Method Article

의 체계적인 분석 체외 셀 롤링

DOI:

10.3791/50866

⸱

October 16th, 2013

 ,  ,  ,  , 
1Division of Biomedical Engineering, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital, 2Center for Regenerative Therapeutics, Brigham and Women's Hospital, 3Harvard Medical School, Harvard University, 4Harvard Stem Cell Institute, Harvard University, 5Harvard-MIT Division of Health Sciences and Technology, 6Department of Mechanical Engineering, Massachusetts Institute of Technology

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 연구는 크게 생리학 관련 전단 흐름에 따라 세포 롤링 연구의 처리량을 증가, 멀티 웰 플레이트 미세 유체 시스템을 사용했다. 캐스케이드 및 환자 세포의 외인성 개체군의 전신 전달 다음 세포 호밍의 중요성을 원점 다단계 셀에서 셀 압연의 중요성을 감안할 때,이 시스템은 세포 기반 치료를 개선하기위한 스크리닝 플랫폼으로 잠재력을 제공한다.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

세포 기반 치료를위한 주요 과제는 전신 정맥 내 또는 동맥 내 주입 다음 그 조직에 고효율로 생존 세포의 대량을 대상으로 할 수 없다는 것이다. 따라서, 휴대폰 호밍을 증가하는 것은 현재 세포 치료를 개선하기위한 전략으로 연구된다. 혈관 내피 세포에 압은 셀 원점 복귀하는 과정에서 중요한 단계이며 평행 평판 유동 챔버 (PPFC)를 이용하여 시험관 프로빙 할 수있다. 그러나,이 저조한 제어 흐름 조건, 매우 지루한, 낮은 처리량 분석이다. 대신, 우리는 정밀하게 제어, 생리학 관련 전단 흐름 1,2에서 높은 처리량 세포 롤링 특성의 연구를 가능하게하는 멀티 웰 플레이트 미세 유체 시스템을 사용했다. 이 논문에서, 우리는 P-및 E-셀렉틴 코팅 표면뿐만 아니라 세포 단층 코팅 표면에 HL-60 (인간 골수성 백혈병) 세포의 회전 특성이 readil 할 수있는 방법을 보여y를 조사했다. 더 염증성 조건을 시뮬레이트하도록, 미세 유체 채널 표면이어서 상당히 동적 조건하에 HL-60 세포와의 상호 작용을 증가 종양 괴사 인자-α (TNF-α)로 활성화 된 내피 세포 (EC에)으로 코팅 하였다. 향상된 처리량과 같은 속도를 압연과 경로를 압연과 같은 매개 변수의 신속한 분석을 허용 통합 된 다중 매개 변수 소프트웨어 분석 플랫폼은 체외 세포 롤링 특성을 평가하기위한 중요한 장점이다. 세포 압연 및 원점 복귀에 영향을 미칠 수 있도록 설계 엔지니어링 방식의 신속하고 정확한 분석을 허용,이 플랫폼은 사전 외인성 세포 기반 치료를하는 데 도움이 될 수 있습니다.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

세포 기반 치료의 성공적인 임상 번역의 주요 과제 중 하나는 비효율적 인 배달 또는 원하는 사이트 3,4에 체계적으로 주입 된 세포를 대상으로합니다. 따라서, 휴대폰 호밍을 개선하기위한 방법 일정한 검색이있어, 특히 세포 치료를 개선하기위한 전략으로, 압연 전지. 혈관에 롤링 세포는 고전적인 질병 사이트 5 모집 백혈구에 대해 정의 된 세포 유도 폭포,에서 중요한 단계입니다. 이 단계는 내피 셀렉틴 사이 특정 상호 작용에 의해 지배된다, 즉, P-및 E-셀렉틴 (P-및 E-SEL), 백혈구 5,6의 표면에 자신의 카운터 리간드. 더 나은 이해와 셀 원점 복귀의 효율 향상, 특히 압연 단계는 세포 기반 치료를 개선하기 위해 새로운 플랫폼에 대한 탐구에 매우 중요합니다. 지금까지이 두 평면 플랫폼을 포함, 평행 판의 흐름 챔버 (PPFCs)를 사용하여 달성되었다세포 현탁액을 주사기 7,8, 9 펌프 사용하여 관류 통해 상부 플레이트에있는 유입과 유출 포트와 그들 사이 가스켓와 에스. 바닥 판의 표면은 중요한 세포 단층 / 기질로 코팅 될 수 있고, 전단 유동하 관류 세포와 표면 사이의 상호 작용은 다음 7을 탐구이다. 그러나 PPFC 거품 형성, 누출, 주요 단점을 제시 제대로 제어 흐름과 낮은 처리량, 시약 소모 및 매우 지루한 방법입니다.

전통적인 PPFC에 대한 대안 기술은 낮은 시약 소비 1,10으로, 정확하고, 컴퓨터로 제어되는 전단 흐름에서 세포 분석의 높은 처리 성능 (PPFCs보다 최대 10 배 이상)을 허용, 멀티 웰 플레이트 미세 유체 시스템입니다. 셀 롤링 실험은 USI를 세포 단일 층 또는 설계 기판 코팅 및 이미지가 될 수는 미세 유체 채널 내에서 수행된다NG 롤링 특성을 가진 현미경은 쉽게 적절한 소프트웨어를 사용하여 분석 하였다. 이 연구에서, 우리는 인간 골수성 백혈병 다른 표면에 (HL-60) 세포의 회전 특성을 연구하여이 멀티 웰 플레이트 미세 유체 시스템의 기능을 보여줍니다. HL-60은 P-및 E-SEL뿐만 아니라 다른 롤링 수용체를 발현하는 세포의 단층을 분석 하였다 같은 기판 상에 롤링. 또한, 항체 (AB)에 그 표면에 HL-60의 회전 운동을 중재의 특정 셀렉틴의 직접 참여를 설명하는 데 사용되었다 블로킹. 롤링 실험은 같은 회전 속도, 회전 세포 수 및 압연 경로 속성으로 키 롤링 매개 변수의 효율적인 분석을 허용하는, 최소한의 시약 / 셀 소비, 안정적인 전단 흐름에 따라, 용량 증가 하였다.

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Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 세포 배양

  1. 인간 골수성 백혈병 (HL-60) 세포
    1. 75cm 문화 HL-60 세포를 20 % (V / V) 소 태아 혈청 (FBS), 1 % (V / V) L-글루타민 및 1 보충 Iscove의 수정 된 둘 베코의 중간 (IMDM), 15 ㎖ 2 플라스크 % (V / V) 페니실린 - 스트렙토 마이신을.
    2. 세포 현탁액의 볼륨의 절반을 흡입하고 완전한 IMDM 미디어로 교체하여 3 일마다 미디어를 변경합니다.
    3. 카르복시 디 아세테이트를 들어, 숙신 에스테르 (CFSE) 염색, 원심 분리기 HL-60 세포 현탁액 (400 XG, 5 분), 1 μM의 CFSE 용액에 resuspend (데워진 PBS에서 준비) 및 37 ℃에서 15 분 동안 품어 그런 다음 30 분 동안 신선한 데워진 배지에서 원심 분리기 세포, 기음 뜨는에 resuspend 세포. PBS로 세포를 세척 한 후 (P-SEL 코팅 표면에 CFSE 염색 HL-60 세포의 대표 이미지 그림 1B 참조) 롤링 실험을 위해 사용합니다.

참고 : CFSE 염색은 선택 사항이며, 미세 유체 채널의 롤링 현상을 설명하기 위해 여기에 표시됩니다. 이 논문에서 제시 롤링 매개 변수의 분석은 표준 시야의 영상을 사용하여 흠없는 세포에서 수행 하였다.

  1. 폐의 미세 혈관 내피 세포 (LMVECs)
    1. 코트 100mm 페트리 0.1 % 젤라틴 용액 (PBS에서의 v / V)와 함께 요리와는 적어도 30 분 동안 37 ° C에서 알을 품다.
    2. 전체 내피 성장 매체의 젤라틴 코팅 100mm 배양 접시에 문화 LMVECs은 (내피 기초 매체-2 (EBM-2)), 특정 성장 보조 장비 보충은) 시약을 참조하십시오. 미디어에게 80~90% 합류에 도달하면 매일과 하위 문화의 세포를 변경합니다.
    3. 하위 문화, PBS로 세포를 씻어 준 후 분리 세포를 1X 트립신-EDTA 4 ㎖로 3 분 동안 37 ° C에서 완전 EBM-2 미디어의 동일한 볼륨에 중화. 15 ML 튜브 및 centrifug에 세포 현탁액을 전송E (400 XG, 5 분). 원심 분리 후, 완전한 내피 미디어 1 ML에서 펠렛을 재현 탁하고 혈구와 세포를 계산합니다. 이 모든 실험을위한 통로 (7)에 따라 만 세포를 자신의 형태와 기능 사용에 영향을 미치는 등, 이상하지 통로 세포를 수행합니다.
  1. 중국어 햄스터 난소-P-셀렉틴 (CHO-P) 세포
    1. 안정적으로 인간의 P-SEL을 표현하는 형질 전환 된 CHO 세포이다 CHO-P 세포, 공동 작업자 (베스 이스라엘 디코 니스 메디컬 센터, 하버드 의대) (11, 12)에 의해 제공되었다.
    2. F-12 미디어 25 ㎖에있는 T175의 CM 문화 CHO-P는 세포 2 플라스크.
    3. 계대를 들어, 4 ~ 5 초 동안 PBS 10 ㎖로 세포를 세척 한 다음 전체 미디어에서 중화 한 다음 37 ℃에서 3 분에 대한 1X 트립신-EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 10 ㎖에를 Trypsinize.
    4. 원심 분리 세포 현탁액 (400 XG, 5 분), 정중, 상등액을 흡인 전체 미디어 1 ㎖ 중에 세포 펠렛을 재현 탁과 함께 세포를 세어혈구.

2. 통합 다 잘 플레이트 미세 유체 시스템의 작동

  1. 모든 장비가 제대로 연결되어 있는지 확인하고, 다른 모듈을 켜 : 컴퓨터, 컨트롤러, 거꾸로 현미경과 CCD 카메라.
  2. 이미징 소프트웨어를 열고, 멀티 웰 플레이트 모듈과 영상 모듈이 화면에 표시되어 있는지 확인하십시오.
  3. (컨트롤러에 연결) 증기 트랩에 튜브를 연결하고 또한 그들에게 압력 인터페이스에 연결합니다.
  4. 플레이트 히터 / 어댑터 멀티 웰 플레이트를 놓습니다. 우물 (아래에 설명)에 시약을 추가하고 접시 위쪽에 인터페이스를 연결합니다. 자동화 된 단계에 이미징 플레이트를 놓습니다.
  5. 인터페이스는 플레이트의 상부에 부착하고 멀티 웰 플레이트를 이용하여 쉽게 제어 할 정의 유속 미세 유체 채널을 통해 유체를 구동 웰의 상부에 컨트롤러로부터 공기압을 적용수동 모드에서 모듈 화면.
  6. 웰 사이에 관찰 영역에 걸쳐 채널 흐름 시약. 미세 유체 채널의 크기는 70 μm의 높이 350 ㎛의 넓​​은 x입니다. 선형 채널의 길이가 1mm이고 채널의 바닥은 브라이트, 위상, 및 공 초점 형광 현미경과 호환 180 μM의 유리 커버 슬립을 포함한다.
  7. CCD 카메라 (스트림 획득, 11 프레임 / 초)를 사용하여 영상을 획득하고 호환 가능한 소프트웨어를 통해 분석 할 수 있습니다.

3. 단백질 기질 또는 세포 단층과 미세 유체 채널의 코팅

  1. 피브로넥틴 또는 P-/E-selectin과 미세 유체 채널을 코팅
    1. PBS에서 20 ㎍ / ml의 피브로넥틴 용액 1 ㎖를 준비합니다. 코팅되어야하는 채널들의 수 (채널 당 피브로넥틴 25-50 μl를 사용)에 기초하여 부피를 바꾼다.
    2. 물론 각각의 입구에 피브로넥틴 솔루션의 25 ~ 50 μl를 추가합니다. 2 DYN / ㎠의 전단력 적용5 분 채널을 perfuse하는 데 필요한 권한입니다. 액체가 아니라 콘센트에 나타나는의 구슬을 유의하시기 바랍니다. 실온에서 30 ~ 45 분 알을 품다
    3. 우물에서 솔루션 (채널을 공급하는 중간 원에서 직접 흡인하지 않습니다) 1,13 대기음. 콘센트도에 PBS의 200 ~ 500 μl를 추가하고 5 분 동안 2 DYN / ㎠의 전단 흐름을 적용하여 PBS와 채널을 씻어. 채널은 정상적으로 피브로넥틴 및 사용 준비로 코팅된다.
    4. 표면 코팅을 할 수 있도록 37 ° C에서 1 시간 배양과, 상기 한 바와 같이 P 또는 E-SEL, PBS에서 원하는 사람의 재조합 단백질의 5 ㎍ / ㎖의 용액을 제조하고, 코트 채널 코트.
  2. 미세 유체 채널 내부 CHO-P 또는 LMVEC 단층의 생성
    1. 부드럽게 전체 미디어와 원심 분리기의 2 배 용량 (400 XG에서 5 분)를 사용하여 소멸, 3 분 동안 배양 접시에서 세포를 Trypsinize. 전체 미디어와 원심 분리기 10 ㎖ (400 XG에서 5 분)로 재현 탁 셀 전압 강하N.
    2. 현탁액으로 세포 농도를 결정하기 위하여 세포를 카운트. 채널 내부 합류 LMVEC 단층의 형성을 보장 15-20000000 세포 / ml로 세포 농도를 가지고. 합류 CHO-P 세포 단일 층의 경우, 50-60000000 세포 / ml를 사용합니다. 각 채널에 대한 세포 현탁액의 25 ~ 50 μl를 사용합니다 - 따라서 실험에 사용되는 결정 초기 셀 수.
    3. 잘 입구에 적절한 농도로 세포 현탁액의 25 ~ 50 μl를 추가합니다. 현미경의 무대에서 접시를 놓고 세포가 전체 채널을 작성 화면에서 관찰하고 흐름을 중단 할 때까지 채널 (2 DYN / ㎠)로 세포를 소개합니다.
    4. 전체 LMVEC 또는 CHO 미디어 중 하나를 200 ㎕ 씩 출구와 입구를 모두 입력합니다. 세포가 정착하자 인큐베이터에서 3 시간 동안 준수 (37 ° C에서 5 % CO 2).
    5. 3 시간 배양 한 후, 무소속 제거하기 위해 전체 미디어 (2 DYN / ㎠, 10 ~ 15 분)와 채널을 씻어세포. 세포는 이제 완전히 합류 나타납니다과 채널의 사용 준비가 완료됩니다. 초기 셀 시딩 밀도에 따라, 안정화 시간을 추가로 2 ~ 3 시간은 세포 표면의 전체 범위를 확인해야 할 수 있습니다.

4. LMVEC 프로 염증 활성화 및 P-/E-selectin의 항체 차단

  1. LMVEC 기초 미디어에서 TNF-α 용액 (10 NG / ML)를 준비합니다.
  2. , 채널에 LMVEC의 염증 활성을 유도 아니라 입구에 TNF-α 용액 100 μl를 추가하고 5 분 동안 2 DYN / ㎠의 전단 흐름을 적용하여 채널에 솔루션을 소개합니다. 제어 채널 (활성화되지 않은되는 EC)는, 흡입구 LMVEC 기저 매체의 100 μl를 잘 추가 채널 (5 분간 2 DYN / cm 2)로 소개한다. 채널은 지금 롤링 분석을위한 준비가되어 있습니다.
  3. P-SEL 및 LMVECs 및 CHO-P 세포에 E-SEL을 차단하기 위해, P-SEL (복제 AK4, 바에서 5 ㎍ / ㎖의 중화 소개샐 미디어) 또는 E-SEL (복제 P2H3, 기저 미디어 5 ㎍ / ㎖)을 채널로 항체 및 37 ℃에서 1 시간 동안 배양 다음으로, (5 분 2 DYN / ㎠) 기저 매체와 채널을 씻어. 채널은 지금 롤링 분석을위한 준비가되어 있습니다.

5. 기판 / 세포 단층 코팅 미세 유체 채널에서 HL-60 롤링 분석

  1. 조심스럽게 채널이 제대로 (세포와 코팅의 경우, 완전히 합류 세포 단층이 관찰되어야한다) 코팅되어 있음을 확인하기 위해 현미경으로 채널을 검사합니다.
  2. 롤링 실험, 원심 분리기 HL-60 세포 현탁액 (400 XG에서 5 분)에 대한 HL-60 세포 현탁액을 준비하고 기저 매체와 한 번 씻어. 5,000,000 세포 / ml로 HL-60 세포 현탁액을 생성하기 위해 (칼슘 2 + 2 + 및 Mg를 함유 기저 매체) IMDM에서 세포에 resuspend 횟수. 롤링 분석을 수행하기 위해 각 채널에 대한 세포 현탁액의 25 ~ 50 μl를 사용합니다.
  3. 셀 suspe의 25 ~ 50 μl를 추가합니다nsion 현미경 단계에 온도 조절 플레이트 홀더 (37 ° C) 및 장소 안에 잘 장소 접시를 콘센트에. 다음으로, (세포가 입구에 콘센트에서 흐르는 15 초 이내에 관찰되어야한다) 2 DYN / ㎠의 전단력을 적용하여 채널에 세포를 소개합니다.
  4. 전단 응력의 ​​함수로서 압연 응답을 검사하려면, (5 DYN까지 0.25부터 서서히 전단력을 증가 DYN / cm 2 0.25 전단을 줄이고 원하는 각 전단에 ( "스트림 취득"기능을 사용) 20 ~ 30 초의 영상을 취득 / cm 2. 그것은) 높은 가위를 사용하는 것도 가능하다.
  5. CCD 카메라 (스트림 획득, 11 프레임 / 초)를 사용하여 영상을 획득하고 호환 가능한 소프트웨어를 통해 경로를 회전하고 회전 속도를 분석 할 수 있습니다.

6. 표면 분자의 발현을 감지하는 유동 세포 계측법

  1. 트립신 처리 후, 원하는 세포 유형 (HL-60,-CHO의 (1-2 × 105 세포 / 샘플을 사용) 세포 현탁액을 준비PBS에서 P 또는 LMVECs) (- / -), 2 % FBS가 보충. 두 번 세포를 세척하고 50 μL (같은 버퍼를 사용하여)에 샘플 볼륨을 가져온다.
  2. 20 분 4 ° C에서 원하는 형광 - 복합 AB (자세한 내용은 첨부 표 참조) (알루미늄 호일로 커버) 각 샘플을 품어.
  3. 두 번 (같은 버퍼) 세포를 세척하고 200 μL에 스테인드 세포 현탁액의 최종 볼륨을 가져옵니다. 표면 분자의 발현을 검출하는 유동 세포 계측기를 사용하여 샘​​플을 분석한다.

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HL-60 세포가 피브로넥틴에 P-및 E-셀렉틴 표면에 롤 아니지만

그들은 롤링 리간드 P-SEL 당 단백질 리간드-1 (PSGL-1) 시알 릴 루이스 X (SLEX)을 포함하여 원점 복귀 리간드의 다양한 5,14 (그림 1A 표현으로 HL-60 세포는 황금 표준 "롤러"로 간주됩니다 ). 과 특정 상호 작용을 매개하는 테트라 당 SLEX위한 발판으로 표면 단백질 PSGL-1의 역할, P-및 E-SEL, 염증 5,6,15시 내피에 상향 조절되는. 멀티 웰 플레이트 미세 유체 시스템의 기능을 테스트하기 위해, 다수의 미세 유체 채널은 그 표면을 분석 하였다 서로 다른 기질과 HL-60 세포의 구름 상호 작용과 동시에 코팅 하였다. HL-60 세포는 별개의 회전 운동에 의해 다음에 제 1 유동에서 캡처 한 세포로, P-SEL 코팅 표면에 강력한 회전 동작을 보였다. 도 1C에 도시 한 ...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

외인성 세포 기반 치료의 성공적인 번역의 주요 과제 중 하나는 효율적으로 높은 생착 효율 3 부상과 염증의 사이트에 세포를 제공 할 수 없다는 것입니다. 셀룰라 롤링 결국 조직 (5)에 내피 통해 확고한 부착 및 이주에 이르는, 혈관의 벽에 세포의 감속을 용이 셀 원점 복귀하는 과정에서 중요한 단계를 나타낸다. 후보 세포 유형에 대한 압연 공정의 더 나은 이해는 세포 호밍을 강화하고 세포 기반 치료를 개선하는쪽으로 크게 기여하는 기술의 개발로 이어질 수 있습니다.

PPFC 전단 흐름에 따라 세포 압연뿐만 아니라 다른 세포의 행동을 탐구하는 널리 사용되는 도구입니다. 내피 세포에서 호중구의 접착력을 조사하기위한 PPFC의 적용은 1987에 처음. 로렌스 등으로 공부했고, 그 이후 시중에서 생산 된TS는 8,9를 개발되었다. PPFCs은 챔버 (7)의 크기를 제어하는 개...

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 이익의 갈등을 선언하지 않습니다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CHO-P 세포 박사 바바라 Furie (베스 이스라엘 디코 니스 메디컬 센터, 하버드 의과 대학)에서 일종의 선물이었다. 이 작품은 JMK에이 작품은 또한 JMK에 Movember - 전립선 암 재단 챌린지 상에 의해 부분적으로 지원되었다 건강 보조금 HL095722의 국립 연구소에 의해 지원되었다

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
인간 폐 미세 혈관 내피 세포LonzaCC-2527
P-selectin-expressing Chinese Hamster Ovary Cells (CHO-P)Kind gift by Dr. Barbara Furie11,12
HL-60 CellsATCCCCL-240
Cell Culture Reagents
Endothelial Basal MediumLonzaCC-3156
EBM-2 매체LonzaCC-3156
내피 기저 배지 보충제LonzaCC-4147
EGM-2 MV SingleQuotsLonzaCC-4147
IMDM - Iscove의 변형 Dulbecco's Medium 1xGibco12440
F-12 (1x) 영양소 혼합물 (햄)Gibco11765-054
페니실린 스트렙토마이신(P/S)Gibco15140
L-글루타민(L/G) 200 mMGibco25030
소 태아 혈청(FBS)Atlanta BiologicalsSa550
페트리 접시BD FalconBD-353003
100mm 세포 배양 접시, 조직 배양 처리된 폴리스티렌
원심분리기 튜브(15ml 폴리프로필렌 원추형 튜브)MedSupply PartnersTC1500
T75 플라스크BD Falcon353136
젤라틴 용액(2%)SigmaG1393
dPBS(염화칼슘 및 염화마그네슘 제외)SigmaD8537
Trypsin-EDTA 용액(10x)SigmaT4174
항체
Anti-hE-Selectin/CD62ER& D SystemsBBA21
FITC 활용 마우스 IgG1R& D 시스템BBA21
Anti-HP-SelectinR& D SystemsBBA34
FITC 활용 마우스 IgG1R& D 시스템BBA34
FITC 마우스 IgG­ 1 &갓파; Isotype ControlBD Bioscience555748
Anti-SLeX /CD15s Ab, 클론 : 5F18Santa CruzSC70545
FITC ConjugatedSanta CruzSC70545
Normal Mouse IgM-FITC Isotype ControlSanta CruzSC2859
PE Mouse Anti-Human CD162, 클론 : KPL-1BD Pharmingen556055
PE 마우스 IgG1 k Isotype ControlBD Pharmingen550617
Anti-P-Selectin Ab (AK4)Santa CruzSC19996
Anti-E-Selectin Ab, Clone P2H3MilliporeMAB2150
Mouse IgG1 Isotype ControlSanta CruzSC3877
기타 시약
재조합 인간 TNF-알파PeproTech300-01A
세포 추적 CFSE 세포 증식 키트 - 유세포 분석용InvitrogenC34554
인간 P-selectin-FC 재조합 단백질R& D Systems137-PS-050
인간 E-selectin-FC 재조합 단백질R& D Systems724-ES-100
Fibronectin Human, PlasmaInvitrogen33016-015
Equipment
Bioflux 1000Fluxion BiosciencesBioflux Montage는 실험을 실행하고 데이터를 분석하는 데 사용된 소프트웨어였습니다.
CytometerBD BioscienceCFlow Plus는 실험을 실행하고 데이터를
Nikon Eclipse Ti-SNikon
CoolSnap HQ2 CCD 카메라광도
BioFlux 48-well plates Fluxion Biosciences BD Accuri C6 Flow 분석하는 데 사용 된 소프트웨어였습니다

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
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