여러 제브라 피쉬에의 약국 (FDA)의 새로운 방법 ( 다니오의 레 리오 (rerio))와 철수의 정량화

요약

물고기를 약물에 노출시킬 때 변동성을 줄이는 새로운 방법을 설명합니다. 다양한 패턴의 에탄올 노출에 노출된 물고기는 밝은/어두운 스코토택시 분석에서 금단 기간 동안 불안 수준이 변화된 것으로 밝혀졌습니다.

초록

제브라피쉬의 불안 테스트는 종종 약리학적 물질의 적용과 함께 연구됩니다. 이 연구에서 물고기는 일상적으로 그물에 걸려 가정용 수족관과 투여 탱크 사이에서 운송됩니다. 화합물 투여의 용이성을 향상시키기 위해, 약물 투여를 위해 탱크 간에 물고기를 옮기는 새로운 방법이 개발되었습니다. 산란을 위해 설계된 삽입물을 사용하여 물고기 그룹을 약물 용액으로 옮겨 그룹 내의 모든 물고기를 정확하게 투여할 수 있었습니다. 이는 투여의 정밀도와 효율성을 증가시켜 반복적인 약물 투여의 긴 일정에서 매우 중요합니다. 우리는 21일 일정이 다른 에탄올을 투여한 후 밝은/어두운 테스트에서 제브라피쉬의 행동을 조사하는 연구에 사용하기 위해 이 절차를 구현했습니다. 매일 적당량의 알코올에 노출된 물고기의 경우, 금단 2일 후 대조군과 비교할 때 위치 선호도에 상당한 차이가 있었습니다. 그러나 매주 폭식 투여에 노출된 그룹에서 위치 선호도에 대한 유의한 차이는 관찰되지 않았습니다.

이 프로토콜은 수용성 화합물의 모든 유형과 함께 사용하도록 일반화 될 수 있으며 긴 약물 투여 일정 중 또는 그 이후의 물고기의 행동을 검사 할 때 모든 상황에서 사용할 수 있습니다. 라이트/다크 테스트는 또한 금단 증상으로 인한 불안의 변화를 평가하는 유용한 방법입니다.

서론

제브라 피쉬 (다니오 레 리오 (rerio)는) 행동 ¹ 및 의료 연구 ^2,3를위한 유용한 모델 생물 인도에서 발생하는 작은 경골 종입니다. 제브라 피쉬는 또한 일반적으로 거동에 미치는 영향을 특성화하기 위해 다양한 약리 물질의 시험에 사용된다. 다양한 투여 량 및 약물 투여 스케줄 같은 자극제 ^{4, 5} 및 항불안제 에탄올 ^6-8과 같은 화합물의 투여 후 지브라 피쉬의 거동을 조사하기 위해 사용되어왔다.

우리 연구소는 또한 일반적으로 scototaxic 분석이라 잘 검증 빛 / 어둠 분석 ^{9, 20,에} 제브라 피쉬의 불안과 운동에 에탄올 관리의 일정을 다른의 효과를 조사했다. 에탄올 투여 새로운 방법은 장기간 (이십일일) ⁶ 위에 반복적 인 매일 투여 효율성을 높이기 위해 개발되었다 까지. 이전에 사용 된 방법은 그러나, 우리는 관련 시간 비용, 그물 감소 방법을 개발하고자, 물고기 많은 관심 약물의 동시 투여를 정확하게 타이밍 허용 실용적이었다. 기존의 연구를 사용하여 에탄올, 제브라 피쉬는 그물로하고 에탄올과 물을 ^{10 ~ 12의} 적절한 혼합물을 포함하는 다른 하나의 탱크에서 ....

프로토콜

모든 절차 및 행동 시험은 관리 및 실험 동물의 사용을 위해 동물 관리의 가이드 라인에 대한 캐나다 협의회 준수 프로토콜 번호 06-11-12, 아래 MacEwan 대학의 동물 연구 윤리위원회에 의해 승인되었습니다.

1. 정량 주입 탱크, 솔루션 및 관리 일정을 준비

1. 동물은 동일한 환경에서 시각적 자극에 시간이나 편향 어떤 혼동을 피하기 위해 하루 중 같은 시간 동안 투여되도록 관리 스케줄을 준비한다.
2. 그룹 크기의 수를 필요한만큼 동일, 1.5 L, 명확한 폴리 프로필렌 산란 탱크를 얻습니다. 물고기의 2 그룹에 대한 수 탱크 당 8 물고기의 사용 그룹이 과정에서 나중에 하루에 테스트 할 (3 단계 참조). 하나의 저장 탱크 및 그룹 당 하나의 투여 탱크 (그룹의 2 배 총 수)를 사용합니다.
   1. 모든 저장 탱크에 400 μm의 산란 삽입을 놓습니다. F병 서식지 물이나 올바른 온도에서 삼투 물을 역으로 탱크 (제브라 피쉬를 들어, 25 ~ 28 ° C) 온도 생선과 일치 일반적으로 수용된다.
      주 : 일부 약물과 버퍼 서식지 물의 화학 성분 사이의 바람직하지 않은 화학적 상호 작용이있을 수 있습니다. 이 상황에서, 역방향 약물 투여없이 또는 최소한....

결과

상기 한 바와 같이이 일관되고 정확하게 시간에 에탄올 관리의 지속 시간 중요하다 제브라 피쉬와 약리 연구의 정확성과 제어를 유지합니다. 우리의 절차는 절차 투여의 용이성 및 처리량을 증가시킬 수있다. 주간-파티 또는 매일 중등도 중 일정에 에탄올을 투여 대조군과 비교, 빛 / 어둠 테스트로 측정 변경된 불안 수준, 결과. 이틀 마지막 투여 후 시험 할 때, (어떤 술을받은,하지만 여전히 투여 탱크로 이동 한) 대조군 제브라 피쉬는 (경기장의 어두운면에 제어 물고기 지출 훨씬 더 많은 시간과 행동의 예상 패턴을 표시 다른 연구 ^6,9,13에서 순진 제브라 피쉬와 유사한 그림 2A). (그림 2B 마지막 에탄올 투여 후 2 일 시험했을 때 주간 파티 그룹의 물고기는 작업에 밝거나 어두운 두 영역에 대한 선호를 보이지 않았다 (그림 2C)의 빛 쪽을 선호; 대조군 대조적. 환경 지수는 제어 및 매일 적당한 그룹 (그림 2D) 사이에 유의 한 차이가 나타.......

토론

제브라 피쉬에서 약물 투여와 관련된 이전의 연구는 단순히 약물 솔루션 ^{(12, 16)에} 자신의 집 탱크에서 그들을 수송하는 물고기를 그물에 의존했다. 그물은 항상 일치하지 않습니다 종종 인해 상당한 약간의 차이가있는 제브라 피쉬의 탈출 응답하는 데 예상보다 시간이 오래 걸립니다. 기존의 전송 방법은, 유용하지만, 물고기가 물 이외의 총 소요 시간의 양을 감소뿐만 아니라 동물 간의 전송 시간에 변동의 양을 감소시킴으로써으로 향상 될 수있다. 실용성을 향상시킬뿐 아니라,이 방법은 연구자에게 동시에 시간의 정확한 양 용액 물고기의 큰 그룹을 투약 할 수있는 능력을 준다. 이전 방법 중 하나는 하나의 물고기를 투여, 또는 동시에 물고기의 그룹을 전체 그물을 시도해야합니다. 후자는 어색하고 어려운 작업 인 반면 전자는 느리고 처리량을 감소시킨다. 또한, 모션 추적 시스템이 C이 방법의 정밀도 혜택을 누릴 수 있습니다 한 번에 여러 물고기의 행동을 평가. 물고기는 모든 물고기 경기장에 동시에 노출 근처에 확인 할 천수.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
3단 선반 벤치탑 하우징 시스템	Aquatic Habitats	N/A
400 μm 배플이 포함된 1.5 L 산란 탱크	Aquatic Habitats	N/A
순수 곡물 에탄올	Luxco, INC	N/A
Ethovision XT 동작 추적 소프트웨어	Noldus Information Technology
피펫	Eppendorf Canada
명암 인식 장치(Light/Dark Arena)	Custom		절차 설명서에 따라 제작. 너비 9.5 cm, 깊이 9.5 cm, 길이 55 cm.