방법 논문

헤로인은 절제 쥐의 추구에 장시간 음식 제한의 효과를 연구하기위한 절차

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DOI:

10.3791/50751

⸱

2013년 11월 11일

 ,  , 
1Department of Psychology, Center for Studies in Behavioural Neurobiology/Groupe de Recherche en Neurobiologie Comportementale, Concordia University

이 논문에서

요약

음식 제한 쥐에서 추구하는 약물의 강력한 확대의 데모를 허용하는 절차가 설명되어 있습니다. 헤로인 자기 관리 교육에 이어, 쥐들은 약간 제한하는 음식이 기간 동안, 마약없는 환경에서, 금욕 기간을 통해 이동합니다. 약물 추구는 다음 약물 관련 환경에서 테스트됩니다.

초록

인간의 마약 중독자에 마약 관련 단서 또는 이전에 약물 복용과 연관된 환경에 노출 절제시 재발을 트리거 할 수 있습니다. 또한, 다양한 환​​경 적 도전이 효과뿐만 아니라 증가 지속적인 약물 섭취를 악화시킬 수있다.

우리가 여기에서 설명하는 절차는 절제 쥐에서 추구하는 약물의 증가로 표현 약물 갈망에 일반적인 환경 문제, 음식 제한의 영향을 강조한다.

쥐 만성 정맥 정맥 카테터와 이식 한 다음의 레버를 눌러 훈련 10~12일에 걸쳐 IV 헤로인. 헤로인 자기 관리 단계 다음 래트 조건화 챔버에서 제거되고, 적어도 14 일 동안 동물 관리 시설에서 보관. 한 그룹은 음식 (물리게 그룹)에 대한 무제한 액세스에서 유지하면서, 제 2 그룹 (FDR 그룹)은 MI에 노출자신의 체중 결과 LD 음식 제한식이 요법은 nonrestricted 체중의 90 %로 유지. 음식 제한의 날 14 일 쥐가 다시 약물 교육 환경에 전송하고, 약물 추구하는 시험 (예. 레버 프레스 헤로인 배송에 포함되지 않는) 멸종 조건에서 실행됩니다.

여기에 제시된 절차는 음식 제한 쥐에 시험 당일에 헤로인 추구의 매우 강력한 증가가 발생합니다. 또한, 우리는 이전에 사용했던 심각한 식량 부족 조작에 비해, 현재의 절차는 약물 추구에 칼로리 제한의 영향에 대한 더 많은 임상 관련 모델입니다. 또한, 쥐가 인기 복직 절차의 중요한 구성 요소 인 약물 추구 시험 전에 멸종 훈련 단계를 통해 갈 필요가 없습니다으로 인간의 조건에 가까운 수 있습니다.

서론

약물 중독의 치료에 큰 어려움 중 하나는 심지어 금욕 1,2 연장 기간 후 재발의 높은 비율이다. 인간 중독자의 연구는 재발하는 마약 관련 개별 큐 또는 환경 3 스트레스 생활 사건 4에 대한 노출과 같은 환경 문제의 중요한 기여를, 발견했습니다. 약물 복용과 갈망에 영향을 미칠 것으로 밝혀졌다 일반적인 환경 문제는 만성 음식 제한입니다. 예를 들어, 만성 칼로리 제한은 증가 된 담배를 흡연 5와 연관되어 있다고보고되어있다.   또한, 다이어트 심각도 (칼로리 제한)을 적극적으로 젊은 여성 6 약물 사용의 증가 유행과 상관된다. 그러나 기본이되는 뇌의 메커니즘은 완전히 이해되지 않습니다.

때문에 인간 연구, 동물 모델의 H에 관한 실용적이고 윤리적 고려 사항관련 신경 메커니즘을 식별하기 위해 개발되었다 번가. 우리는 이전에 급성 (48 시간) 음식 부족 9,10에 노출 된 쥐의 추구 끄는 약물의 재개를 보여주기 위해 복직 절차 7,8를 사용했습니다. 그러나, 회복 과정의 필수적인 부분은 약물 중독 치료 (11)의 일반적인 기능없는 (그러나 회복 절차의 유효성에 대한 포괄적 인 설명은 엡스타인 외. 12 참조) 소등 기간이다. 또한, 인간 만이 만성 음식 제한하지만, 급성없는 음식 부족식이 조작의 특별한 경우에 효과적으로 약물 복용 5,13을 증가 표시했다.

결과적으로, 우리는 약물 추구 만성 음식 제한의 효과에 대한 연구를 허용하는 "절제 절차"(14)를 제안했습니다. 우리가 최근 h의 강력한 증가를 보여 주었다이 절차를 사용하여eroin 가벼운 음식 제한 15 14 일에 노출 된 후 절제 쥐의 추구.

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프로토콜

1. 동물

모든 쥐 동물 관리에 캐나다위원회의 가이드 라인과 모든 실험 절차에 대한 승인이 콩 코디 아 대학의 동물 연구 윤리위원회에 의해 부여 된에 따라 처리됩니다.

  1. 275~300g (남성) 또는 225-250g (여성)에 쥐를 얻습니다. 옥수수 침구 및 파쇄 된 종이를 포함하는 표준 플라스틱 케이지에서 수술까지 쌍의 주택 쥐.
  2. 반전 명암주기 (오전 9시 30 분 소등)에 쥐를 유지한다.
  3. 확실히 음식과 물이 금욕 기간을 제외하고 임의로 사용할 수 있습니다합니다. 우리는 일정한 쥐 차우 (20.9 %의 단백질, 67.2 %의 탄수화물과 11.8 %의 지방을)를 사용합니다.

2. 카테터 및 커넥터

  1. 대량으로 카테터를 확인하고 오토 클레이브 멸균 다음 오랜 기간 동안 필요에 따라 사용합니다.
  2. 12cm 길이의 조각에 실라 스​​틱 튜브를 잘라.
    1. 작은 배치, 이쑤시개를 사용카테터 주위에 실리콘의 하락, 끝에서 3cm.
    2. 24 시간 동안 실리콘 건조하자 다음 압력솥과 카테터를 저장합니다.
  3. 벤드 플라스틱 받침대에 직각, 연결이 될 것입니다 "10까지"정맥의 긴 튜브, 다음 압력솥 및 저장.
  4. , 조립 무균 플라스틱 받침대에 약 절반 "5 - 업"정맥의 구부러진 금속 튜브를 통해 실라 스​​틱 튜브의 "긴"쪽을 눌러 수술 당일에 카테터.
    1. 타이곤 튜브 및 멸균 식염수로 채워진 1 ML의 주사기에 무디게 22 G 바늘을 통해 "10까지"튜브를 연결합니다.
    2. 방해받지 않는 흐​​름을 보장하기 위해 카테터를 통해 식염수 세척합니다.

3. 정맥 도관 수술

  1. 수술을하기 전에 동물 보호 시설 (ACF)의 쥐 적응 일주일 허용합니다. 하체 무게와 쥐의 수술을 수행하지 마십시오3백-3백25g (남성) 또는 250~275그램 (여성)보다.
  2. 수술 전에 무게와 케타민 / 자일 라진의 혼합물로 쥐를 마취 (13분의 90 ㎎ / kg, IP).
    1. 면도 후 알코올 및 수술 스크럽 머리와 (근접 목의 기초에) 오른쪽 어깨의 영역을 청소합니다.
    2. 감염을 방지하기 위해 페니실린 (450,000 IU / 쥐, 사우스 캐롤라이나)을 주입하고, 수화에 대한 식염수 (SC)의 2 ㎖. 마취에 의해 유도 된 건조를 방지하기 위해 쥐의 눈에 눈물 젤을 적용합니다.
  3. 그 복부에 쥐를 놓고 눈 사이의 머리의 상단에 메스를 사용하여 절개를하고, 꼬리 쪽 쥐의 귀를 향해.
  4. 표면에 테이프로 팔과의 뒷면에있는 쥐를 놓습니다. 집게와 함께, 단지 쇄골에 주동이의 절개 영역의 피부를 들어 올리고 세로 작은 가위로 잘라 1cm를 확인합니다.
  5. 두 직선 집게를 사용하여, 외부 경정맥의 VEI 때까지 지방과 다른 조직을 분리N은 노출되어있다.
  6. 주변 조직에서 혈관을 들어 올려 분리하는 정맥에서 바로 포셉의 팁을 밀어 넣습니다. 주의 깊게 준수 조직에서 혈관을 청소 한 후 들어 올려 약간 뻗어 유지하기 위해 정맥에서 곡선 집게를 삽입합니다.
  7. 확인 작고, V 자형 작은 봄 가위를 사용하여 혈관의 상면에 잘라.
    1. 컷은 혈관 확장제를 사용하여 열 잡고 실리콘 하락 절개 포인트가 될 때까지 심장을 향해 정맥에 카테터의 "짧은", 3cm 팁을 진행.
    2. 가능한 한 멀리 꼬리 하나, 실리콘 드롭 단지 주동이의 하나 가능한 한 멀리 주동이의 세번째 : 3 봉합 정맥에 카테터를 연결.
    3. 그것이 방해 상태를 유지하고 봉합이 너무 꽉 아니라는 것을 보장하기 위해 각 봉합 다음 카테터를 통해 식염수를 전달합니다.
  8. 팔 주위에 테이프를 제거하고 아래로 쥐의 복부 측면을 배치합니다.
    1. 지혈 (T)를 삽입머리 절개의 꼬리 쪽의 hrough 및 피하 "포켓"를 만들기 위해 기본 조직으로부터 피부를 분리하려면이 버튼을 누릅니다.
    2. 카테터가 삽입 된 어깨에 오프닝으로 피부 아래에 지혈을 안내합니다.
    3. 지혈을 사용하여 결합 조직을 통해 휴식, 단단히의 기초 아래, 가장 주동이의 시점에서 카테터를 클램프 "10입니다."
  9. "5 - 업"을 분리하고 피부 아래와 쥐의 머리의 상단에있는 절개 밖으로 카테터의 긴 끝을 실.
    1. 지혈이 고정 된 위치 아래에 카테터를 절단의 긴 끝 다시 연결하기 위해 가위를 사용하여 "10 업을."
    2. 모든 방법 플라스틱 받침대에 "10까지"의 금속 샤프트를 따라 카테터를 빼냅니다. 자유로운 흐름을 보장하기를 통해 식염수를 전달합니다.
  10. 그 뒷면에있는 쥐를 놓고 쇄골 근처에만 절개를 봉합. 헤드 절개 레마한다열려있는.
  11. 정위 장치에서 쥐를 놓습니다. 불독 클램프 및 청소를 사용하여 머리의 상단에있는 절개의 피부를 멀리 당겨 두개골의 표면을 건조.
  12. 두개골에 4-5 구멍을 드릴 헤드 캡을위한 발판 역할을하는 구멍에 기계 나사를 삽입, 수동 드릴 비트를 사용합니다.
    1. 나사 사이에 "10까지"커넥터를 배치하고 이전에 지혈을 사용하여 만들어 피하 "포켓"에 카테터의 과잉 길이를 감싸.
  13. 두개골의 상단에 "10까지"를 부착하는 치과 용 시멘트를 사용합니다. 시멘트가 완전히 말린 후 정위 장치에서 쥐를 제거합니다.
  14. (, 5 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나 진통제)과 식염수 2 ㎖ (SC) 케토 프로 펜으로 구성되어 쥐의 수술 치료를 제공합니다. 통증 관리를 지원하기 위해 수술을 다음과 추가로 2 일 동안 케토 프로 펜을 관리 할 수​​ 있습니다.
  15. 매일 시작 48 시간 수술 후, 플러시 쥐 w멸균 식염수에 헤파린과 겐타 마이신의 i 번째 혼합물 (7.5 IU + 12 μg, 0.2-0.3 ml)에 1 ~ 2 일 복구 기간 동안과 헤로인 자기 관리의 단계를 통해.

4. 행동 절차

헤로인 추구의 음식 제한에 의한 증가의 절차에 대한 타임 라인은 그림 1에 제시되어있다.

  1. 조건화 실.
    1. 집에 쥐가 개별적으로 조건화 실에 팬이 장착 나무 구획을 감쇠 소리에 둘러싸인.
    2. 각 챔버는 스테인레스 스틸 금속 격자 바닥, 전면 및 후면 유리 야 벽과 두 개의 금속 패널 측벽으로 구성되어 있습니다. 마운트 두 개의 9cm 오른쪽 측벽의 바닥에서 철회 레버에게, 각 레버 위의 큐 - 빛을 찾습니다. 비 약물 페어링 (비활성) 레버에 응답하는 것은 어떤 프로그램 결과가 없을 때 약물 쌍 (활성) 레버에 응답하는 것은 주입 펌프를 활성화합니다.
    3. 활성 레버 위에 톤 모듈 (2.9 kHz에서)를 찾아 왼쪽 측벽의 상단 중앙에 빨간 집 빛을 놓습니다.
    4. 금속 스프링을 보호하는 액체 회전과 타이곤 튜브를 통해 카테터로 약물 펌프를 연결합니다. 또한, 식품 호퍼와 음식과 물에 대한 무제한 액세스를 허용 물병 각 실을 장비.
  2. 습관 일 :
    1. 수술에서 회복 다음에는 조작 적 훈련 챔버에 쥐를 이동하고 24 시간 습관화 기간 동안 수 있습니다.
    2. 금속 스프링에 쥐를 연결하지 않고 cue-light/tone 단지를 활성화하지 않습니다.
    3. 활성 레버가 수축 된 남아 있는지 확인하지만, 비활성 레버가 훈련 도중 두 개의 레버 사이의 차별에 도움이 확장되어 있는지 확인합니다.
  3. 헤로인 자기 관리 :
    1. 타이곤 튜브에 5 위로 커넥터를 연결하고 금속 스프링에 연결합니다.
    2. 자기 ADM에 쥐를 허용3 시간 간격으로 구분 된 세 개의 3 시간 세션 동안 10 일 동안 inister 헤로인 (0.1 ㎎ / ㎏ / 주입).
    3. 활성 및 비활성 레버의 확장뿐만 아니라, 집안 조명과의 cue-light/tone 단지의 활성화의 조명 (실험실 9:30 분경) 어두운 단계의 시작 다음 각 세션 시작 30 초.
    4. 집에 조명이 꺼져 활성 레버 위의 큐 라이트 / 톤 복잡한이되는 동안 약물 펌프 (5 초, 0.13 ㎖ / 주입)과 20 초 시간 초과 기간의 개시의 활성화 활성 레버 결과에 대한 응답 (FR-1, 20 초 시간 제한) 활성화. 제한 시간 동안 활성 레버 응답은 기록 만 강화되지 않습니다. 비활성 레버 응답은 기록하지만 프로그램 결과가 없습니다.
    5. 비활성 레버가 1 시간은 다음 날의 첫 번째 세션 이전까지 연장 유지하는 반면 각 3 시간 세션에 이어, 활성 레버가 들어가 있습니다.
  4. 절제와 음식 제한 :
    1. 자기 관리 교육에 이어, 조건화 챔버에서 쥐를 제거하고 개별적으로 ACF에서 그들을 집, 하나의 약물 유실 하루에 음식과 물에 대한 무제한 액세스를 제공합니다.
    2. 음식 (FDR) 제한 또는 물리게, 체중, 훈련의 마지막 오일에서 혼합 및 활성 레버 응답의 수에 따라 일치하는 두 개의 그룹으로 쥐를 나눈다.
    3. 약물 유실 일 후, FDR 쥐 '음식을 제거하고, 13:30 그들에게 쥐 차우의 약 15 g의 먹이. 자신의 기준 BW의 약 90 %로 FDR 쥐 '체중 (BW)를 유지하기 위해 금욕 14 일에 걸쳐 음식의 양을 조절합니다.
  5. 약물 추구 시험 : 금욕 날 (14)의 아침에, 조건화 챔버에 쥐를 반환하고 금속 스프링에 연결합니다. 활성 및 비활성 레버 응답은 동일한 결과를 가지고있는 동안 1 시간 또는 3 시간 세션을 사용(즉, 소멸 조건에서) 약물의 가용성을 제외하고 자기 관리 교육에서의.

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결과

시간이 지남에 따라 체중은 : 일반적인 결과는 체중이 헤로인 자기 관리 교육을 통해 안정적으로 유지 것을 보여줍니다. 자신의 체중을 증가 버리는 수있는 무제한 액세스 절제, 쥐, 동안 음식을 제한하는 것과 자신의 원래 체중의 약 90 % 물리게 쥐 '체중 75-80% (그림 2)에 자신의 체중을 감소하면서 .

주입, 교육을 통해 활성 및 비활성 레버 응답 : 혼합 및 교육 일에 증가를 응답 활성 레버 반면, 응답 비활성 레버를하지 않습니다 (그림 3). 일반적으로 활성 레버 교육 전반에 걸쳐 증가 응답 및 응답의 높은 속도로 안정. 응답 비활성 레버는 쥐가 제대로 두 레버 사이에 차별 것을 의미, 교육을 통해 최소한의 유지. 마지막으로, 촬영 번호 주입 교육 전반에 걸쳐 증가 할 것이다활성 레버 응답보다 낮은 속도로 안정적으로 유지. 이 해리 인해 약물 주입 다음 20 초 타임 아웃이...

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토론

1) 자발적 약물 섭취와 약물 투여에 대한 제어를 위해, 2) 인간 중독자에서 흔히 투여 경로를 사용 할 수 있기 때문에 여기에서 설명하는 절차는 강한 얼굴의 유효 기간을 가지고, 3) 약물 노출의 (상대적으로) 연장 기간을 반영 과 절제, 그리고 4)는 복직 절차에 필수이지만, 거의 인간의 중독자 14에서 관찰되는 약물 추구 시험 전에 멸종 훈련을 피할 수 있습니다. 또, 절차 모델 5를 찾는 약물에 칼로리 제한의 효과를 고려할 때 중요한 것으로 생각되고 장기간 음식 제한 조건.

우리가 여기에서 설명하는 프로토콜에서 쥐 약물 자기 관리 기간 (24 시간 / 일)를 통해 조건화 실에 보관되어 있습니다. 또한 래트의 ACF로 다시 전송되는 "분대"프로토콜을 이용하여 데이터 수집의 효율을 증가시킬 수있을매일 훈련을 여러 그룹에 대한 허용 따고 하나의 매일 훈련을,. 헤로인이 바람직하다 "홈"환경 ...

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공개 사항

모든 실험 절차에 대한 승인은 동물 보호에 캐나다위원회의 지침에 따라, 콘 코디 아 대학의 동물 연구 윤리위원회에 의해 수여되었다. 저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다. FS 및 TD 동등하게 여기 원고의 작성에 제시된 절차의 개발에 기여했다.

감사의 글

이 작품은 자연 과학 및 공학위원회 디스커버리 프로그램 (미국 : 298915)에 의해 지원되었다, 퐁 드 공들인 뒤 퀘벡 - 상테 (CSBN), 그리고 캐나다 연구 프로그램 (미국) 의자.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
이름회사카탈로그 번호
케타민 (Vetalar, 100 mg/ml)바이오니쉬 동물 건강현지 유통업체
Xylazine (Rompun, 100 mg/ml)현지유통업체
Heroin HClNational Institute for Drug Abuse, Research Triangle Park, NC, USA
Anafen 주사 1 mg/ ml 바이알/20mlCDMV, 캐나다12868
장비
명회사카탈로그 번호
실라스틱 튜빙(ID 0.02, OD 0.037)Fisher Scientific1118915A
GE 해양 실리콘GESE-1134
Tygon 튜빙(ID 0.02, OD 0.060)VWR63018-044
캐뉼러(22G, 5개)플라스틱 OneC313G-5up
액체 스위블, 플라스틱, 22GLomir Biomedical, Inc.RSP1
고정 속도 주입 펌프 (3.3 rpm)Coulbourn InstrumentsA73-01-3.3
쥐 테스트 케이지Coulbourn InstrumentsH10-11R-TC
스테인레스 스틸 그리드 바닥Coulbourn InstrumentsH10-11R-TC-SF
House light-ratCoulbourn InstrumentsH11-01R
단일 고휘도 큐 랫Coulbourn InstrumentsH11-03R
톤 모듈 2.9kHzCoulbourn InstrumentsH12-02R-2.9
개폐식 레버 랫Coulbourn InstrumentsH23-17RA
밸런스 암Coulbourn InstrumentsH29-01
사운드 감쇠 상자Concordia UniversityHome made
시스템 컨트롤러 2Coulbourn InstrumentsSYS CTRL 2
시스템 전원 베이스Coulbourn InstrumentsH01-01
Habitest Universal LincCoulbourn InstrumentsH02-08
환경 연결 보드 & Linc 케이블Coulbourn InstrumentsH03-04
그래픽 상태 표기법 3Coulbourn InstrumentsGS3
를 통해 획득

참고문헌

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