하나 나노 미터의 정확도와 형광 이미징 (피오나)

Yong Wang; En Cai; Janet Sheung; Sang Hak Lee; Kai Wen Teng; Paul R. Selvin

doi:10.3791/51774

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방법 논문

하나 나노 미터의 정확도와 형광 이미징 (피오나)

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DOI:

10.3791/51774

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2014년 9월 26일

Yong Wang^*¹^,² , En Cai^*¹^,² , Janet Sheung¹^,² , Sang Hak Lee¹^,² , Kai Wen Teng²^,³ , Paul R. Selvin¹^,²^,³

¹Department of Physics, University of Illinois at Urbana-Champaign, ²Center for the Physics of Living Cells, University of Illinois at Urbana-Champaign, ³Center for Biophysics and Computational Biology, University of Illinois at Urbana-Champaign

^* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

단일 형광체는 피오나를 사용하여 나노 미터 정밀도로 지역화 할 수 있습니다. 여기에 FIONA 기술의 요약보고, 어떻게 FIONA 실험을 수행하는 기술이다.

초록

한 나노 미터 정밀도 (피오나)와 형광 이미징은 xy 평면에서 나노 미터 정밀도로 하나의 형광체 국산화에 대한 간단하지만 유용한 기술이다. 여기 피오나 기술의 요약보고되고 피오나를 사용하여 수행 한 연구의 예를 다음과 같이 간략하게 설명되어 있습니다. 먼저, 어떻게 광학 정렬을 안내해 즉 FIONA 실험, 전반사 형광 현미경 (TIRFM)에 필요한 장비를 설정하도록 설명된다. 다음 방법에 양자 도트로 표지 한 절두 미오신 버지니아 모터의 36 nm의 스텝 사이즈를 측정 FIONA 사용 하였다 적절한 프로토콜을 이용하여 고정화를 Cy3-DNA 단일 분자 국산화에 간단한 FIONA 실험을 수행하기 위해 도시되어있다. 마지막으로, 두꺼운 샘플 피오나의 응용 프로그램을 확장하기위한 최근의 노력이보고됩니다. > (이 침수 목표를 사용하여, 그 표시되고 양자점은 졸 - 겔 토끼 눈 각막에 깊이 배어200 μm의), 2 ~ 3 나노 미터의 현지화 정밀도는 달성 될 수있다.

서론

1882 년경 에른스트 아베는 가시광 현미경의 해상도가 있음을 발견 ~ λ / 2Na를, (λ는 파장이며, NA는 개구 수) ^1.2 ~ 200 나노 미터 또는. 따라서이 치수보다 작은 물체는 광학 현미경의 회절 제한 된 점으로 나타납니다. 그러나, 훨씬 더 높은 정밀도로 ³ 인 스폿의 중심, 물체의 위치를 결정하는 것이 가능하다. 한 나노 미터 정밀도 (피오나)와 형광 이미징은 xy 평면 ^사에 나노 미터 정밀도로 하나의 형광체 국산화에 대한 간단하지만 유용한 기술이다. 위치 파악의 정밀도는, σ _{μ (즉,} 평균의 표준 오차)는, 수집 된 광자의 전체 수에 의존 figure-introduction-1 N은 광자 개수이고, S는 형광 스폿의 표준 편차이며,는화소 촬상 검출기의 크기, b는 백그라운드 ^3,4의 표준 편차이다. ~ 10000 광자를 방출하는 형광의 경우, 피오나 ~ 1 nm의 정밀도 ^4를 얻을 수 있습니다.