우리는 병변 부위에 이식 팔주 배아 뇌간 신경 줄기 세포 후 T4 척수 가로로 쥐 심혈관 매개 변수를 기록하기 위해 무선 원격 측정 시스템을 사용하기위한 프로토콜을 제시한다. 텔레 메 트리 정확하게 의식이 자유롭게 이동 척수 손상 쥐의 심장 기능을 평가하는 첨단 기술이다.
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방법 논문
무선 원격 측정 시스템은 척수 절개 및 배아 신경 세포 이식 줄기와 흰쥐의 심장 혈관 기능을 모니터링 할 수
이 논문에서
요약
초록
높은 흉추 또는 경추 척수 손상 (SCI)는 심장 혈관 기능 장애로 이어질 수 있습니다. 심혈관 매개 변수를 모니터하기 위해 또는 녹색 형광 단백질을 발현하는 배아 뇌간 유래의 신경 줄기 세포의 그라프없이 T4 척수 절개를받은 쥐의 대퇴 동맥에 무선 송신기에 연결된 카테터를 주입. 이러한 캐뉼라 삽입 또는 꼬리 - 커프와 같은 다른 방법에 비해, 원격 측정은 연속적으로 자유롭게 움직이는 동물에서 혈압 및 심박수를 모니터링하는 것이 유리하다. 또한 장기적으로 다수의 데이터 획득이 가능하다. 척수 손상 쥐에서 대장 팽창 님의 억제되지 않은 상태와 자율 dysreflexia에서 기저 심혈관 데이터가 성공적으로 기록되었다. 송신기는 척수 절개 전에 주입되는 경우 또한, 전 및 후의 SCI 심혈관 파라미터가 동일한 쥐에 비교 될 수있다. 설명 telemet의 한 가지 제한RY 과정은 대퇴 동맥에 주입이 동측 뒷다리에 혈액 공급에 영향을 미칠 수 있다는 것이다.
서론
심장 혈관 장애는 높은 수준에서 척수 손상 (SCI) 이후에 발생합니다. 이 무질서 혈압과 심박 휴지, 기립 성 저혈압, 운동 유발 성 저혈압 및 부상 레벨 아래 1,2 감각 자극에 응답하여 고혈압과 압력 반사 매개 서맥 에피소드 특징 자율 dysreflexia에 명시된다. 이러한 현상은 척수 손상 환자의 일상 생활을 방해. 따라서, SCI 및 실험 동물의 치료와 심장 혈관 변화의 조사를 위해 효과적인 도구를 확립하는 것이 중요하다.
동물에서 심혈관 기능을 조사하기 위해, 여러 가지 기술들은 혈압과 심박을 모니터링하는데 사용되어왔다. 비침 꼬리 커프스 말초 혈압 3을 측정하기 위해 이용 될 수있는 반면 중앙 심혈관 파라미터는, 캐 뉼러 삽입 및 원격 측정에 의해 기록 될 수있다. 다른 방법에 비해 텔레metry가 자유롭게 움직이는 동물 및 심혈관 기능 (4)의 장기 모니터링 연속 기록 가능 주요 장점을 갖는다. SCI의 동물 모델에서 실험적 자극 후 말초 혈압의 변화를 검출 할 수있을만큼 크지 않을 수있다. 따라서, 적합한 심장 모니터링 기술은 SCI와 동물 선정되어야한다.
본 연구에서, 무선 원격 측정 시스템은 완전한 척수 절개....
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프로토콜
모든 동물 프로토콜은 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 하였다. 실험실 동물 관리 및 안전에 대한 NIH의 지침을 반드시 따라야한다. 수술 절차와 동물을 적절하게 고통과 불편을 최소화하기위한 처리 하였다.
1 척수 Curgery 및 셀 접목
- 모든 수술 이전에 오토 클레이브 수술 도구. 다른 동물에 대한 절차와 악기에서 병원균 및 미생물 오염 물질을 제거 할 수있는 핫 구슬 살균기 (파인 과학 도구)를 사용합니다. 수술시 무균 수술 장갑, 가운 및 커튼을 사용합니다. 각 수술에 대한 무균 수술 기법을 사용한다.
- 암컷 피셔에게 복강 내 주사 (IP)를 통해 투여 케타민 (25 ㎎ / ㎖), 자일 라진 (1.3 ㎎ / ㎖), 및 아세 프로 마진 (0.25 ㎎ / ㎖)의 조합으로 344 래트 (2 ㎖ / kg)을 마취.
- 다시 영역을 면도하고 Betadine 및 에탄올로 반복적으로 피부를 청소합니다.
- # 10 블레이드를 사용하여 피부를 잘라 퉁명스럽게 근육 층을 해부하다. , 척추를 분리 T3 척추를 노출하고, 뾰족한 rongeurs를 사용하여 지느러미 후궁 절제술을 수행하기 위해 메스를 사용합니다.
- 종 방향 및 경막을 절개....
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결과
상기 원격 측정 기술을 이용하여, 우리는 성공적 척수 손상 동물에서 심혈관 매개 변수를 기록했다. HR 이전 보고서 9과 일치 순진한 동물에 비해 증가하는 반면 단독으로 SCI와 동물에서 MAP은 크게 감소 하였다. BS-NSC 이식,지도 및 HR과 동물에서 순진한 동물에서 측정 된 수준 (그림 2)에 접근했다. 유해 자극 MAP 상승 및 3,8 HR의 감소를 생성하면 결장 팽만 동안, 래트는 dysreflexic으로 간주 하였다. 에피소드 고혈압과 압력 반사 매개 서맥은 필연적으로 모든 동물에서 발생되었지만 정도는 그룹간에 차이. BS-NSCs의 그라프 동물의 MAP의 증가는 훨씬 낮았다 (16.9 ± 3.1 mmHg로, N = 3) 단독으로 부상 (64.1 ± 1.6 mmHg로, N = 3) (그림 3)과 동물보다. 그러나, 결장 팽만 동안 HR의 감소가 현저 그룹간에 차이가 없었다의. 서맥이 압력 반사 메커니즘에 의해 매개.......
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토론
전통적으로, 유체가 채워진 뉼러 동맥에 삽입하고, 각 동물 11 스냅 단자로서 심혈관 매개 변수를 기록하기 위해 압력 변환기에 연결된다. 연속적으로 장시간 심혈관 성능을 모니터링하는, 무선 원격 측정 시스템은 여러 실험실에서 사용된다. 이 세련 도구는 자유롭게 동물을 이동, 의식의 혈압을 기록 할 수 있습니다. 유체 가득 카테터에 비해 원격 측정은 정확하게 SCI 동물에서 심장 혈관 기능을 평가하기 위해 고급 기술을 간주됩니다. 본 연구에서 송신기가 기록되기 전에 단지 일일 이식되었지만 전 또는 SCI가 다중 데이터 수집을위한 실험 조건에 따라 12 일 후 주입 될 수있다. 기저 혈압과 HR 어느 중추 또는 말초 기록 달성 될 수있다. 그러나, 결장 팽만 심혈관 반응은 비 침습적으로 꼬리 커프 기반의 방법에 의해 검출 할 수없는우리의 경험. 최근 원격 측정 분석은 쥐 9, 13에 완벽한 높은 흉부 척수를 절단 한 후 저혈압과 빈맥의 장기 지속성을 확인했습니다. 우리 S.......
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공개 사항
저자가 공개하는 게 없다.
감사의 글
이 연구는 NIH/NINDS(NS054883), Craig H. Neilsen Foundation(280072), Veterans Administration 및 Canadian Spinal Research Organization의 보조금으로 지원되었습니다. GFP 쥐를 제공해 주신 University of Missouri, Columbia, Missouri의 Rat Resource and Research Center에 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 피브리노겐(쥐) | Sigma | F6755-25MG | 2시간 37oC에서 |
| 트롬빈(쥐) | 을 | T5772-100UN | 10mM CaCl2 |
| 1% Terg-A-Zyme | Sigma | Z273287 | 원격 측정기 세척을 위한 효소 용액 |
| Fluorogold | Fluorochrome | 증류수에 Dissoble하고 빛을 | |
| 피하십시오.텔레미터 (펜실베이니아 C40) | Data Sciences International | ||
| Telementric 기록 및 분석 시스템 | Data Sciences International | 신호 자극기, 데이터 교환 매트릭스, 수신기, 주변 압력 기준 모니터 | |
| 풍선 팁 카테터 | Edward Lifesciences | 111F7-P | 결장 직장 팽창 용 |
참고문헌
- Krassioukov, A. V., Furlan, J. C., Fehlings, M. G. Autonomic dysreflexia in acute spinal cord injury: an under-recognized clinical entity. J Neurotrauma. 20, 707-716 (2003).
- Lindan, R., Joiner, E., Freehafer, A. A., Hazel, C. Incidence an....
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재인쇄 및 허가
