Trypanosomes에서 RNA 편집에 대한 마약 검사에 대한 기자로 RNA 촉매

Houtan Moshiri; Vaibhav Mehta; Reza Salavati

doi:10.3791/51712

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방법 논문

Trypanosomes에서 RNA 편집에 대한 마약 검사에 대한 기자로 RNA 촉매

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DOI:

10.3791/51712

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2014년 7월 22일

Houtan Moshiri^*¹^,² , Vaibhav Mehta^*¹^,² , Reza Salavati¹^,²^,³

¹Department of Biochemistry, McGill University, ²Institute of Parasitology, McGill University, ³McGill Centre for Bioinformatics, McGill University

^* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

트리파노소마티드 병원체에서 RNA 편집의 고유한 과정을 표적으로 하는 화학 물질의 고처리량 스크리닝에 적용할 수 있는 고감도 리보자임 기반 분석이 이 논문에 설명되어 있습니다. 억제제는 RNA 편집 과정에 대한 가설 기반 분석을 위한 도구로 사용될 수 있으며 궁극적으로 치료제로 사용될 수 있습니다.

초록

실질적인 진전은 trypanosomes에있는 미토콘드리아 RNA 편집의 메커니즘을 결정을했다. 마찬가지로, 상당한 진전은 RNA 편집을 촉매 editosome 착체의 구성 요소를 식별하는 제되었다. 그러나, 그 단백질이 함께 작동하는 방법을 아직 분명하지 않다. editosome 대하여 높은 처리량 스크린에서 얻어진 화합물은 편집주기에서 하나 이상의 단계를 차단하거나 영향을 미칠 수있다. 따라서, 새로운 화합물의 확인은 editosome 기능과 어셈블리를 해부에 대한 가치있는 분자 프로브를 생성합니다. 이전 연구에서, 시험 관내 편집 분석법은 무선 - 표지 된 RNA를 사용하여 수행 하였다. 이러한 분석은 시간에 비효율적이고 높은 처리량의 목적에 적합하지, 소모적이다. 여기서, 균일 한 형광 기반의 "혼합 측정"RNA 편집을 모니터링하는 망치 리보 자임 체외 기자의 분석을 제시한다. 만의 RNA 편집의 결과로해머 헤드 리보 자임 형광 공명 에너지 전달 (FRET) 올리고 리보 뉴클레오타이드 기판 분열을 거친다. 이것은 차례로하여 신호를 생성하는 형광 소광로부터의 분리를 초래한다. editosome 기능이 저해되는 경우 반대로, 형광 신호가 급냉 될 것이다. 이 체외 RNA 편집 또는 editosome 기능을 억제 할 수있는 화학 물질의 높은 처리량 검사에 모니터에 일반적으로 적용되어야 매우 민감하고 간단한 분석이다.

서론

RNA 편집, mRNA의 전사 후 개질 공정은, 제 ¹ trypanosomatids에서 발견되었다. 그 이후로, 실질적인 작업은 Trypanosoma brucei ^2,3에서 RNA 편집의 뒤에 기계를 연구 실시하고있다. 일련의 효소 반응에서 editosome 약 20 단백질의 코어 복합체는, 에너지 발생 산화 적 인산화 시스템의 여러 구성 요소를위한 성숙한 미토콘드리아의 mRNA를 생성한다. 촉매 이벤트의 순서는 가이드 RNA를 (gRNAs)에 의해 결정으로, endonucleolytic 분열, 우리 딜 (U) 추가 또는 삭제, 결찰입니다 ^4.

코어 editosome 복잡한 단백질 외에도 소품 요인도 ^5-7을 확인되었다. 이 단백질은 주로 독립적 인 단지로 분류 볼 수 있습니다. 그러나, 코어 editosome 복잡 단백질 어셈블리의 순서와 소품과 코어 복합체의 상호 작용 패턴착물은 아직 결정되지하다. trypanosomatids에서 RNA 편집 과정을 대상으로하는 화학 dissectors를 제공 할 수 있다는 editosome 복합체의 조립 및 기능을 공부에 도움. 또한, 여러 editosome 단백질의 기능 연구는 약 ^{8 ~ 12을<....}