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방법 논문

자유롭게 수영 약하게 전기 생선의 장기 행동 추적

12.4K 조회수

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DOI:

10.3791/50962

⸱

2014년 3월 6일

 ,  , 

이 논문에서

요약

우리는 자유롭게 기적 감각 내부 특별히 설계된 수조의 모두 정확하고 안정적​​으로 동물의 전기 기관 방전 타이밍, 상체 위치 자세를 측정함으로써, 장기간에 걸쳐 약하게 전기 물고기 수영의 자발적 행동을 연구하기위한 기술의 집합을 설명 격리 실.

초록

장기 행동 추적이 자주 발생하는 등의 천연 동물의 동작을 캡처하고 수치화 할 수 있습니다. 이러한 탐사 및 사회적 상호 작용 등의 행동은 가장 억제되지 않은, 자유롭게 행동하는 동물을 관찰하여 공부하실 수 있습니다. 약한 전기 물고기 (WEF) 디스플레이 전자 오르간 방전 (EOD)을 방출하여 쉽게 관찰 탐구와 사회적 행동. 여기서는 동기 EOD, 상체 위치 및 시간의 장기간 동안 자유 수영 WEF의 자세를 측정하는 세 효과적인 기술을 설명한다. 첫째, 우리는 빛, 소리, 진동과 같은 감각 자극의 외부 소스를 차단하도록 설계 분리 챔버의 내부 실험 탱크의 구성을 설명한다. 수족관은 네 개의 시험편을 수용하기 위해 분할 및 자동 게이트 원격으로 중앙 무대에 동물의 접근을 통제했다. 둘째, 우리는 자유롭게 WEF 수영에서 정확하고 안정적​​인 리얼 타임 EOD 타이밍 측정 방법을 설명. 동물의 신체의 움직임에 의한 신호 왜곡은 공간 및 시간 평균 처리 단계에 의해 수정된다. 셋째, 우리는 교란 야행성 동물의 행동을 관찰 할 수있는 수중 근적외선 영상 설정에 대해 설명합니다. 적외선 광 펄스는 긴 기간 동안 녹화 영상 및 생체 신호 간의 타이밍을 동기화하기 위해 사용되었다. 자동화 된 추적 소프트웨어 수생 씬 안정적 동물의 상체 위치 자세를 측정한다. 조합에서는 이러한 기술을 자유롭게 안정적이고 정확한 방식으로 약하게 전기 물고기 수영의 자발적 행동의 장기 관찰을 가능하게합니다. 우리는 우리의 방법이 유사하게 탐색 또는 사회적 행동과 생리 신호를 관련하여 다른 수생 동물의 연구에 적용 할 수 있다고 믿는다.

서론

배경입니다. 동물의 행동에 대한 정량 실험 (예를 들어 강제로 선택, 충격 방지, T-미로 등은.) 일반적으로, 감각 - 운동 능력에 관한 학습과 기억 형성 특정 가설을 조사하기 위해 사용된다. 그러나 이러한 제한적인 실험은 자연의 동물 행동의 풍요 로움을 많이 그리워하고 행동의 기본이되는 신경 기초의 과도하게 단순화 된 모델을 초래할 가능성이있다. 자연주의 조건에서 실험 그러므로 우리가 더욱 완벽 종의 행동 레퍼토리를 탐구 할 수있는 중요한 보완. 자유롭게 이동하는 동물을 포함하는 실험은, 그러나, 이러한 운동에 의한 기록 유물 등의 고유 한 기술적 과제를 해결해야합니다. 자극 유발 된 반응과는 달리, 저절로 발생하는 탐색 동작은 예측 될 수 없으며, 따라서 피험자는 끊임없이 모니터링하고 장기간에 걸쳐 추적한다. 특정 연구 질문은 캘리포니아N 가장 엄선 된 생물 및 사용 가능한 기술 도구에 의해 해결 될 수있다. 예를 들어, 유전자 인코딩 칼슘 센서 1 optogenetics 2와 같은 광 기록 및 자극 기술이 성공적으로 자유롭게 유전자 모델 생물 3-5를 이동하기 위해 적용되었습니다. 또한, 소형화 신경 원격 측정 시스템은 기록 할 수 및 작은 동물에게 6,7를....

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프로토콜

이 절차는 오타와의 동물 관리위원회의 대학의 요구 사항을 충족한다. 관심 없음 충돌 선언하지 않습니다. 장비 아래에 나열된 물질의 차종과 모델에 대한 재료 및 시약의 표를 참조하십시오. 사용자 정의 서면 Spike2 및 MATLAB 스크립트, 샘플 데이터는 보조 파일에 제공됩니다.

1. 수족관 탱크와 분리 실 설치

  1. 안티-V ibration 층. 바닥에서 상부 (도 1a)에 고무 패드, 탄성 발포 스티롤, 선박용 합판 패널, 및 폴리 우레탄 발포 패드를 적층하여 진동 방지 표면 (2.1 MX 2.1 m)을 구축. 수족관 탱크의 가장자리를 지원하기 위해 합판 패널에 네 개의 나무 스터드 (5cm X 10cm)를 놓습니다.
  2. 마루. (그림 1D 하단 참조) 열 등급 거품 패딩에 전기적으로 차폐 가열 요소를 놓습니다. 금속과 발열체 커버LIC 전기 차폐 메쉬.
  3. 공간 탱크. 두꺼운 유리 패널, L 모양의 알루미늄 프레임과 수족관 급 실리콘 (그림 1A 참조) 강화 1.3 cm를 사용하여 넓고 얕은 수족관 탱크 (1.8 MX 1.8 MX 30cm)를 구축합니다....

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결과

EOD 추적 결과

자신의 독특한 위치와 방향 (그림 2C 상단)에서 예상대로 다른 전극 ​​쌍에서 기록 EOD 파형은 진폭과 모양에 변화. 여러 전극 쌍의 사용은 탱크 내에서 가능한 모든 위치와 세계 경제 포럼 (WEF)의 방향에 강한 신호 수신을 보장. 봉투 파형 (그림 2C 바닥, 녹색 추적)는 항상 정확하게 (= IPI -1) 펄스 간 간격과 순간 EOD 속도를 결정하기위한 신뢰할 수있는 타임 마커로 제공 EOD 사이클 당 하나의 피크를 포함. 연속 EOD의 피크에 가입 선형 보간 일정한 시간 간격 (그림 2D 탑, 블랙 추적)에서, 그리고 순간 EOD의 환율을 유사하게 일정한 시간 간격 (그림 2D 바닥, 핑크 추적)에 삽입 된 하였다. 일정 시간의 리샘플링 절차는 시간 동기화 될 용이모션 궤도 및 EOD 신호를 트위닝, 지속적으로 샘.......

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토론

우리의 기술의 중요성. 요약하면, 우리는 먼저 대형 수족관 탱크의 건설 및 세계 경제 포럼 (WEF)에 의해 생성 된 자연 탐구 행동을 관찰하는 분리 챔버를 설명했다. 다음으로, EOD 레이트 복수의 전극 쌍을 사용하여 실시간으로 무제한 물고기에서 이동 상태를 기록하고 트래킹 기술을 보여 주었다. 마지막으로, 우리는 시간 - 동기화 된 방식으로 물을 통해 적외선 비디오 녹화 기술과 상체 위치 자세를 측정하는 이미지 추적 알고리즘을 설명했다. 실험 준비로, 세계 경제 포럼 (WEF)은 활성 electrosensory 샘플링 속도에 해당합니다 쉽게 정량화 EOD 속도를 보여줌으로써 활성 감각 유도 행동을 조사하는 중요한 이점을 제공합니다. 이러한 기술의 조합은 무제한 WEF에서 자발적 행동의 정확하고 신뢰할 수있는 장기적인 관찰 8을 사용할 수 있습니다. 더욱이, 우리 셋업 대다수 FR을 구성 할 수있다톰 건축 자재 및 쉽게 얻을 전자 부품이 널리 사용. 여기에 설명 된 기술을 개발하고 최근 몇.......

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공개 사항

저자가 공개하는 게 없다.

감사의 글

이 작품은 넉넉한 캐나다 자연 과학 및 공학 연구위원회 (NSERC) 및 건강 연구의 캐나다 연구소 (CIHR)에 의해 지원되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Aquarium Construction
Electrically shielded floor heaterThermoSoft Corp., IL, USAThermoTilewww.thermosoft.com
강화 유리 패널일반0.5 인치 두께, 수족관 건설에 사용
수족관 등급 실리콘일반 
아크릴 시트일반0.25인치 두께, 무광택 흰색
천연 고무 시트일반0.25인치 두께
서보 모터HTECHRCD Inc., 한국HS-325HB, 180도 회전www.servocity.com
서보 모터 암 마운트HITECHRCD Inc., 한국56362 대형 스플라인www.servocity.com
서보 모터 컨트롤러(6채널)SparkfunROB-09664Micro Maestro 6-채널 USB 서보 컨트롤러
액티브 USB 연장 케이블C2G3899012 m USB 2.0 A 남성에서 여성 4-포트 액티브 연장 케이블
배기 팬NutoneILFK120www.homedepot.com
수직 수족관 필터Tetra, GermanyWhisper 내부 전원 필터 - 40i 
탱크의 pH를 증가시키는 데 사용되는 분쇄산호
<강한>EOD 녹화 설정
그래파이트 전극Staedtler, 독일화성 탄소 2-mm 타입 HB외부 코팅 면도
리학적 증폭기/필터Intronix, 캐나다2015F 
동축 케이블일반RG174전극 어셈블리용
동축 케이블일반RG54배선용
BNC 잭 커넥터 RG-174Amphenol Connex112160전극 어셈블리용
BNC 플러그 커넥터 RG-54Amphenol Connex112116배선용
신호 디지타이저 하드웨어Cambridge Electronic Design, UK파워 MKII 1401 
신호 디지타이저 소프트웨어Cambridge Electronic Design, 영국Spike 2. ver 7 
Visual Tracking Setup
White LED lightIKEA, SwedenDIODER 201.194.18www.ikea.com
적외선 LED 조명 (850 nm)Scene Electronics, ChinaS8100-60-B/C-IR내장 팬 USB
웹캠제거 Logitech Inc., CA, USAC910적외선 차단 필터 제거
전동 카메라Logitech Inc., CA, USAQuickcam Orbit적외선 차단 필터 제거
비디오 녹화 소프트웨어Logitech Inc., CA, USALogitech Quickcam 소프트웨어www.logitech.com 에서 다운로드
MATLABMathworks, MA, USA2012a이미지 처리 도구 상자
된 물 생

참고문헌

  1. Miyawaki, A., et al. Fluorescent indicators for Ca2+ based on green fluorescent proteins and calmodulin. Nature. 388 (6645), 882-887 (1997).
  2. Boyden, E. S., Zhang, F., Bamberg, E., Nagel, G., Deisseroth, K. Millisecond-timescale, genetically targeted....

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재인쇄 및 허가

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