나트륨 아 지드는이 배치 된 곳의 1 센티미터 반경 벌레를 체포 할 것을주의하는 것도 중요하다. 이 감안할 때, 그것은 지드가 원점에서 최소한 2 센티미터 배치하는 것이 가장 중요합니다. 지드는 원점에서 1.5 cm 이하 발견되면 웜은 내부 원 안에 마비되고 아무도 득점되지 않습니다. 더 지드는에, 더 배치사분면 벌레 이동할 수 있습니다. 플레이트는 실험의 일관성을 보장하고, 결과는 중력 편견에 의해 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
S Basal (- 콜레스테롤) [5.8 g NaCl; 1 M K 인산염 버퍼, pH 6.0; dH2O 1리터까지.] 오토클레이브
PicoFuge	Stratagene	400552
현미경	Leica
해부	Leica
P1000 피펫	Gilson
P10 피펫	Gilson
0.5 M 나트륨 아자이드
화학분석 아가르 [1.6% BBL-아가르(Benton-Dickinson) 또는 2% Difco-아가르. 오토클레이브. 5 mM 칼륨 인산염, pH 6.0; 1 mM CaCl2, 1 mM MgSO4 추가]
에탄올/증류수
테스트 화합물(예: 0.5% 다이아세틸)
아가르	Bio-Rad	166-0600
NH4Cl	Amresco	CA97062-046
MOPS	VWR	CA12001-120
NH4OH	BDH	CABDH8641-2
0.25% Tween 20	Bio-Rad	170-6531