방법 논문

마우스 및 꿰 문착 사슴 우유 수집 방법

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DOI:

10.3791/51007

2014년 7월 19일

이 논문에서

요약

>jove_content<동물 모델에서 모유를 채취하면 수동적 면역에 대한 이해, 수직 전파를 담당하는 병원체 식별, 형질전환 쥐 사용을 통한 인간 모유에서 발견되는 단백질의 상업적 생산 등 다양한 연구 경로를 촉진합니다. 여기에서는 생쥐와 Reeves의 문잭 사슴에서 우유를 수집하는 간단한 방법을 설명합니다.

초록

동물 모델은 병원체의 고유 숙주에서 일반적으로 실용적이지 않은 것으로 간주되는 것을 달성하기 위해 연구 실험실 전체에서 일반적으로 사용됩니다. 동물의 모유를 채취함으로써 과학자들은 수직 전달, 수동 면역, 유선, 생물학 및 수유를 포함한 생식의 여러 측면을 연구할 수 있습니다. 이러한 연구를 위해 적절한 양의 우유를 얻는 것은 특히 작은 동물 모델에서 어려운 작업입니다. 여기에서는 특수 장비나 광범위한 훈련이 필요하지 않은 생쥐와 Reeves의 muntjac 사슴에서 우유를 채취하는 저렴하고 쉬운 방법을 보여줍니다. 이 특별한 방법은 두 명의 연구원이 필요한데, 한 명은 우유를 추출하고 동물을 안정시키는 것이고, 다른 한 명은 Muntjac 또는 마우스 모델에서 적절한 용기에 우유를 수집하는 것입니다. 또한 마우스 모델에는 P-200 피펫맨과 해당 피펫 팁을 사용해야 합니다. 이 방법은 비용이 저렴하고 비교적 수행하기 쉽지만, 최적의 우유 채취를 위해서는 동물을 마취해야 한다는 점을 연구자들은 알려야 합니다.

서론

동물 모델은 체외 분석에 의해 얻어 질 수없는 질병의 병리에 대한 통찰력을 제공합니다. 가장 효과적인 결과를 제공하기 위해, 밀접 질환 및 그와 관련된 종의 동물 모델을 사용하는 것이 중요하다. 예를 들어, 꿰 문착 (Muntiacus reevesi에), cervid 프리온 단백질 (CerTgPrP)를 3 표현하는 작은 아시아 사슴 1, 2, 형질 전환 마우스는 cervid 종에 유용한 동물 모델입니다. 두 종은 연중 번식을 허용 polyestrous이며, 따라서 임신 관련 조직과 체액에 대한 일관성있는 소스는 cervid 생물학의 특정 메커니즘을 연구 할 수 있습니다. 우유의 연구는 인간보다 동물 모델에서 수행 더 간단하게 (저렴하게)있는 응용 프로그램의 광대 한 배열이있다. 연구원은 1) 전염성 질병 전파의 잠재적 인 소스로 우유와 초유를 조사 수, 개발까지의 자손에게 어머니로부터 전송 2) 면역 글로불린수동 면역 4, 3) 락토페린의 pment 연구자가 현재 시도하고 수동 면역에 관련된 인간의 모유에서 발견되는 단백질은 상업적으로 5를 생산하고 있습니다.

작은 동물에서 우유의 상당한 양을 수집하는 것은 어려운 작업이 될 증명....

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프로토콜

1. 마우스 착유 프로토콜

이 프로토콜에서 설명하는 방법은 IACUC에 의해 승인되었다.

자손의 댐 1. 분리

  1. 착유 할 수있는 댐을 선택합니다. 8~12일 컬렉션 21 일 모든 시간 포인트 포스트 분만 업에 가능 최대 우유 컬렉션 비록 제공하기 위해 출산을 게시합니다 4 인 이상 새끼의 쓰레기와 댐을 선택합니다.
  2. 착유 전에 그녀의 쓰레기 최소 2 시간에서 댐을 분리합니다.
    참고 : 주어진 시간에 하나 이상의 댐 우유 하나의 욕망하는 경우, 이는 적절한 음식과 물 공급과 같은 케이지에서 분리 된 댐을 집에 허용됩니다.

옥시토신, 마취 눈 윤활유의 2. 관리

  1. 복강 옥시토신의 2 IU / kg (IP)을 관리 할 수​​ 있습니다. 옥시토신은 우유의 방출을 자극하는 수유의 여성의 유방 동맥에 작용하는 호르몬이다. 옥시토신은 FR을 취득 할 수있다톰 의사.
  2. 5 ~ 10 ㎎ / ㎏ 자일 라진의 IP와 함께 80 ~ 100 ㎎ / kg 케타민을 포함하는 마취제 혼합물을 관리 할 수​​ 있습니다. 예를 들어, 10 밀리리터의 마취 액을 약 30 g의 무게 마우스....

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결과

마우스

우리의 실험에서, 우리는 몇 가지 변수에 의존 한 실험 쥐에서 우유의 약 100 ~ 400 μl를 수집 할 수 있음을 확인했다. 이러한 변수는) 수집을 위해 따로 시간의 양, 2) 옥시토신의 투여 량 투여를, 1을 포함 3) 댐은 간호 및 시간 포스트 분만 4) 양이 얼마나 많은 새끼. 우리의 연구는 댐은 적어도 2 시간 동안 그들의 자손에서 분리 될 때 가장 높은 수익률을 얻을 수있는 것으로 나타났습니다, 한 시간에 적어도 45 분은 착유를위한 마우스마다 따로 설정됩니다. 최대 우유 볼륨 8~12일 옥시토신의 2 IU / kg을 사용하여 분만을 게시 수확했다. 우리의 결과는 쓰레기 크기가 긍정적으로 우유 생산량 9 (그림 3 참조)의 상관 관계를 보였다 다른 연구에 따라 대부분이다.

문착

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토론

마우스

1 등의 마우스에서 우유를 수집 할 때 고려해야 할 여러 가지 요인이) 수집을 위해 따로 시간의 양, 투여 옥시토신 2) 용량, 3) 댐은 간호 4) 양이 얼마나 많은 새끼가 있습니다 컬렉션의 분만시 이후 경과 된 시간. 지침으로 이전의 연구를 사용하여, 우리는 우유 생산 조건을 최적화하기 위해 밖으로 설정합니다.

이전 연구는 직접 산자 8 우유 생산량 상관 관계가있다. 불행하게도, 쓰레기의 크기가 제어 할 수없는 변수입니다. 그러나, 착유 포스트 분만의 시간을 제어 할 수 있습니다. 실험실 쥐 최대의 우유 분비에 따르면 8~10일 포스트 분만 9시입니다. 우리의 경험은이 문 적합성에 있습니다.

그것은 옥시토신은 우유 생산의 게시물에 바꾸어 놓을 수없는 역할을하는 것으로 밝혀졌다분만.......

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공개 사항

저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

이 실험은 NIH 보조금 #RAI093634A의 지원을 받았습니다. 우리는 문약 착유에 도움을 준 Jenny Powers, DVM, PhD에게 깊은 감사를 표합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
재료— 마우스
케타민 (KetaVed 100 mg/ml) (용량: 80-100 mg/kg)MWI/Vedco011075
Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (용량: 5-10 mg/kg)MWI/VedcoNADA 139236
눈 윤활제MWI/Apexa701013
옥시토신 (2 IU/kg)Vet One501013
Materials— Muntjac
Midazolam (1-2 mg/kg)Amerisource Bergen Drug Corp924326선택 사항: 연구원은 Midazolam을 단독으로 사용하거나 BAM 조합을 마취제로 사용할 수 있습니다
Butorphanol 주석산염(Torbugesic)(0.45mg/kg)Fort Dodge Animal HealthNADA 135-780
Azaperone 주석산염(0.25mg/kg)ZooPharm
메데토마딘 HCl(0.07mg/kg)ZooPharm
Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (용량: 0.25 mg/kg)Orion CorporationNADA 141-033
Oxytocin (10 IU/kg)Vet One501013
Equipment— 마우스
P-200 PipetmanGilsonF123601
200 μ l 피펫 팁Light LabsB-2004-SH
1 ml 주사기MWI005427
27 G 바늘MWI002031
Equipment— Muntjac
15ml 원뿔형 튜브VWR21008-918
22G 바늘MWI873
3ml 루어 락 주사기MWI001377

참고문헌

  1. Dueling, S. Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , Available from: http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi (2004).
  2. Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59

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재인쇄 및 허가

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태그

P 200

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