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방법 논문

깨어있는 행동을 한 쥐의 만성 신경 녹음을위한 마이크로 드라이브 배열의 건설

21K 조회수

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DOI:

10.3791/50470

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2013년 7월 5일

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이 논문에서

요약

마우스의 뇌 신호의 생체 전기 생리학 기록에 대한 마이크로 드라이브의 설계와 어셈블리가 설명되어 있습니다. 튼튼한 driveable 캐리어 미세 번들을 부착하여,이 기술은 장기적이고 안정적​​인 신경 녹음을 허용합니다. 경량 디자인은 동물 다음과 같은 드라이브 주입에 의한 제한 행위 성능을 할 수 있습니다.

초록

동물 실험 관련 업무에 종사하는대로 자유롭게 행동 동물의 두뇌에서 최첨단의 전기 생리학 녹음, 연구자가 동시에 각각의 세포에서 신경 및 행동 잠재력의 인구에서 현지 필드 잠재력 (LFPs) 검사 할 수 있습니다. 만성 이식 마이크로 드라이브는 몇 주간의 기간 동안 지속하는 두뇌 녹음을 허용합니다. 소형 드라이브 및 경량의 구성 요소는 마우스와 같은 작은 포유 동물에서 발생하는 이러한 장기 녹음을 허용합니다. 각 전선은 12.5 ㎛의 직경을 가지고있는 네 개의 전극을 단단히 꼰 번들로 구성 tetrodes를 사용하여, 그것은 이러한 대뇌 피질, 해마, 그리고 subiculum의 등의 표면 뇌 영역에서 생리 활성 뉴런을 분리 할 수​​ 있습니다뿐만 아니라, 이러한 선조체와 편도로 깊은 지역으로. 동물이 varie를 가진 도전으로 또한,이 기술은 안정성, 고 충실도 신경 녹음을 확실히행동 작업의 타이. 이 원고는 마우스 뇌에서 기록하는 최적화 된 여러 가지 기술에 대해 설명합니다. 첫 번째 KΩ의 범위 MΩ에서 자신의 임피던스를 줄이기 위해 자신의 팁을, 우리는 tetrodes를 조작 driveable 튜브에로드하는 방법을 보여줍니다, 골드 플레이트. 둘째로, 우리는 휴대하고 저렴한 재료의 사용과 수직 tetrodes 이동에 대한 사용자 지정 마이크로 드라이브 어셈블리를 구성하는 방법을 보여줍니다. 셋째, 우리는 독립적으로 이동 tetrodes을 수행하도록 설계 시판의 마이크로 드라이브 (Neuralynx VersaDrive)을 조립하는 단계를 보여줍니다. 마지막으로, 우리는 생쥐의 등​​쪽 subiculum의에서 얻은 현지 필드 잠재력과 하나의 단위 신호의 대표적인 결과를 제시한다. 이 기술은 쉽게 전극 배열과 마우스 뇌의 녹화 계획의 다른 유형을 수용하기 위해 변경 될 수 있습니다.

서론

생체 내에서 세포 신경 신호를 기록하기위한 미세 기술의 사용은 신경 과학 1, 2 긴 소중한 전통을 가지고있다. 자유롭게 행동 동물에있는 많은 뇌 영역에서 전기적 활동을 기록하는 기능은, 그러나, 3보다 정교하고 사용자 친화적되고 수집, 분석 및 신경 신호의 차별에 대한 소프트웨어 패키지로 점차 일반화되고 더 최근의 기술 4. 소프트웨어 측면에서 기술 진보는 또한 쥐와 같은 작은 포유 동물에 녹음 충분히 조정 된 이식 장치의 무게와 부피의 감소, 동반되었다. 경량 (주로 플라스틱) 구성 요소를 사용하여, 연구진은 전극 또는 뇌 영역의 다양한 5-7를 대상으로 tetrodes의 독립적 인 위치를 허용 마이크로 드라이브를 구성 할 수 있습니다. 등으로도 깊은 두뇌 구조편도 6 선조체 5, 일상적으로 적절 긴 드라이브 나사의 선택으로 타겟팅 할 수 있습니다. 이 기록 기술은 9 연구진은 고 충실도 신경 신호를 얻을 수 있도록하고 단일 뉴런의 전기적 활동과 등록에 세포 내 8을 기록했다. 이식 10 후 최대 2 개월에 대한 마이크로 드라이브의 이러한 유형을 사용하여, 우리는 성공적으로 생....

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프로토콜

1. 사극 제작

  1. 캘리포니아 미세 와이어에서 절연 12.5 μm의 (0.0005 ") 직경의 코어 백금 - 이리듐 와이어를 사용하여 시작합니다. 전선의 길이가 목표 구조에 대한 적절한 길이로 절단해야합니다. 예를 들어, 적어도 30 ㎝ 길이로 선을 자르 지느러미 subiculum의 또는 해마를 대상으로합니다.
  2. 길이 15cm 될 두 개의 병렬 전선이 있도록 중앙에 와이어를 접습니다. 길이 7.5 cm의 네 개의 평행 한 선을 형성하는 수평 팔을 통해이 와이어의 중간 점을 주름 잡아 드리운다. 다음 네 개의 와이어 번들을 생성, 주름 잡아 드리 워진 전선의 아래쪽에있는 고무 코팅 클립을 첨부합니다.
  3. 고무 철사 긴장되어 있는지 확인하는 모터 사극 스피너에 클립,하지만 회전 과정에서 중단되므로 너무 팽팽하거나 베어링없는 무게를 놓습니다.
  4. "수동"모드로 사극 스피너를 전환하고 시계 방향으로 와이어를 회전하는 "오른쪽"으로 조이스틱을 누릅니다. 회사극을 형성하는 네 개의 와이어 꽉 번들을 만들고, 약 2 Hz로 회전합니다.
  5. 조이스틱 "최대"를 눌러 정지 후 80 시계 방향으로 회전을 적용합니다. 이 일시 정지 모터 회 전자됩니다. 다음으로, 사극에 긴장을 해제하기 위해 20 반 시계 방향 ( "왼쪽") 회전을 적....

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결과

마이크로 드라이브를 이식하고이 Neuralynx 살쾡이-8, 신경 신호를 기록하기위한 필요로 의도 두뇌 대상, 증폭 된 데이터 수집 시스템에 전극을 낮추는 후. 현지 필드 잠재력을 대표하는 신경 녹음 (LFPs)와 마우스 지느러미의 subiculum의에서 하나의 단위 활동 전위는 (종종라고 "스파이크")에 표시됩니다 그림 2. LFP 신호는 0.1 ~ 500 Hz의 사이에 필터링 3 kHz와 밴드 패스 샘플링 하였다 ( 그림 2A와 2B). 그림 2A 제대로 접지 된 신호를 네 개의 연속 샘플 LFP 채널을 보여줍니다. 이 신호는 매우 잡음이 나타날 쉽게 주어진 진폭 범위 내에서 포화. 그림 2B는 세타 범위에서 명확하게 눈에 보이는 네트워크 진동 (4-12 Hz에서) 잘 접지 LFP 신호에서 4 채널.......

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토론

우리는 세포 단위와 마우스 필드 잠재력 활동의 기록을 위해 빛과 소형 마이크​​로 드라이브를 구성하는 기술의 집합을 설명했습니다. 아크릴 유리 (메틸 메타 크릴 레이트)에서 유행 기지와 사용자 정의 마이크로 드라이브를 구축하여, 핵심 시스템은 쉽게 여러 드라이브 및 신경 영역의 다양한 배열의 타겟팅 적용 할 수 있습니다. 우리는 성공적으로 여러 뇌의 대상에서 녹음 및 마우스에서 레코딩을위한 큰 어레이 시스템을 수정했습니다. 추가 수정과, 동력 구동 요소는 원격 있도록 통합 될 수 있으며, 잠재적으로 더 정확한 전극 배치 7.

우리는이 기록 장치 단일 microwires 또는 tetrodes 같은 와이어 번들 중 하나를 활용에서 연구원 유연성을 제공 것을 강조하고 싶습니다. 큰 직경의 단일 microwires 더 강력하고 뇌 조직 내 LFPs의 기록에 더 적합합니다. WHI르 tetrodes도 LFPs을 기록하는 데 사용할 수 있습니다, 그들은 하나의 단위 .......

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공개 사항

저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

감사의 글

우리는 그의 도움이 프로젝트 초기에 공헌 다니엘 카르 감사합니다. 우리는 또한 삽화와 이미지 그녀의 도움 루크레시아 노 보아 주셔서 감사합니다. 이 작품은 NIH / NIAID 프로그램에 부여 5P01AI073693-03에 의해 지원되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
0.0005" (12.5 μ M) 직경 백금-이리듐 와이어 캘리포니아 파인 와이어CFW#100-167HML VG 절연 www.calfinewire.com
0.002" (50 μ M) 직경 Stableohm 675 와이어캘리포니아 미세 와이어CFW# 100-188HML 절연 Ni-Cr
폴리아미드 튜빙Polymicro Technologies106815002099 미크론 I.D., 166 미크론 O.D. www.polymicro.com
brass guidesWorld Plastics Inc3.3 x 6.6 mm
Delrin blocksWorld Plastics Inc3.13 x 2.5 mm
Fillister 헤드 황동 나사J.I. Morris Co.00-90 x 1/2드라이브 나사 www.jimorrisco.com
hex 황동 너트J.I. Morris Co.00-90
Fillister 머리 황동 나사J.I. Morris Co.000-120 x 3/32EIB 마운트 및 접지 나사
플렉시 유리 아크릴Canal Street Plastics5mm 두께, 투명, www.cpcnyc.com
cyanoacrylateKrazy Glue2g 튜브
전자 인터페이스 보드NeuralynxEIB-18www.neuralynx.com
non-cyanide gold solutionSIFCOSIFCO 5355www.sifcoasc.com
VersaDrive 4Neuralynxfour tetrode model
tetrode assembly stationNeuralynx
전동 테트로드 스피너Neuralynx테트로드 스피너 2.0
VersaDrive 지그Neuralynx
납땜 인두라디오 판잣집64-2802Bwww.radioshack.com
nanoZNeuralynx
스몰 비트 드릴/드라이버램 제품Rampower 35풋페달 컨트롤러, www.ramprodinc.com
드릴 비트Small Parts, Inc.3/32" 비트, www.smallpartsinc.com
해부 현미경OlympusSZ-60www.olympusamerica.com
히트 건AlphawireFit gun 3"1" 설정만 사용, www.alphawire.com
26 AWG 구리선Arcor ElectronicsF26접지선, www.arcorelectronics.com
납땜 플럭스Eagle2 oz, #205
0.02" 직경 솔더Kester24-6337-0010 www.kester.com
benchtop viseVacu-ViseModel 300
광섬유 조명NikonMKII듀얼 라이트 암, www.nikon.com
5분 에폭시연합군 전자 제품25ml, www.alliedelec.com
미세 핀셋Roboz Surgical Instrument Co.RS-4907, RS-5010INOX 재료, www.roboz.com
마이크로 해부 가위Roboz Surgical Instrument Co.RS-5880

표 1. 사극체 및 마이크로드라이브 구성에 사용되는 재료 및 시약.

참고문헌

  1. Recce, M. L., O'Keefe, J. The tetrode: a new technique for multi-unit extracellular recording. Soc. Neurosci. Abstr. 15, 1250(1989).
  2. O'Keefe, J., Recce, M. Phase relationship between hippocampal place units and the EEG theta rhythm. Hippocampus.

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