이 비디오에서는, 우리는 복잡한 신경 회로를 유지하는 뇌 전체 준비에서 확인 된 하나의 뉴런에서 전기 활동을 기록하는 방법을 보여줍니다. 우리는 성선 자극 호르몬 분비 호르몬 (GnRH의) 신경 세포가 유전자 손상 뇌의 준비 식별을위한 형광 단백질로 태그 된 유전자 변형 물고기를 사용합니다.
이 비디오에서는, 우리는 복잡한 신경 회로를 유지하는 뇌 전체 준비에서 확인 된 하나의 뉴런에서 전기 활동을 기록하는 방법을 보여줍니다. 우리는 성선 자극 호르몬 분비 호르몬 (GnRH의) 신경 세포가 유전자 손상 뇌의 준비 식별을위한 형광 단백질로 태그 된 유전자 변형 물고기를 사용합니다.
복잡한 행동을 조절하는 신경 회로의 세포 생리학을 이해하는 것은이 작품은 CNS의 신경 회로가 그대로 남아 그대로 뇌의 준비에서 수행 할 수있는 모델 시스템을 사용하여 크게 향상됩니다. 우리는 성선 자극 호르몬 분비 호르몬 (GnRH의) 신경 세포가 유전자 손상 뇌의 식별을 위해 녹색 형광 단백질로 태그 된 유전자 변형 물고기를 사용합니다. 물고기 GnRH의 뉴런의 여러 인구를 가지고 있고, 그 기능은 뇌의 위치와 그들이 1을 표현하는 GnRH의 유전자에 따라 달라집니다. 우리는 유전자 변형 송사리의 손상 뇌 (그림 1B 및 C)를 사용하여 후각 전구에 연결된 터미널 신경 (TN)에 위치한 GnRH3 신경에 우리의 시범 초점을 맞추고있다. 연구는 송사리 TN-GnRH3 뉴런은 중추 신경계에 외부 환경으로부터 정보를 송신기 역할을 neuromodulatory 것을 제안, 티셔츠헤이로 잘 알려진 시상 하부 GnRH1 신경 세포 2, 3을 수행합니다. TN-GnRH3 뉴런의 자발적인 활동 전위 사격 토닉 패턴이 고유의 속성을 4-6, 주파수, 뇌하수체 - 생식선 기능 조절에 직접적인 역할을하지 않는다 어느 것이 conspecifics 2 신경 펩타이드 kisspeptin 5에서 시각적으로 변조된다. 이 비디오에서는, 우리는 TN-GnRH3 뉴런이 어떻게 뉴런을 식별하고 뇌 전체에 자신의 전기 활동을 모니터링하는 방법을 보여 강화 된 녹색 형광 단백질 7에 연결 Gnrh3의 프로모터 부위를 포함하는 유전자를 표현하는 형질 전환 송사리의 안정적인 회선을 사용 준비 6.
1. 성인 송사리의 두뇌의 해부
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송사리의 절제 뇌에서 GFP - 라벨 TN-GnRH3 신경의 양측 클러스터의 예는 그림의 1B 및 1C에 표시됩니다. 각 클러스터는 8-10 GnRH의 뉴런을 포함하고 있습니다. 대상 TN-GnRH3의 자발적인 신경 활동은 0.5-6 Hz의 전형적인 발사 속도와 전류 클램프 모드 (I = 0)에 기록 하였다. 활동 전위 사격 패턴은 매우 일반적인 interspike 간격으로, 일반적 토닉이나 구타 패턴이다. 샘플 트레이스는 그림 2 (:; 전체 세포 2B 느슨한 패치 2A)에 표시됩니다.
이 실험 방법은 성인 zebrafish의 (그림 3A 및 3B)의 전뇌에있는 GFP - 라벨 GnRH의 신경 세포에서 녹음도 성공합니다. 느슨한 패치 (그림 3C) 및 전체 세포 녹음 (가 송사리에서 설명한대로 .......
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GnRH의 3 GFP 유전자 변형 물고기는 신경 세포의 통합과 직간접 적으로 재생 3, 8-10에 관여 둘 다 행동의 중앙 제어 규제의 근간이되는 신경 생리 학적 메커니즘을 연구하는 독특한 모델을 제공합니다. 이 모델 시스템의 중요한 장점 중 하나는 GFP를 표현하는 많은 GnRH3 뉴런은 신경 회로 6, 9, 11, 12 (그림 방해하지 않고 전기 생리학 기록을 위해 신경을 비교적 쉽게 액세스 할 수 있도록 두뇌의 복부 표면에 가까운 즉 1B 및 1C, 도표 3A 및 3B). 이 비디오에서는, 우리는 송사리의 손상 성인 뇌의 TN-GnRH3 신경 세포 모두에서 느슨한 패치 및 전체 세포 녹음을 보여 주었다. 자연 발화에는 검출 성별 차이는 TN-GnRH3 신경 강장제 0.5-6Hz.There의 주파수로 발사 자발적 활동 전위의 박동 패턴을 전시 않았다.......
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저자는 공개 아무것도 없어.
우리는 기술 지원을위한 박사 멩 턱 린 양 위안 동 감사합니다. 이 작품은 건강 HD053767의 국립 연구소 (NLW에 하청)에서 교부금에 의해 캘리포니아 로스 앤젤레스의 연구 대학 (NLW)를위한 부총장의 생리학 및 Office의 부서에서 기금에 의해 지원되었다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 현미경 | Olympus | BX50W(Upright) | |
| 증폭기 | Axon Instruments | Axoclamp 200B | |
| A-D 컨버터 | Computer Interference Corp. | Digidata ITC-18 | |
| 냉각 CCD 카메라 | PCO 컴퓨터 광학 | Sensicam | |
| 크세논 램프 | Sutter Instruments Co. | ||
| GFP 필터 세트 | , Chroma Technologies | ||
| , 이미징 소프트웨어 | , Intelligent Imaging Innovations, | 슬라이드북 소프트웨어 | |
| , 전기생리학, 데이터 수집 소프트웨어 | , Axon Instruments | , Axograph 소프트웨어 | |
| , 전기생리학, 데이터 수집 소프트웨어, | AD Instruments, Inc. | PowerLab | |
| 전기 생리학을위한 헤드 스테이지 | Axon Instruments | CV 203BU | |
| Micromanipulator | Sutter Instrument Co | MP-285 | |
| 녹음 챔버 플랫폼 | Warner Instrument Corp. | P1 | |
| 레코딩 챔버 | Warner Instrument Corp. | RC-26G | |
| 전극 풀러 | 서터 기기 | P87 | |
| 필라멘트 전극 풀러 | 서터 기기 | FB330B | 3.0 mm 넓은 트로프 필라멘트 |
| 1.5 mm 유리 모세관 | 세계 정밀 기기 | 1B150-4 | Micr– |
| 주사기 | Becton Dickinson | 309586 3 ml | |
| MS-222 | Sigma | E10521-10G | 에틸 3-아미노벤조에이트 메탄설포네이 |
| 염 생선 식염 | mM: 134 NaCl; 2.9 KCl; 2.1 CaCl2; 1.2 MgCl2; 10 Hepes | ||
| 전극 용액(느슨한 패치) | mM : 150 NaCl; 3.5 KCl; 2.5 CaCl<이하 >2; 1.3 MgCl<이하 >2; 10 헤페; 10 포도 | ||
| 전극 용액 (전체 세포 패치) | mM : 112.5 K- 글루 콘산염; 염화나트륨; 17.5 KCl; 0.5 CaCl<이하 >2; 1 MgCl<이하 >2; 5 마그네슘ATP; 1 에그타; 10 헤페; 1 GTP; 0.1 류펩틴; 10 포스포-크레아틴 |
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이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청
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