양이온 성 리포좀을 통해 특정의 siRNA 반복 전달하여 마우스 폐 Intersectin-1의 장기 침묵. 전자 현미경에 의한 넉다운 효과의 평가

Cristina Bardita; Dan Predescu; Sanda Predescu

doi:10.3791/50316

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방법 논문

양이온 성 리포좀을 통해 특정의 siRNA 반복 전달하여 마우스 폐 Intersectin-1의 장기 침묵. 전자 현미경에 의한 넉다운 효과의 평가

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DOI:

10.3791/50316

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2013년 6월 21일

Cristina Bardita^*¹ , Dan Predescu^*¹^,² , Sanda Predescu¹^,²

¹Department of Pharmacology, Rush University, ²Pulmonary and Critical Care Department, Rush University

^* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

생쥐의 양이온 liposomes/siRNA/ITSN-1s 단지 24 일 동안 72 시간마다 반복적으로 복고풍 궤도 주사 효율적으로 75 %에 ITSN - 초 발현 및 단백질 발현을 감소 마우스 폐 미세 혈관에 siRNA의 양면을 제공합니다. 이 기술은 동물 모델에서 높은 재현성, 부작용이없고 사망을 방지합니다.

초록

이전 연구는 ITSN - 초 (KD _ITSN), 폐 혈관 투과성과 내피 세포 (내피) 생존에 의한 세포 사멸 세포 죽음, ITSN - 초 장기와 세포 배양 시스템 개발의 주요 장애물을 조절에 관여 endocytic 단백질의 최저를 보였다 억제 ^1. 사업자로서 양이온 성 리포좀을 사용하여, 우리는 ITSN-1 유전자 (의 siRNA _ITSN) 대상의 siRNA의 전신 투여가 마우스 폐에 ITSN - 초 유전자의 침묵을 탐구. ² 생산, 반복 투여에 안전 nonimmunogenic, 비 독성, 쉬운 : 양이온 리포좀의 siRNA 전달을위한 몇 가지 장점을 제공합니다. 리포솜의 성능 및 생물 학적 활동은 콜레스테롤과 디메틸 dioctadecyl 암모늄 브로마이드 조합을 사용하여 크기, 전하, 지질 구성, 안정성, 용량 및 투여 ^3의 경로를 여기에, 효율적으로 획득 한 마우스의 폐에서 특정 KD _ITSN에 따라 달라집니다. 정맥 배달의 siRNA _ITSN의 / 양이온 성 리포좀과의 복합체는 일시적으로 추가 3 일 후에 회수 3 일에서 마우스 폐 ITSN - 초 단백질 발현을 무너 뜨렸다. 반복 안전한 항공사로서 양이온 성 리포좀의 활용, 연구는 24 일 연장했다. 따라서, 갓 생성 된 단지 레트로 궤도 치료 연구 ^4에 걸쳐 지속적인 KD _ITSN을 유도마다 3 일 투여 하였다. 여러 시점 이후의 siRNA _ITSN에서 수집 마우스 조직은 폐 내피에서, 만성 KD _ITSN의 효과를 평가하기 위해 전자 현미경 (EM) 분석을 실시 하였다. 고해상도 EM 영상은 우리가 폐 혈관 침대에 KDITSN에 의한 형태 학적 변화를 평가 할 수 광학 현미경으로 특성을 비 감지 (내피 장벽 즉, 중단, caveolae의 수 및 대체 수송 경로의 upregulation를 감소). 전반적으로 이러한 연구 결과는 impor에 설립ECS의 기능과 폐 항상성 ITSN-1의 TANT 역할, 생체 내에서의 siRNA - 리포좀 전달의 효과를 설명하면서.

서론

알몸의 siRNA는 세포막을 통과 할 수없는 부정 청구되고, 그것은 혈액에있는 효소, 조직, 세포로 쉽게 저하됩니다. 심지어 안정성을 향상시키기 위해 최근 구조 변경과 함께 투여 후 대상 사이트에서 siRNA의 축적은 매우 낮고 효율적으로 세포 내 자동차는 ⁵ 필요합니다. 양이온 성 리포좀 캡슐화 및 효소 분해 ^6에서 핵산을 보호하여 세포에 DNA / RNA의 큰 조각을 전송하는 잠재적 인 안전 핵산 항공사로 나타났다. 또한, 양이온 성 리포좀은 저절로 따라서 세포 ² 유전자 전달을 촉진, DNA / RNA와 상호 작용합니다. 더 최근 리포솜 백신과 저 분자량 약 ^7을 제공하기 위해 적용되었습니다. 플라스미드 마이크로 RNA-7-표현의 리포좀 전달 폐암 세포 ⁸ 표피 성장 인자 수용체 티로신 키나제 억제제 저항을 극복한다. 을 대상으로 할 때단지는 내피 장벽을 통과하고 간질 ^9에 extravasate 할 가능성이 있기 때문에 혈관 내피 세포는 정맥 배달이 필수적이다. 다른 기관과 비교하여 폐의 미세 혈관에서 ECS 가장 큰 이해를 가지고 탐욕스럽게 림프절과 Peyer의 패치를 ⁹ 다음에 양이온 성 리포좀과 DNA / RNA 복합체를 내면화. 복고풍 궤도 ....