우리는 2.0 mm 검경과 이경을 사용하여 직접 후두경을 통해 마우스에서 기관 내 삽관을위한 간단하고 신뢰할 수있는, 그리고 상대적으로 저렴한 방법을 개발했습니다. 이 기술은 atraumatic이고 만성 실험에서 반복 측정에 사용될 수있다. 우리는 우수한 기관 절개 또는 이전에 비수술 적 방법을보고 찾을 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
마우스는 야생형 및 유전자 변형 모두는 현재 생물 의학 연구의 주요 포유류의 모델입니다. 삽관 및 기계적 환기 깊은 마취 또는 폐 기능의 측정에 따라 수술을 필요로 전체 동물 실험을 위해 필요합니다. 기관 절개술은 기계 환기를 허용하는이 마우스에서기도 삽관을위한 표준이다. Orotracheal 삽관 때문에 상당한 기술적 어려움이나 고도의 전문과 고가의 장비에 대한 요구 사항의보고되었지만 성공적으로 많은 연구에 사용되지 않았습니다. 여기서 우리는 2.0 mm 검경 장착 이경을 사용하여 기관 내 튜브로 20 G 정맥 카테터를 사용하여 직접 후두경의 기술을보고합니다. 우리는 삽관과 생쥐의 폐 기능의 정확한 평가를 수행하기 위해 광범위하고 안정적으로이 기술을 사용하고 있습니다. 이 기술은 경험이 풍부한 손에 본질적으로 동물 손실, 안전 입증했다. 또한,이 기술만성 모델 마우스의 반복 된 연구에 사용할 수 있습니다.
서론
실험실 마우스 생물학 한테 진찰 Pathobiology의 주요 포유류의 모델로 거의 모든 종을 대신하게했다. 실험실 마우스는 명확하고 광범위하게 인간의 질병의 모델로서 가치가있을 것으로 나타났다 인간 생물학 및 질병에 대한 우리의 이해의 발전에 귀중한 입증 된 가장 작은 포유류의 종입니다. 짧은 임신 기간의 시간과 실질적으로 낮은 비용으로는 생물 의학 연구에서 일반적인 도구로 널 (null)과 형질 전환 마우스의 개발과 연구를 허용했다. 그러나, 평균 실험실 마우스 (20 ~ 25 g)을의 크기는 결과적으로 연구자에 큰 포유 동물 종을 연구, 생리 학적 또는 외과 적 기반 연구에 자신의 연구를 제한하고있다. 이 연구에 마우스를 사용하는 장애는 깊은 마취 생리적 측정 또는 광범위한 수술을 허용하는 삽관 기술로 발생하는 어려움이다. 기관 절개 1 TE 표준으로 사용되었다필요하기 때문에이 기술과 겸손 기술을 수행하는보다 쉽게 대신 삽관의 chnique. 그러나, 기관 절개술은 만성 또는 복구 수술 연구에 도움이되지 않습니다; 따라서, 급성 실험에 한한다. 기관 절개술은 또한 염증이나 민감한 생리적 반사 신경이 중요 한 연구에서 교란 변수가 될 수 있습니다.
우리 연구실은 다른 연구자에 의해 설명 된 기술의 대부분을 시도하....
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프로토콜
1. 동물 준비
- (작은 마우스는 전문가에 의해 삽관 할 수있다) 8 주 이내에 세 이상 20g 생쥐를 얻습니다.
- 마취
- 복강 preanesthetic으로 케타민과 자일 라진 20 ㎎ / ㎏, 각, 생쥐를 주입한다. (이 용량은 완전히 마우스를 마취하기에 충분하지만, 기계 환기에 삽관 후 안전한 전송을 용이하게한다.) 그러나, 투여 량의 조정 기관의 수의사와 협의하여 마취 반응에 따라 필요할 수 있습니다.)
- 90 ~ 120 초 동안 유도 챔버에서 3.5 % 이소 플루 란 / 산소와 마우스에서 마취를 유도한다.
- 주의 깊게 호흡을 관찰합니다. 그것은 이하 45 이상 BPM에 점진적으로 둔화 될 전망.
2. 삽관을위한 준비
- 유도 챔버에서 마우스를 제거하고 단단하게 목덜미.
- 신사에 쿠션 미세 집게를 사용하여LY 입에서 혀를 확장합니다.
- 두 손가락 사이에 혀를 잡고 부드러운 힘을 주면 혀의 확장을 유지한다.
- 상하 운동과 이경의 검경에 마우스를 위로 당기십시오.
- 단단히 scruffing 동안 이경의 눈을 통해보고 혀와 목덜미에 부드럽게 마우스를 올....
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결과
위의 기술을 가진 삽관 법은 안정적이고 빠르다. 기관 내 튜브의 적절한 배치는 쉽게의 침수 호기 사지에서 배출 가스 버블 링을 관찰에 의해 확인 된 인공 호흡기 회로 (일반적으로 PEEP 트랩에서) (그림 1)를 추적기도 압력에 부정적인 편향의. 기도 압력 추적에 부정적인 편향은 가장 신뢰할 수 있습니다. 기타 호기 인공 호흡기 회로 (2)에 연결 정맥 튜브의 작은 액체 방울의 움직임을 사용했습니다. 우리는이 기술을 광범위 사용하지 않지만, 그것은 튜브의 위치를 확인하기에 충분해야한다. 경험이 연산자는 첫 번째 패스에이 방법에게 시간의 약 90 %를 사용하여 마우스를 삽관 할 수 있습니다. 관은 즉시 제거하고, 실패하는 사람들을 위해, 동물은 이소 플루 란 마취 reinduced 및 배치가 다시 시도됩니다. 동물은 ESO의 경우 인공 호흡기 회로에 접속두면어떠한 간섭도없는 경우 phageal 삽관, 위장 서서히 insufflate 높은 피크기도 압력, 저산소 혈증, 및 궁극.......
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토론
이 보고서에서 우리는 비 외상성과 같은 동물에서 반복적으로 사용할 수있는 마우스를 삽관하는 간단하고 신뢰할 수있는 기술을 설명합니다. 이 기술은 겸손한 합계 구입하실 수 있습니다 간단한 실험실이나 의료 장비를 수행 할 수 있습니다. 원래 스팅 및 동료 (4)에 의해보고 된 직접적인 후두경의 기술은, 다양한 용도로도 이용 될 수 있지만 주로 정확하게 하부 호흡기에 시험 물질을 전달하는. 때문에 우리는 반복 측정에 대한 편의성, 속도, 단순성, 신뢰성, 낮은 비용, 잠재적 인 날짜에 다른 연구자에 의해보고 된 우수한이 기술을 발견했다.
마우스를 삽관하는 기술은 새로운 것이 아니다. 초기 보고서 중 하나는, 기관의 사용 transillumination 24 G 카테터 5 경구 삽관 하였다. 그러나,이 연구 및 기타 6,7 TEC를 복제 할 수있는 충분한 정보를 제공하지 않았다우리의 실험실에서 hnique. 최근에 다른 수사.......
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공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.
감사의 글
베테랑 담당 부서에서 메리트 그랜트와 건강의 국립 연구소의 NHLBI에서 T32-HL098062 그랜트는이 작업을 지원했다. 우리는 기꺼이 랜돌프 H. Hasting, MD, 박사의 조언을 인정하고자하는 그리고 조언과 VA 샌디에고 헬스 케어 시스템의 수의학 단위의 지원.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 운영 이경 헤드 | Welch Allyn | 21700 | $188.98 |
| 이경 핸들 | Welch Allyn | 71000 | $112.20 |
| 재사용 가능한 검경 | Welch Allyn | 22002 | $3.98 |
| 미세 집게 | Miltex | 18-779 | $107.18 |
| 검이경 | |||
| 을 고정하는 작은 클램프 스탠드Isoflurane 기화기(진공 폐가스 처리 기능이 있는 다중 회로) | Summit Medical | $3,000 | |
| Flexivent(동물 인공호흡기) | SCIREQ | $35,000 | |
| 정맥 카테터(20G, 1인치) | BD | 381233 | $9.62 |
| 폴리에틸렌 튜브(PE10)(0.011인치 I.D., 0.024인치 OD) 100피트 | Intramedic, Clay-Adams | 427401 | $115.70 |
| 케타민 100mg/ml(10 ml 병) | 버틀러 | 23061 | $10.00 |
| 자일라진 (100ml 병) | Vedco | 24105 | $20.00 |
| 이소플루란 (250ml 병) | $15.00 | ||
| 베쿠로늄 브로마이드 10 mg/10 ml | 화이자 | NDC 0069-0094-01 | $15.00 |
참고문헌
- Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. natl. Acad. Sci. U.S.A. 88, 8277-8281 (1991).
- Watanabe, A., Hashimoto, Y., Ochiai, E., Sato, A., Kamei, K.
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재인쇄 및 허가
