이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

요약

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

초록

마우스는 종종 때문에 가능한 형질 전환 마우스 및 시약의 넓은 범위에 이식 면역학의 연구에서 심장 이식 기증자와받는 사람으로 사용됩니다. 어려움으로 인해 동물의 작은 크기와 심장 이식에 포함 된 미세의 상당한 기술적 과제로 제시된다. 특히, 초기 이식 후 기술적 인 실패의 높은 비율은받는 사람의 죽음과 같은 뒷다리 마비 또는 비 심장 박동 같은 수술 후 합병증이 발생할 수 있습니다. 여기에, 이소성 마우스 심장 이식을위한 완전한 기술은받는 사람 마우스로 기증자의 마음과 그 이후의 주입을 수확 포함, 보여줍니다. 기증자의 심장은 바로 상행 대동맥과 폐동맥의 차가운 헤파린 식염수와 절개와 현장 관류에 다음 수확한다. 받는 사람의 동작은 다음에, 복부 대동맥과 하대 정맥 (IVC)의 준비를 포함단일 실행 10-0 microsuture 사람과받는 사람 IVC와 기증자 폐동맥 비슷한 문합을 사용하여받는 사람의 대동맥을 가진 기증자의 대동맥의 엔드 - 투 - 측 문합. 수술 후 동물은 0.6 ㎖의 생리 식염수를 피하 주사하고 37 ° C에서 가열 패드에 복구 할 수 있습니다. 227 마우스의 심장 이식의 결과는 86.8 %의 48 시간에서 성공률 요약되어있다. 15 (6.6 %)이 48 시간 이내에 사망하는 동안 48 시간 내에 13.2 %의 실패, 5 (2.2 %), 허혈성 손상 및 / 또는 혈전증 접목에 의한 비 심장 박동을했다 뒷다리 마비, 10 (4.4 %)을 경험 .

서론

장기 이식 동물 모델은 임상 이식 환자의 치료를 개선하기위한 가치있는 정보를 제공 할 수있다. 마우스 모델에 의한 유전자 변형 쥐와 다른 동물 모델 ^1-3을 사용할 수 없습니다 생쥐의 특정 시약의 넓은 범위에 장기 이식 거부 나 수용의 면역 메커니즘을 연구하는데 특히 유용하다. 이식 마우스 모델 도전은 만족스러운 결과를 달성하기 위해 상당한 전문적인 기술을 필요로하는 기증자와받는 사람의 작은 크기입니다.

기술은 첫 번째 이후 코리 등 ^(5)에 의해 마우스의 심장 이식을 위해 적응 된 쥐 ⁴ 마음의 이소성 이식에 대해 설명했다. 이 기술은 전에 기증자의 작업에 대한받는 사람과 이식 된 심장 또는 t의 생존을 손상 할 가능성이 둘 중 기증자의 심장, 전혀 살포를 준비하고 참여그가받는 사람. 원래 이식 거부와 관용 ^6-8의 메커니즘을 조사하는 바와 같은 절차는 널리 사용되어왔다. 기타 마우스 ^9,10 심장 이식 오노와 린지의 원래 쥐의 심장 이식 절차를 적용했다. 최근 기술은 코리 등 ^11의 방법과 관련된 몇 가지 문제를 극복 마우스 심장 이식 출판되었다. 프로토콜은 여기에 설명 포함 모트 람 <....

프로토콜

이전 실험의 시작에, 계획 한 실험에 대한 관련 기관의 동물 관리 윤리위원회의 승인을 얻을 수 있습니다. 교육 기관의 요구 사항에 따라 쥐를 유지한다. 다음 프로토콜은 시드니 대학과 로얄 프린스 알프레드 병원위원회에 의해 승인되었습니다.

이전에 수술을 시작으로, 모든 장비는 철저하게 청소해야하고 80 % 에탄올에 담가 살균. 일부 기관은 그러나이 장기간에 걸쳐 미세 미세 수술 장비를 손상시킬 수있는 고압 증기 멸균을 규정. 가능하면 사용 멸균 일회용 장비.

1. 마취

1. 밀폐 된 용기에 이소 플루 란으로 마우스를 마취 한 후 신속하게 마취 코 콘을 연결, 운영 칠판에 부정사 배치합니다. 더 반사가 없도록하기 위해 뒷발을 곤란하게하여 마취의 시험 적정성.
2. 수술 칼날로 피부를 면도80 % 에탄올로 소독. 또, 70 % 이소 프로필 알코올 2 % 클로르헥시딘 피부 소독을 위해 사용될 수있다. 마취 유도시 이소 플루 란 농도는 3 %이지만, 유지 보수를 위해 1.5 %에이를 줄일 수 있습니다. 일반 호흡과 심장 박동을 유지하기 위해이 농도에 약간의 조정을합니다. 가열 패드에 동물의 온도를 유지한다.

2.....

결과

초기 훈련 기간 후에, 우리 그룹의 마우스 이소성 심장 이식 227 케이스를 분석 하였다. 제 24 시간 이내 성공률은 90.3 %이었고, 48 시간에서 그것은 86.8 %였다. 48 시간 내에서 30 (13.2 %), 실패, 5 (2.2 %), 뒷다리 마비를 경험하고 안락사했다, 10 (4.4 %)이 동안 15 인해 이식 허혈 손상 및 / 또는 혈전증에 비 심장 박동을했다 (6.6 %)은 48 시간 이내에 사망. 일부 실험 그래프트 생존율은 스트레인 다양한 조합으로 표 1에 나타낸다. 동일하지 않은 균주 사이의 이식이 거부하는 동안 같은 기증자와받는 사람의 긴장과 심장 이식은 장기를 허용했다.

이식 된 심장의 외관은도 1에 도시된다. 심장 심장의 등장과 함께 멎 때 심장 이식 실패의 원인은 일반적으로 이식 후 시간에 의해 결정된다. 필요한 경우, 원인비트의 중단으로 심장의 조직 학적 분석으로 확인해야합니다. 예를 .......

토론

마우스 심장 이식 마스터에 상당한 수술 기술을 필요로하는 어려운 미세 수술 방법입니다. 가장 어려운 부분은 혈관의 작은 직경이다. 또, 수신자 동작 시간 및 출혈을 제한하는 것이 필요하다. 마우스의 심장 이식에 대한 기술은 첫 번째 코리 등으로 설명했다. 1973 년 이후에 모트 람 등 ^(12)에 의해. 우리의 수정은 다음 사항을 포함한다. 첫째, 곧 관류 후 대동맥과 폐동맥 번들의 개흉술과 절개 다음 차가운 헤파린 식염수 기증자의 심장을 즉시 살포 수확하는 동안 따뜻한 국소 빈혈을 방지 할 수 있습니다. 둘째, 대신 기증자 전에 수신자를 준비 곧 기증자 수확 완료 후받는 사람의 준비, 시작, 생존 결과의 개선과받는 사람의 복부 노출 시간을 줄일 수 있습니다. 마지막으로, 작은 atraumatic 용기의 사용은 B로 클램프받는 사람 대동맥 / IVC 번들 대신 관계의 혈액의 흐름을, 잠금, 일반적으로 혈관에 덜 손상을 초래하고 뒷다리 마비의 발생을 줄일 수 있습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
작동 현미경	Leica, Heerbrugg, 스위스	M651	10-25X 배율
마취기	Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia	Vett3	공기 중에 이소플루란과 산소의 혼합물을 전달할 수 있음
운영 보드	철물점 또는 사무용품		공급 업체 조밀한 코르크 또는 합성 핀을 취할 수 있음
헤파린 식염수 (5 U/ml, 4 ° C)	화이자, 미국	FW25	얼음에 23G 바늘과 1 ml 주사기에
일반 식염수 (37 ° C)	AstraZeneca Pty Ltd, Australia	4538	따뜻한 패드에 23G 바늘이 있는 1ml 주사기에
봉합사 10- 나일론, 5-0 Vicryl	Ethicon, Inc. NJ, USA	2870G/J421H
부프레노르핀(0.1ml 식염수 중 0.05mg/kg)	Reckitt Benckiser, 시드니, 호주		얼음에 23G 바늘이 있는 1ml 주사기에
암실린(0.1ml 식염수 중 5mg/kg)	아스펜, 시드니, 호주		1ml 주사기에 23 G 바늘 얼음
젤 거품	Pharmacia & Upjohn Co. USA	801289304	작은 조각으로 절단
고온 소작 장치	Medtronic, USA	8444000
가열 패드/오른쪽 온도	Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790
Microsurgery instruments:	Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.,
Microneedleholders	상하이, 중국	WT2020
Microscissors	"                  "	WT1020
마이크로핀셉스(팁이 곧은)"	"                  "	WA3010
마이크로 집게 (곡선 팁)"	"                  "	WA3020
마이크로 모기 클램프 (1 쌍)"	;       "                  "	W40350
Microvessel 비외상 클램프 (1 쌍)"	;       "                  "	W40130/W40150