거미 진드기, 실험 식물의 침입, 그리고 식물의 손상 평가의 균일 한 시료의 효율적인 준비를위한 프로토콜, 식물 해충의 상호 작용의 연구에 필요한이 개발되었다.
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이 논문에서
요약
초록
두 점박이 응애, 점박이 응애는 경제적 가치의 150 개 이상의와 종의 매우 광범위한, 피드 유비쿼터스 광식 절지 동물 초식 동물입니다. 그것은, 특히 가지과와 박과 같은 옥수수, 면화와 같은 (예를 들면, 토마토, 가지, 고추, 오이, 호박) 및 온실 장식물 (예를 들면, 장미, 국화, 카네이션), 연간 필드 작물 (에, 온실 작물의 주요 해충이다 대두, 사탕무), 및 다년생 문화 (알팔파, 딸기, 포도, 감귤,, 자두), 2에서. 그것은 중요한 농업 해충, T. 만드는 극단적 인 polyphagy에 추가 응애는 제어 3-7에 사용되는 살충제 및 살비제의 다양한 저항을 개발하는 경향이있다.
T. 응애는 (27 ° C에서 7 일 간) 빠른 수명주기를 가지고, 훌륭한 실험 유기체쉽게 실험실에서 고밀도로 유지 될 수있다. (현장 하이브리드 항체 염색법에 포함) 유전자 발현을 분석 실험하고 RNA 간섭을 이용하여 거미 진드기 내인성 유전자의 발현을 불 활성화하는 방법은 8-10 개발되었다. 최근, T.의 전체 게놈 서열 응애는 이미 기주 식물 (애기 장대와 토마토 까 lycopersicum) (11)의 일부에 존재하는 상응하는 게놈 자원 모델 생물로이 해충 초식 동물을 개발할 수있는 기회를 만들어보고되고있다. 함께,이 모델 생물은 식물 해충의 상호 작용의 분자 기초에 대한 통찰력을 제공 할 수있다.
여기에 빠르고 쉽게 성인 여성 진드기의 큰 숫자의 컬렉션, 실험 공장 호스트에서 자신의 응용 프로그램 및 때문에 거미 진드기의 먹이 식물 손상의 평가를위한 효율적인 방법이 설명되어 있습니다. EN 제시 프로토콜이후 실험적인 응용 프로그램에 사용할 수있는 모든 발달 단계 (계란, 애벌레, 애벌레, 성인 남성 및 여성)에 개인의 수백의 신속하고 효율적인 수집을 에이블 스.
서론
식물 해충의 상호 작용이 큰 과학 및 경제적 중요성의 주제입니다. 그것은 역사적으로 (예, 토마토 등) 모두 작물과 모델 식물, A.를 사용하여 조사 하였다 장대. 두 경우 모두, 초식 동물에 식물의 감수성은 초식 동물의 공격 또는 간접적으로 해충의 성능 평가를 통해 직접 식물의 표현형의 평가를 통해 하나를 측정 할 수있다.
식물 감수성의 직접적인 측정은 다양한 방법을 사용하여 해충 종의 개수에 대해 이전에 사용되었다. 예를 들어, 나비목 유충의 초식 동물은 격자 (12)의 도움으로 육안으로 배추 xylostella (나방) 또는 Trichoplusia NI (양배추 자벌레) 중 하나에 의해 소비 식물 조직의 일부의 추정으로 측정된다. 또한, 이후의 정량 이미지 분석과 잎 손상의 디지털 이미징을 활용 방법이 있습니다. 이러한 방법이 사용되었다A. 연구 Frankliniella occidentalis (서양 꽃 총채 벌레) 13 Scaptomyza의 Flava의 (잎 마이닝 초파리) (14), 및 T.와 장대의 상호 작용 NI 15....
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프로토콜
거미 진드기 인구의 1. 유지 보수
참고 : 거미 진드기는 (파세 러스 불가리스)가 캘리포니아 붉은 강 낭 콩에서 사육된다.
- 이전에 감염 2 ~ 3 주에 씨앗에서 콩 식물을 성장.
- 감염된 식물 인터는이 식물; 성인 진드기 빠르게 신선한 식물 재료에 정착합니다.
- 신선한 식물로 대체, 7 ~ 10 일마다 이전 만연 된 콩 식물을 제거합니다.
2. 성인 여성 진드기를 수집
- 세척 방법을 사용하여 컬렉션 진드기
- 진드기를 수집하려면 1 ~ 2 일 전에 실험에 감염 식물과 접촉 신선한 콩 식물을 배치.
- 1,000 ~ 2,000 성인 여성 진드기를 수집하기 위해 20 ~ 30 신선한 콩 식물을 사용합니다.
- RT 수돗물을 사용하여 0.001 %에서 트윈 20 용액을 준비합니다.
- 한 번에 2 ~ 3 식물을 사용하여, 트윈 20 용액에 오염 된 콩 식물을 씻으십시오.
- 각각의 식물은 잎의 모든 진드기를 수집하기 위해 2 - 3 배를 세척한다.
- 단계를 완료 진드기 사망을 피하기 위해 10 분 이내 2.1.4....
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결과
20 ~ 30 오염 된 콩 식물을 사용하여, 하나는 체를 사용하여 약 2,000 성인 여성 진드기를 수집 할 수 있습니다. 진드기를 전송하는 브러시를 사용하면 식물 당 20 진드기 10 식물 만연하는 데 필요한 시간은 약 15 분이다. 컬렉션 및 응용 방법의 조합은도 2에 나타낸다.
이 프로토콜은 수집 된 진드기 비슷한 생리 학적 상태와 식물 거미 진드기의 상호 작용 연구에 적합합니다 (그림 3)의 것을 보여주는, 식물 손상의 재현 가능한 결과를 생성합니다. 프로토콜의 재현성을 평가하기 위해, 성인 여성 진드기는 20 진드기가 삼주 이전 A.의 장미 잎에 배치 된 세척 방법을 사용하여 수집 된 젖은 브러시로 장대 식물 (기탁 골-0). 처리 된 식물이 스캐닝 하였다 사일의 postinfestation 손상의 면적은 전술 한 기술을 사용하여 정량 하였다. 반복 실험 결과의 비교는 ANO.......
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토론
이 동영상은 분리하고 성인 여성 진드기 많은 수의 식물을 만연하는 데 사용되는 프로토콜을 보여줍니다. 우리는 A.를 사용하여이 프로토콜을 제시하지만 장대, 어떤 식물 거미 진드기의 상호 작용 시스템에 사용할 수 있습니다 및 현재 성공적으로 토마토와 포도 (비 티스 VINIFERA) 식물에도 적용되고있다. 수집 된 진드기 (그림 3) 비교 생리 학적 상태에 있음을 나타내는 프로토콜 수익률 재현 가능한 결과.
이러한 프로토콜을 수행하는 간단하지만 그들은 진드기 회복에 영향을 미치기 때문에, 몇 가지 중요한 단계는 특별한주의가 필요합니다. 잎에서 세탁 진드기는 동시에 최대 세 콩 식물에서 수행하고, 실온에서 물을 사용하여 10 분 이내에 완료해야합니다. 또, 진드기 급속 건조 체에 확산되어야한다. 진드기 회복이 만족스럽지 않은 경우, 트윈 20 세제의 권장 금액은 우리 여부를 확인하는 것이 중요합니다ED.......
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
이 프로젝트는 Genome Canada와 Ontario Genomics Institute(OGI-046) 및 Ontario Research Fund–Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035(M.G. 및 V.G.로)를 통해 캐나다 정부의 자금 지원을 받았습니다.T.V.L.은 Fund for Scientific Research Flanders(FWO)의 박사 후 연구원입니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 식물 재료 : | |||
| 캘리포니아 붉은 강낭콩 | 스톡스, 소롤드, 온타리오, 캐나다 | 2 주령, 사용 2-3 일 전에 거미 진드기에 잘 감염됩니다. Phaseolus vulgaris의 다른 품종을 사용할 수 있습니다. | |
| 화학 물질 : | |||
| 트윈 20 | 시그마 -알드리치 | P9416 | 1 % 스톡 용액은 수돗물 분취 |
| 2 L 비커 | |||
| 종이 타월 | |||
| 체의 세트 | 사내에서 | 자세한 지침을 사용할 수 있습니다 | |
| 얇은 브러시 | |||
| 피펫 | |||
| 피펫 팁 | 0.2 및 1 ml | ||
| 1.5 ml 원심 분리기 튜브 | |||
| 공기 펌프 | : 공기 흐름이 반전된 수족관 유형 펌프. 진공 라인을 사용할 수 있습니다. 필요한 압력 강하는 약 2-4psi입니다. | ||
| 입체경 | |||
| 스캐너 | Epson | V30 | 스캔 품질을 필요한 수준으로 제어할 수 있는 모든 평판 스캐너. 우리는 실험에 Epson V30을 사용합니다. |
| 컴퓨터 | , Windows 또는 OS X, PC, 스캐너, 하드웨어 및 Adobe Photoshop 소프트웨어와 호환됩니다. | ||
| Adobe Photoshop 소프트웨어 | Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA | 다양한 | 히스토그램 도구가 포함된 모든 버전. |
참고문헌
- Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. Mites injurious to economic plants. , University of California Press. (1975).
- Migeon, A., Dorkeld, F. Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae. http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).
- Croft, B. A., Van....
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재인쇄 및 허가
