감소 이트라코나졸의 농도와 지속 시간은 치료의 성공<em&gt; Batrachochytrium의 dendrobatidis</em&gt; 수륙 양용 비행기에 감염

요약

양서류 Batrachochytrium의 dendrobatidis 감염은 감소 된 농도 (0.0025 %) 및 일반적으로 사용되는 것보다 이트라코나졸의 짧은 기간 (6 일 동안 오분 화장실)을 사용하여 제거 할 수있다. 이하 사망률과 적은 부작용이 변경됨 치료 프로토콜을 사용하여 관찰 하였다.

초록

수륙 양용 비행기는 척추 클래스의 가장 큰 감소를 경험하고 이러한 감소의 주요 원인은 질병 chytridiomycosis을 일으키는 곰팡이 병원균, Batrachochytrium의 dendrobatidis (BD)입니다. 포로 보증 식민지 멸종 위기 종의 양서류 세계적 중요하고 멸종의 중요한 위협이있는 사람들을위한 유일한 생명선이 될 수 있습니다. 무병 식민지를 유지하는 것이 포로 관리자의 우선 순위, 모든 종과 삶의 단계에서 아직 안전하고 효과적인 치료법이 발견되지 않았습니다. 일반적으로 사용되는 투여 량은 일부 개인과 종에 해가 될 수 있지만 가장 널리 사용되는 화학 요법 치료, 이트라코나졸입니다. 우리는 이트라코나졸의 낮은 및 안전하지만 유효 선량은 BD 감염을 치료하기 위해 찾을 수 있는지 여부를 평가하기 위해 임상 치료 실험을 수행 하였다. 우리는 발견 0.01-0.0025 %에서 치료 농도를 감소시키고 (11)로부터 치료 기간을 감소시킴으로써5 분 화장실 -6 일, 개구리 적은 부작용 적은 치료 관련 사망률과 BD 감염으로 치료 될 수 있습니다.

서론

수륙 양용 비행기는 현재 모든 척추 동물 분류군 ^1의 생물 다양성에 가장 큰 감소를 경험하고 있습니다. . Chytridiomycosis, chytrid 곰팡이 병원균 Batrachochytrium의 dendrobatidis (BD)에 의한 피부 질환, BD는 생물 다양성 손실의 원인에 대한 기록에 최악의 병원균이 극적으로 감소 ^2의 주요 원인 중 하나입니다 그것은 양서류 600 종 이상 감염되어있다 많은 200 종의 멸종 위기 또는 ^2,3 멸종있는 300 종의 감소를 일으키는 원인이되었다. 양서류 chytrid 균은 특정 호스트되지 않고 심각한 질병을 일으키는 진행하는 BD 감염을 허용하는 호스트의 어떤 자질 불분명하다. Chytridiomycosis 전해질 손실 및 심장 마비 ^4의 결과로, 피부에 이온 채널을 방해하여 죽음의 원인이됩니다. 또한, (된 BD zoospores을 포함하지 않는) BD 상층 액은 올챙이의 면역 반응 ⁵ 의원 원인G 연구원은 BD 부산물 ⁶ 독성을 생산하고 생각합니다.

많은 종은 빠르게 감소하고 있....

프로토콜

윤리 승인 :이 연구와 그 방법은 툴레 인 대학의 동물 사용 및 관리위원회 (. 프로토콜없이 0407)에 의해 승인되었다.

1. BD 감염에 대한 테스트

1. BD에 대한 보라고
   1. 멸균 면봉 면봉 동물 ventrum에 다섯 번, 각 허벅 다리, 양쪽, 45 스트로크의 총 각 다리에 다섯 번. 보라고는 양서류의 피부에 BD에 대한 샘플링의 비 침습적 인 방법입니다.
   2. 부드럽게 DNA의 가장 큰 금액을 면봉에 수집하기 위해 스트로크시 사이에 면봉을 회전.
   3. -20 ℃에서 1.5 ml의 마이크로 튜브에 보관 면봉
2. DNA 추출 및 qPCR의 분석
   1. 동물 조직에 대한 지침에 따라, 시판되는 DNA 분리 키트를 이용하여 면봉으로부터 게놈 DNA를 추출한다.
   2. 보일 다음 정량 실시간 PCR (qPCR에)를 사용하여 추출 된 DNA를 분석 등 ^17, 다음과 같이 수정과. :
   3. 이중 탈 이온수로 DNA 추출 샘플보기 1:10 희석.
   4. PCR 억제를 방지하기 위하여 소 혈청 알부민 (BSA)의 ....

결과

모든 동물 사주 종료 치료 후 BD-음성 인 경우 이트라코나졸 치료가 성공한 것으로 간주되었다. 치료를 시작하기 전에 치료가 끝난 사주 후, BD-양성 대조군 동물 16,765.12의 평균 유주자 부하가 있었을 때 2 주 접종 후, 모든 BD-접종 동물 ((17.34 ±) 1,121.7의 평균 유주자 부하, 감염 ) 14643.08를 ±.

Incilius nebulifer의 치료 (N = 15) 6 일 동안 다섯 분 동안 0.0025 % 이트라코나졸 농도 화장실을 사용하여 하루에 성공했다. (그림 1B)의 많은 : BD-양성 대조군 (χ _2,1 = 2.17, 특급 (B) = 20,500, p = 0.339 콕스 회귀)에 비해 이트라코나졸 치료이 낮은 농도로 투여는 사망률에 유의 한 차이가 없었다 누구는 BD 감염 재판이 끝날 때까지.......

토론

이 프로토콜을 이용하여, 우리는 안전하고 효과적으로 양서류 BD에 대한 이트라코나졸의 치료 치료 복용량 및 시간을 절감 할 수 있었다. 가장 낮은 처리 용량과 시간 (6 일 동안 0.0025 %)이 subclinically 감염 I.에 대한 성공적인 치료했다 nebulifer. 낮은 투여 량 및 처리 시간 모두의 효과는 양서류 모든 종 및 나이 클래스에 사용될 제공된 안전하고 효과적인 치료법은 없기 때문에, BD 감염 치료를위한 임상 치료 실험의 필요성을 설명한다.

이트라코나졸 치료로 인한 사망의 원인은이 점 ^(11)에서 알 수 없습니다. 부검 및 조직 병리학은 Brannelly 등. ¹⁵ 연구에서 치료 기간 중 또는 직후 사망 한 사람의 작은 하위 집합에 실시되었다. 그것은 어떤 동물이 죽지 않았다 분명하지만 이러한 분석의 결과는 죽음의 원인에 대한 결정적.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.1% 수성 이트라코나졸, Sporonox	Janssen Pharmaceutica Inc.
NaCl	Fisher Scientific	S640-500
KCl	Fisher Scientific	BP366-1
CaCl2	Fisher Scientific	BP510-100
NaHCO3	Fisher Scientific	BP328-500
멸균 면봉	의료 및 와이어 장비	MW113
1.5ml 마이크로튜브	Sarstedt	73.703.217
Qiagen DNEasy 혈액 및 조직 키트	Qiagen	69581
7500 Real-time PCR	Applied Biosystems	4351104
VIC IPC	Applied Biosystems	4308323
BSA	Applied Biosystems	AM2618
Agar	Invitrogen	30391023
트립톤	인비트로겐	Q10029
페니실린-스트렙토마이신	인비트로겐	15070-063
페트리 디쉬	시그마 알드리치	CLS430589