이 연구는 단일 셀 문화를 생산하기 위해 마우스 구강의 잇몸 조직을 분리하고 처리 할 수있는 효율적인 방법을 설명합니다. 그 결과 세포는 더욱 유동 세포 계측법 분석 및 분자 연구에 사용할 수 있습니다.
방법 논문
* These authors contributed equally
이 연구는 단일 셀 문화를 생산하기 위해 마우스 구강의 잇몸 조직을 분리하고 처리 할 수있는 효율적인 방법을 설명합니다. 그 결과 세포는 더욱 유동 세포 계측법 분석 및 분자 연구에 사용할 수 있습니다.
우리는 정확하게 분리 및 유동 세포 계측법 및 분자 연구를위한 쥐 치은 조직을 처리하는 기술을 개발했습니다. 치은이 치주 질환을 일으킬 수 있습니다 구강 바이오 필름에 대한 숙주 면역 반응에 관여하기 때문에 면역 메커니즘을 연구하는 독특하고 중요한 조직이다. 또한 치조골 조직에 치은의 근접도 염증 상태에서 뼈의 리모델링을 공부 가능하게합니다. 우리의 방법은 우리가 이전에 1을 보여 같은 랑게르한스 세포와 T 조절 세포로도 희귀 한 세포 집단의 분석을 허용 면역 세포의 다량을 얻을 수 있습니다. 치주 질환시 치조골의 손실에 관련된 지역의 면역 반응을 연구하는 고용 쥐 때문에 다양한 면역 실험 도구의 가용성 유리합니다. 그럼에도 불구하고, 그들의 작은 크기와 쥐 잇몸에 상대적으로 불편 접근으로 인해 많은 연구가 생의 검사를 피할 수의 중요한 조직. 이 작품에서 설명하는 방법은 희망 치주 질환시 경구 면역 시스템과 그 역할을 우리 과소을 증가 잇몸 분석을 용이하게 할 수 있습니다.
잇몸은 치아의 치경부 부분을 둘러싸고있는 연부 조직과 폐포 과정 (그림 1)을 다룹니다. 치은 더 점막 상피 세포와 결합 조직 (또한 점막하 또는 고유 층라고도 함)로 분리 할 수 있습니다 저작 점막의 유형입니다. 치은 및 인접 치아의 해부학 적 구조는 박테리아가 지속적으로 로컬 면역 체계를 도전 플라크 (바이오 필름)을 상주하고 발전 할 수 있습니다. 치주 질환 2를 칭했다 조건 - 결과적으로 염증 반응은 특정 상황에서 파괴되고 잇몸에 개발하고 있습니다. 기본적으로, 플라크에 의한 치주 병변은 치은염과 치주염으로 나눌 수 있습니다. 치은염은 잇몸에 국한되는 로컬 염증 반응의 가역적 인 상태를 나타냅니다. 치주염은, 다른 한편으로는, 돌이킬 수없는 파괴적인 과정이다하는 부착 장치 (치조골, 치주인대, 백악질과 치은은 3) 파괴된다.
잇몸이 치주 질환 4시 등의 이펙터와 유도 두 사이트를 제공하기 위해 제안되었다. 인간의 연구는 치과 플라크에 대한 응답으로, 면역 효과기 세포와 분자가 동적으로 침투하거나 출발 잇몸 5-7 것을 제안했습니다. 이 활동은 치주 파괴 8,9에 중요한 역할을하는 것으로 나타났다. 인간....
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사전에 준비 :
1. 위의 잇몸 절제 기법
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잇몸 세포 유동 세포 계측법 분석의 예를 제시한다. 2 마우스에서 풀링 된 치은 세포 LSR II 흐름 cytometer에에서 실행 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석 하였다. 그림 3A는 사이드 분산 형 (SSC) 대 앞으로 분산 형 (FSC) 플롯 순진 생쥐에서 치은 세포의 분포를 보여 주었다. 식별 할 수 게이팅 전략 (I) 림프구 (II) 단핵구 / 돌기 세포 그리고 (iii) 과립구가 표시됩니다. 비교 목적을 위해, 우리는 또한 P.에서 정제 잇몸 세포를 설명 FACS 플롯을 제시 gingivalis는 이십일일 우리가 이전에 (그림 3B) 기술로 실험 치주염의 설정에서 경구 투여 후 쥐를 감염. 순진 생쥐에 비해 다양한 면역 세포 인구의 증가는 쉽게 감염된 생쥐에서 발견 할 수 있습니다. 다음으로, 우리는 조혈 마커 CD45 (그림 4A)를 표현하는 세포 게이트에 의해 처리 된 치은에있는 면역.......
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하나의 마우스에서 얻은 상악 치은 조직은 우리가 이전 1 설명한대로 세포와 세포 내 분자를 표현하는 T 및 B 림프구의 하위 인구뿐만 아니라, 자신의 능력을 분석하기에 충분합니다. 그럼에도 불구하고, 희소 한 세포 집단 (예를 수지상 세포에 대한) 관심이 있으며, 그것은 2-3 생쥐 수영장 조직에 권장됩니다. 참고로, 바람직하는 경우, 그것은 할 수 있습니다 다음, 구개 치은 조직 및 소비세 치은 (단계 1.8-1.9의 변경)에 모두 껍질. 또한 하악 잇몸이뿐만 아니라 수집 될 수 있음을 언급한다 여전히, 그 분리는 더 복잡하고 분석을 방해 할 수있는 다른 조직을 포함 할 수 있습니다.
잇몸에 면역 세포를 연구하는 일반적인 기술은 면역과 면역입니다. 이 기술은 잇몸을 통해 표적 분자 / 세포의 분포의 시각화를 활성화하고 다양한 분야의 심사의는 특정 영역을 연구하기 위해 필요합니다. 특정 세포의 생리적 지역화 치은 처리에 의한 유동 세포 계측법에 의해 결정될.......
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저자는 공개 아무것도 없어.
이 연구는 AW, AHH에 젊은 연구자 (GIF 영)에 대한 독일 이스라엘 재단과 박사 I에 이스라엘 과학 AHH로 재단 (제 11분의 1,418) 및 (제 12분의 1,933)에서 교부금에 의해 지원되었다 . AHH 및 AW에 치과 의학의 히브리어 대학 Hadassah 대학에서 Cabakoff 연구 기금 기금.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 콜라겐 분해 효소 유형 II | Worthington Biochemical Corp. | CLS-2 | |
| DNAse I | SIGMA | DN25-1G | |
| EDTA | SIGMA | E6758-100G | |
| Dulbecco's PBS | SIGMA | D8537 | |
| 태아 소 혈청 | Biological Industries | 04-121-1 | 열 불활성화 |
| 진공 구동 필터 | 제트 Biofil | FPE-204-500 | |
| 5ml 폴리스티렌 둥근 바닥 튜브 | BD 팔콘 | 352052 | |
| 세포 여과기 70 μ m | SPL Lifesciences | 93070 | |
| 조직 배양 접시 35× 10mm | NUNC | 153066 | |
| BD Cytofix/Cytoperm | BD | 554714 | |
| 안티 마우스 CD11c 항체 | Biolegend | 117305 | Clone N418 |
| 안티 마우스 CD45.2 항체 | Biolegend | 109819 | Clone 104 |
| 안티 마우스 CD4 항체 | Biolegend | 100413 | Clone GK1.5 |
| 안티 마우스 CD8a 항체 | Biolegend | 100733 | 클론 53-6.7 |
| 안티 마우스 CD3 항체 | Biolegend | 100214 | 클론 17A2 |
| 안티 마우스 CD326 (Ep-CAM) 항체 | Biolegend | 118219 | 클론 G8.8 |
| 안티 마우스 CD207 (랑게린) 항체 | Imgenex | DDX0362D | Clone 929F3.01 |
| 안티 마우스 I-Ad (MHC-II) antobody | Biolegend | 115010 | 클론 39-10-8 |
| LSR II 유세포분석기 | BD Biosciences | ||
| FlowJo 소프트웨어 v 7.6.5 | 트리 스타 |
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