의 기능적 성능을 평가<em&gt; MDX</em&gt; 마우스 모델

요약

신경 근육 질환에 대한 임상 시험에서 일차 결과 측정은 일반적으로 근육의 기능을 향상시킬 수있다. 따라서, 마우스 모델에서 임상 적으로 전치 근육 성능에 잠재적 인 치료 화합물의 효과를 평가하는 것은 매우 중요하다. 우리는 여기서이 문제를 해결하기 위해 여러 기능 테스트를 설명합니다.

초록

Duchenne 근육 퇴행 위축 (DMD)는 더 치료를 사용할 수 없습니다되는 장애를 낭비 심각하고 진보적 인 근육이다. 그럼에도 불구하고 몇 가지 잠재적 제약 화합물 및 유전자 치료 방법은 임상 시험으로 진행했다. 이 시험에서 가장 중요한 끝 지점이되는 근육의 기능 개선과 함께, 강조의 많은 근육의 기능, 강도, 상태, 그리고의 조화를 평가하는 임상 사전 기능 테스트를 수행하기 위해, 안정적인 재현성, 쉬운 설정에 배치되었습니다 DMD에 대한 MDX 마우스 모델. 모두 침략과 비 침습적 인 검사를 사용할 수 있습니다. 질병을 악화하지 않는 시험은 질병의 자연사 및 치료 적 개입 (예. 앞다리 그립 강도 시험, 와이어 또는 격자와 로타로드 실행을 사용하여 두 개의 다른 거는 시험)의 효과를 결정하기 위하여 사용될 수있다. 선택적으로, 강제 트레드밀 런닝 질병의 진행을 강화 및 / 또는 평가할 수있다질병의 병리에 대한 치료 적 개입의 보호 효과. 우리는 여기에서 안정적이고 재현 가능한 방법이 가장 일반적으로 사용되는 기능 테스트를 수행하는 방법에 대해 설명합니다. 표준 운영 절차에 따라이 프로토콜을 사용하여 서로 다른 실험실 사이의 데이터의 비교를 가능하게한다.

서론

Duchenne 근육 퇴행 위축 (DMD)는 1:5,000 신생아 소년에 영향을 미치는 가장 일반적인 신경 근육 질환이다. 이 심각하고 진보적 인 근육 낭비 질병은 오픈 리딩 프레임을 방해하고 기능적으로 dystrophin 단백질의 합성을 방지 DMD 유전자의 돌연변이에 의해 발생합니다. dystrophin에 부족한 근육 섬유의 손상을 유도 운동에 취약합니다. 근육의 재생 능력의 고갈에 따라, 인해 손상된 근육의 만성 염증으로, 섬유는 이후 기능의 손실로 이어지는, 결합 조직과 지방으로 대체됩니다. 일반적으로, DMD 환자는 두 번째 10 년의 초기에하지의 보행을 잃게됩니다. 나중에, 또한 팔과 어깨 띠의 근육이 영향을받습니다 환자는 종종 인해 척추를지지하는 근육의 비대칭 약화 흉 요추부 척추 측만증을 개발한다. 보조 환기는 일반적으로 대 후반 또는 20 대 초반이 필요합니다. 호흡과 심장 마비 리드세 번째 또는 네 번째 10 년 ¹ 죽음.

원인이되는 유전자가 25 년 ^{전 발견되었지만,} DMD에 해당하는 치료법은 없습니다. 그러나, 의료 서비스를 개선하고 스테로이드의 사용은 서구 세계 ^3에 수명을 증가하고있다. MDX 마우스와 같은 동물 모델을 이용....

프로토콜

여기에 설명 된 실험은 라이덴 대학 의료 센터 (LUMC)의 동물 윤리위원회 (DEC)에 의해 승인되었다. 마우스는 LUMC의 동물 시설에서 사육하고 12 시간 빛 어두운주기와 개별 환기 케이지에 보관했다. 그들은 물과 표준 차우에 광고를 무제한으로 접근했다.

후술 기능 테스트 중 하나를 수행 할 때, 실험 조건은 엄격하게 편차를 감소하도록 제어되어야한다. 성능이 연령과 성별 사이의 차이로 바람직하게는, 나이, 성별 일치 마우스는 사용되어야한다. 같은 쓰레기에 속하는 마우스는 실험 그룹에 무작위 배정되어야한다. 동물 실험 그룹에 눈을 멀게하는 동일한 연산자로 테스트해야합니다. 테스트는 각각의 마우스와 시간 지점 ⁽¹⁴⁾ 사이에 큰 변화가 모두 관찰 할 수있는 등의 냄새, 소리를, 균등하게 하루 (주말 제외), 같은 방에 같은 시간에 수행해야기능 테스트는, 따라서 6-8 마우스 / 실험군이 사용되어야한다. 기능 테스트 성능은 크게 다른 근친 야생형 균주마다 다를 수 있습니다. 따라서, 실험과 제어 야생형 마우스는 항상 MDX (마우스의 경우 C57BL/10ScSnJ 야생형 균주를 사용) 배경에 대응 한 것이다. 여기에 설명 된 모든 데이터는 우리가 여기에에서와 같은 야생 형....

결과

야생형 및 MDX 마우스의 앞다리 그립 강도 4-12 주 세 사이에 증가하고 오래된 마우스에서 다시 감소시킨다. 힘의 손상은 이미 젊은 MDX 마우스에서 관찰 할 수있다. 구주 된 암컷 생쥐의 대표적인 데이터는도 1a 및 B에 표시됩니다. 피로는이 나이에 아직 변종 사이에 차이가 없습니다 만, MDX 마우스는 야생형 마우스에 비해 약하다. 우리는 나이가 MDX와 야생형 생쥐의 피로도에 아직 데이터가 없습니다.

안정적이고 재현 가능한 결과를 얻기 위해, 여러 평가는 동일한 실험에 의해 수행 될 필요가있다. 우리는 여기 (5 당긴 낮게), 잡아 당기기의 그러나 작은 숫자를 15 회 / 개인을 끌어 설명도 신뢰할 수있는 데이터를 제공합니다. 주의 깊은 관심이 크게 결과에 영향을 미칠 수있는 그리드에 발의 위치에 그려해야합니다. 당김 동안 만 모두 앞발이 사용.......

토론

여기에 제시된 기능 테스트는 재현하기 쉬운 야생 유형과 연령의 독립적 인 이영 마우스에 적용 할 수있다. 테스트는 사전 임상 적으로 근육의 기능, 강도, 상태, 및 조정을 평가하는 유용한 도구를 제공합니다. 질병의 자연사에 대한 화합물의 효과를 시험 할 때, 비 침습적 검사가 여기 (앞다리 악력 모두 거는 테스트 및 로타로드 테스트)을 설명하는 것은 잘이 시험은 연속 일에 수행되는 기능 테스트 정권에 결합 될 수있다 . 이러한 프로토콜은 MDX 생쥐에 유해하지 않으며 세로 방식 ^(10)에 사용될 수있다. 이들 각 테스트의 결과가 아닌 개별 근육의 다른 또는 부분적으로 중복되는 근육 그룹에 의해 생성되는 것을 염두에 보관해야합니다. 따라서, 여러 테스트의 조합을 사용하는 것이 더욱 완전한 그림을 구하는 것이 권장하고 실험의 기능성 이에 대한 통찰력된다정신 그룹. 또한, 발바닥의 근육의 기능 개선은 근육의 생리 측정 ^20을 사용하여 평가 될 수있다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마우스 그립 강도 측정기	Chatillon DFE (Columbus Instruments에서 재판매)	# 80529
교수형 와이어 2 팔다리 장치	천 걸이 또는 맞춤형 장치
교수형 와이어 4 팔다리 장치	쥐 케이지 또는 맞춤 제작 장치
뚜껑 Rotarod	Ugo Basil	# 47600
마우스 용 러닝 머신 Exer 3/6	콜럼버스 악기	# 1055SRM