2001 년, UCLA의 연구자들은 성체 줄기 세포의 인구의 분리는 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 나부터 ASC라고 기술. 이 문서는 콜라게나 제를 사용 설명서, 소화 효소의 프로토콜을 사용 lipoaspirates에서부터 ASC의 분리를 설명.
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이 논문에서
요약
초록
2001 년에, 캘리포니아 대학, 로스 앤젤레스의 연구자들은 초기 가공 Lipoaspirate 세포 또는 PLA 세포를 지칭 liposuctioned 지방 조직에서 성체 줄기 세포의 새로운 인구의 격리를 설명했다. 그 후,이 줄기 세포는 지방 - 유래 줄기 세포 또는부터 ASC로 개명 된 줄기 세포 연구 및 재생 의학 분야에서 가장 인기있는 성체 줄기 세포 집단 중의 하나가되기 위하여 갔다. 기사의 수천은 지금 뼈 재생, 말초 신경 수리 및 심장 혈관 엔지니어링을 포함하여 재생 동물 모델의 다양한부터 ASC를 사용하는 방법을 설명합니다. 최근 기사는 병원에서부터 ASC를위한 용도의 무수한을 설명하기 시작했다. 이 문서에 나와있는 프로토콜을 수동 및 효소 화장품 절차에서 얻은 lipoaspirates 많은 양에서부터 ASC를 분리하기위한 기본 절차를 설명합니다. 이 프로토콜은 쉽게 확대 또는 축소 accommod 아래로 할 수있다lipoaspirate의 볼륨을 먹고 복부 성형술 및 기타 유사한 절차를 통해 얻은 지방 조직에서부터 ASC를 분리하기 위해 적용 할 수 있습니다.
서론
2001에서, 지방 조직에서 다 능성 줄기 세포의 추정 인구는 저널 조직 공학 1에 기재 하였다. 이 세포는 성형 수술을 통해 얻은 처리 lipoaspirate 조직에서 자신의 유도에 의한 이름 가공 Lipoaspirate 또는 PLA 세포를 부여했다. 이 문서에서 설명하는 분리 방법은 지방 조직 2의 기질 혈관 분획 (SVF)의 분리에 대한 기존의 효소 전략을 기반으로했다. SVF는 조직 배양 기판 (2, 3)에 밀착 아직 적혈구 세포, 섬유 아세포, 내피 세포, 평활근 세포, 혈관 주위 세포와 전 지방 세포의 최소 처리 인구로서 정의되었다. 시간이 지남에 따라이 SVF의 배양은 이러한 오염 된 세포 집단의 대부분을 제거하고 부착 성, 섬유 아세포의 집단 발생하는 것이 제안된다. 이러한 섬유 아 세포는 미리 것으로 지난 40 년 동안 문헌에서 확인 된지방 세포. 그러나, 우리의 연구 그룹은이 세포가 중배엽 다 능성을 보유하고 PLA 세포로 부착 SVF 인구 이름 것을 보여 주었다. 많은 다른 연구 그룹에 의해 후속 연구 (리뷰가 4 참조) 내배엽과 외배엽의 잠재력을 모두 제안하고,이 잠재력을 추가했습니다. 그 이후로,이 세포에 대한 많은 추가적인 조건이 문헌에 등장했다. 컨센서스의 일부 유형을 제공하기 위하....
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프로토콜
여기에 표시된 프로토콜은 소화 효소 및 차등 원심 분리를 사용하여 화장 절차를 통해 얻은 lipoaspirates에서부터 ASC의 매뉴얼 격리를 설명합니다. 이 프로토콜은 먼저 2001에서 저널 조직 공학에 게시 된 위치 결과 세포 때문에 lipoaspirates에서 그들의 분리의 가공 Lipoaspirate 세포 또는 PLA 세포라고했다. 그러나, 용어 PLA 세포는 이제 용어의 지방 유래 줄기 세포 또는 필드에게 명명법 측면에서 적합성의 일종을 제공하기부터 ASC로 대체되었습니다. 이 프로토콜을 통해 고립 된 세포는 (검토를 위해 4 참조) 시험 관내 및 생체 내에서 모두 중배엽 잠재력을 가지고 많은 것으로 나타났다. 또한, ASC의 외배엽과 내배엽 잠재력도 4를 탐구하고 있습니다. 분리 기술은 단순하고 간단하고 완료하는 데 약 1 시간이 필요합니다. 그 결과 세포의 표준 조직 배양 조건에서 배양된다. 문화 시간에 ASC 인구는 더 균질 쉽게 확장 및 문화에 장기적으로 좋은 가능성을 보여 섬유 아세포의 세포로 구성되어 있습니다.
참고 : 필요한 장비의 다음 조각은이 문서의....
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결과
프로토콜의 개요는 위의 큰 볼륨 lipoaspirate 샘플에서 SVF의 분리에 대한 설명서, 효소 방법에 대해 설명합니다. 이 SVF 내에서 ASC 등 다양한 세포 집단이 있습니다. 많은 연구는 표준 조직 배양 조건이 SVF를 배양하는 ASC 형식으로 주로 구성 될 가능성이 접착 섬유 아세포 인구 선택 것이라고 제안한다. 이과 일치, 우리는 배양 SVF 펠릿의 주요 오염 세포 유형, 즉 적혈구, 평활근 세포와 내피 계통 (1)의 세포의 본질적 될 것을, 유동 세포 계측법 및 면역 형광 사용하여 보여 주었다. 그 결과 ASC 인구는 (그림 2) 상대적으로 외관 동질 및 섬유 아세포와 같은 세포로 구성되어 있습니다. 이 자기편부터 ASC 표준 조직 배양 조건에서 배양에서 잘 성장하고 수많은 분자 및 세포 B에 적합하다 시간 1을 두 배로 적당한 인구를 전시생체 내 시험 관내 및 재생 연구에 iology 연구. 그러나 고립 된 S.......
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토론
부터 ASC의 절연을위한 지방 조직은 여러 가지 형태가 있습니다 : 주사기 추출 또는 흡입 보조 lipoplasty (즉, 지방 흡입) 중 하나를 통해 얻은 작은 조각으로 절제 또는 lipoplasty을 통해 얻은 조직의 단단한 조각에서. 충돌하는 연구는 16, 17를 제시 한 것처럼 더 SVF 세포 (이에부터 ASC)가 절제된 또는 흡입 지방 샘플에서 얻을 수 있는지 여부는 불분명하다. 그것은 지방 조직의 형태 중 하나는 한 운전자가 자신의 분리 기술에 실력으로 SVF 세포부터 ASC의 분리에 적합한보다 더 많은 것을 할 수있다. 그러나, 지방 흡입이 점에서 절제를 통해 이점을 보유하고 있는가 덜 침습적이며, 훨씬 적은 수술 치료가 필요합니다. 지방 흡입술의 유형과 같은 기술을 포함하여, 지난 십년 동안 증가하고 있지만, 초음파를 이용한 전력 보조 레이저를 이용한 지방 흡입 (18)은, 가장 일반적인 부어 오르는 지방 흡입 유지하는 지방 구획 (19)을
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공개 사항
이 논문의 저자는 캘리포니아 대학의 리젠트과 Cytori 치료학 허가가 소유 한 특허의 공동 발명자이다.
감사의 글
저자는 인정하고자하는 등 기술 된 프로토콜 및부터 ASC의 그 분리의 발전에 기여하는 추가 연구 인력 감사 : 박사 H. 피터 로렌스, MD, 박사 히로시 Muzuno, MD, 박사 제리 황, MD를 박사 아담 카츠, MD, 박사 윌리엄 푸트 렐, MD, 박사 룽 장, DDS, 박사, 박사 라리사로드 리 게스, MD, 박사 제니 알폰소, 박사, 박사 존 프레이저, 박사. 발표 결과는 NIAMS와 NIDCR 연구소를 포함하여 건강의 국립 연구소에서 연구 보조금에 의해 부분적으로 투자되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Reagent | |||
| DMEM (Dulbecco’ Eagle’의 수정; S Medium) | Mediatech Cellgro | 10-013-CV | with 4.5 g/ml 포도당, L-글루타민, 피루브산 |
| 나트륨 페니실린/스트렙토마이신 | Mediatech Cellgro | 30-002-CI | 10,000 IU/ml 페니실린/10,000 μ g/ml 스트렙토마이신 |
| 암포테리신 B | Mediatech Cellgro | 30-003-CF | 250 μ g/ml 암포테리신 B |
| 10X PBS (포스포 완충 식염수) | Mediatech Cellgro | 25-053-CI | 칼슘 없음, 마그네슘 없음 |
| Trypsin/EDTA | Mediatech Cellgro | 20-031-CV | 0.25 % trypsin/2.21mM EDTA |
| Collagenase type IA (from Clostridium histolyticum) | Sigma | C2674 | crude preparation; < 125 콜라겐 소화 단위/mg 고체 |
| FBS(소 태아 혈청) 열 비활성화 | Gemini Bioproducts | 100106 | USDA 소스, 열 비활성화 |
| 10ml 혈청학 피펫 | Genesee Scientific | 12-104 | |
| 25ml 혈청학 피펫 | Genesee Scientific | 12-106 | |
| 50ml 폴리프로필렌 원심분리기 튜브 | Genesee Scientific | 21-106 | |
| 100mm 조직 배양 접시 | Genesee Scientific | 25-202 | |
| 150mm 조직 배양 접시 | Genesee Scientific | 25-203 | |
| 500ml 스테리업 필터 유닛 | Millipore | SCGPU05RE | PES 멤브레인, 0.22 μ m pore |
| 세포 여과기 | FisherBrand | 22-363-549 | 100 μ m 나일론 메쉬 |
| 덱사메타손 - 수용성 | 시그마 | D-2915 | |
| L-아스코르브산 2 인산염 | 시그마 | A-8960 | |
| β-글리세로인산이 나트륨 염 | 시그마 | G-9422 | 글리세로인산 |
| 린 | 시그마 | I-6634 | 소 췌장 |
| 인도메타신 | 시그마 | I-7378 | |
| apo-transferrin | 시그마 | T-4382 | |
| TGFβ 1 | R& D Systems | 240-B-002 | 재조합 인간 |
| 오일 레드 O | 시그마 | O-0625 | |
| 알시안 블루 | 시그마 | A-5268 | |
| 질산은 | 시그마 | S-0319 | |
| 염산 | Fisher Scientific | A144 | |
| 파라포름알데히드 | Fisher Scientific | 30525-89-4 | 16% 재고 |
| [헤더] | |||
| 장비 필요 | |||
| Class II A/B Biosafety hood | Thermo Scientific | 은 후드에 흡인을 위한 진공 라인이 있는지 확인합니다 | |
| 벤치탑 원심분리기 | Hermle Labnet | Z383 | 50ml 튜브용 스윙 아웃 로터 필요, 1200xg |
| 수조 | Fisher Scientific Isotemp | S52602Q | 5-10L 용량, 37C 가능 |
| 자동 피펫 보조기 | Drummond Pipette Aid XL | 4-000-105 | |
| CO2 인큐베이터 | Thermo Scientific | Forma 310 | 직접 가열 또는 수포 재킷 |
참고문헌
- Zuk, P. A., et al. Multi-lineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Engineering. 7 (2), 211-226 (2001).
- Rodbell, M. Metabolism of isolated fat cells. J. Biol. Chem. 239, 375-380 (1964).
- Poznanski, W. ....
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