마우스의 흰색 지방 조직으로부터 격리 기본 흰색 preadipocytes는 베이지 색 / brite 세포로 구분 할 수 있습니다. 여기에 제시된 것은 백색 지방의 "브라우닝"의 분자 규정을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 모델 시스템입니다.
마우스의 흰색 지방 조직으로부터 격리 기본 흰색 preadipocytes는 베이지 색 / brite 세포로 구분 할 수 있습니다. 여기에 제시된 것은 백색 지방의 "브라우닝"의 분자 규정을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 모델 시스템입니다.
브라운 adipocytes는 미토콘드리아의 호흡 사슬을 풀다 및 열 등의 화학 에너지를 발산 할 수있는 능력을 갖추고 있습니다. 흰 지방 조직 (그래서 베이지 색 또는 brite 세포라고도 함)의 UCP1 - 긍정적 인 갈색 adipocytes의 개발은 매우 같은 만성 감기에 노출 또는 PPARγ의 agonists의 환경 단서의 다양한 의해 유도되며, 따라서,이 세포 유형에 대한 치료 대상으로 잠재력이있다 비만 치료. 대부분의 불후의 지방 세포 라인 문화에 흰색 지방의 "브라우닝"의 과정을 요점을 되풀이 할 수는 없지만, 기본 adipocytes는 brite / 베이지 색 세포 개발의 분자 제어를 연구하기위한 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제공 피하 화이트 지방 조직에서 stromal 혈관 분율 (와트)에서 분리 . 여기 주요 preadipocytes을 효과적으로 격리와 문화에 베이지 / brite 셀에 차별화를 유도를위한 프로토콜을 설명합니다. 브라우닝 효과는 갈색 지방 선택 마르크의 표현에 의해 평가 될 수있다같은 UCP1과 같은 ERS.
비만은 크게 증가하고 세계이며, 지금은 공중 보건 1 가장 심각한 문제 중 하나를 간주됩니다. 이 조건은 지출에 대한 에너지 흡입 상대의 misbalance과 흰색 지방 조직 (와트)의 지질로 저장 초과하는 에너지의 결과에 관련되어 있습니다. 갈색 지방 조직은 열을 생산하기 위해 과도한 에너지를 발산 할 수있는 능력을 가지고있는 동안 확대 와트는 증가 몸 질량 및 무게와 연결되어 있습니다. 따라서 BAT은 춥고 비만 2,3 모두에 대한 보호 역할 할 수 있습니다. 이것은 단백질 1 (UCP1)를 uncoupling에 의해 미토콘드리아의 전자 교통 uncoupling에 의해 달성된다. 이 단백질은 BAT 3 thermogenesis를 nonshivering의 상징으로 간주됩니다. 최근 몇몇 연구는 성인 인간이 기능 BAT 4-8이 있으며, 따라서 인간의 BAT의 조작은 비만과 관련 질병과의 전투에서 잠재적 인 치료 개입 할 수 있다는 밝혔다.
jove_content는 "> 현재 증거가 갈색 adipocytes의 두 종류가 동물에 존재임을 나타냅니다;"고전 "또는"기존의 '갈색 지방은 태아 단계에서 개발 및 interscapular 지역과 다른 주변 조직에 헌신 갈색 지방 창고를 형성 반면.....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
1. 소화 매체를 준비
조직 당 5 마우스 (약 1 ML / 1g의 지방 조직) 당 5 ML하십시오.
2. 마우스에서 지방 조직을 해부
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주요 adipocytes의 브라우닝은 mRNA의 Ucp1의 표현과 qRT-PCR로 다른 갈색 지방의 특정 또는 선택적으로 유전자를 측정하여 액세스 할 수 있습니다. 그림 1에 제시하는 것은 사타구니 와트 - 파생 주요 adipocytes에서 유전자 발현 데이터입니다. 세포는 각각 50 nm의 500 nm의에서 rosiglitazone 두 가지 복용의 면전에서 차별화 유도했다. 셀의 하위 집합을 수확하기 전에 4 시간 10 μM에서 forskolin로 치료했다. 이것은 세포의 주기적-AMP (CAMP)를 유도하고 Ucp1 표현을 포함 thermogenic 유전자 프로그램을 활성화합니다.
그림 1A에 도시 된 바와 같이, rosiglitazone은 견고 Ucp1 mRNA의 표현을 유도. Forskolin 처리 (캠프) 추가 rosiglitazone 유발 UCP1 식을 증대.......
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여기 마우스의 기본 양식 adipocytes에 베이지 색 / brite 세포의 개발을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제시한다. 같은 몇 가지 가능한 불후의 세포 라인에 비해,이 시스템은 생체의 흰색 지방의 갈변으로 향상된 관련성을 제공 할 것으로 예상됩니다.
이러한 기본 adipocytes의 연구는 몇 가지 장점을 제공하더라도,이 또한 고려하는 것이 중요 일부 제한 사항 및 문제를 존재합니다. 첫째,이 시스템은 세포의 분화의 효력에 크게 의존합니다. 이러한 Ucp1 및 Cidea과 같은 갈색 지방 선택적 유전자의 표현은 특히 차별화에 따라 달라집니다. 예를 들어, PPARγ의 agonists와 BMP7도 따라서 adipogenesis을 강화, "브라우닝"효과는 상당히 차별화의 유사한 정도와 셀에 액세스해야합니다. 또한, 같은 지방 선택적 갈색의 표현을 정규화, 인물 1D와 E에
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제작자들은 더 경쟁 금융 이익이 없다는 점 선언합니다.
우리는 토론, 기술 지원 및 원고에 대한 편집 지원 Haruya 오노, Kosaku 시노다, 루이스 샤프, 에미 Tomoda, 로렌 루이즈 감사드립니다. 이 작품은 돌파구 바이오 메디컬 연구 및 Asubio 알약 주식회사에서의 프로그램에서 SKULA에 NIH (DK087853)에서 보조금 코펜하겐과 EU FP7 프로젝트 DIABAT (건강-F2의 대학에서 SHARE 박사 장학금이 지원 한에 의해 지원되었다 리자 매드슨와 Karsten Kristiansen에 -2011-278373). 우리는 또한 DERC 센터 보조금 (NIH P30 DK063720)을 인정합니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약 | |||
| Collaginase D | 로슈 | 11088874103 | |
| Dispase II | 로슈 | 04942078001 | |
| CaCl 2 | |||
| DMEM 매체 | 어부 | 10017-CV | 나트륨 pyruvate없이 2,5 g / L 포도당 및 L-글루타민과 함께 |
| 인슐린 | |||
| T3 (3,3 ',5-Triiodo-L-thyronine) | 시그마 | T-2877 | |
| 인도 메타 신 | 시그마 | I-7378 | |
| Dexamethasone | 시그마 | D-1756 | |
| IBMX | 시그마 | I-5879 | |
| Rosiglitazone | 시그마 | R-2408 | |
| 장비 | |||
| 콜라겐 코팅 요리 | BD | 354450 | 10cm 플레이트 |
| 70 μm 필터 | BD 팔콘 | 352350 | 셀 스트레이너, 70 μm 나일론 1/ea |
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