방법 논문

기니 돼지의 비 터미널 혈액 샘플링 기법

DOI:

10.3791/51982

⸱

2014년 10월 11일

 ,  ,  , 
1Department of Veterinary Disease Biology, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen

이 논문에서

요약

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알려진 모델 있지만, 기니 피그는 현재 실험 동물 과학 분야의 틈새 시장을 대표하는 제한된 데이터는 대부분의 절차의 실행에 사용할 수 있습니다. 여기에서 우리는 의식이나 마취 기니피그 중 생체 내 혈액 샘플링 기술의 비 터미널에 네 가지 방법을 제시한다.

초록

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기니 돼지는 인간에게 여러 가지 생물학적 유사성을 가지고 실험 동물 모델 1-3을 검증하고 있습니다. 특정 방법론 대응 부족에 그러나, 기니아 피그의 사용은 현재 연구와 설명 데이터의 비교적 좁은 영역을 나타냅니다. 기니피그의 해부학 적 특징은 마우스 및 래트에 비해. 따라서 샘플링 기법을 조정함으로써 예컨대, 종 특이 차이를 수용 할 수 있도록, 다른 설치류 모델과 다소 상이 충분히 고품질의 샘플들을 획득하기 위해 필요하다. 생체 내 연구에서 모두 장기 및 단기 자주 샘플링 혈액을 반복하여 필요한만큼 기술의 선택은 물론 동물에서 응력 및 불편 함을 감소시키기 위해 고려해야 할뿐만 아니라 시료의 크기 및 접근의 요구 생존뿐만 아니라 준수하도록. 정맥혈 샘플 기니피그 등의 다수 위치에서 얻을 수있다., 복재 및 경정맥을정맥, 장점과 단점을 모두 포함하는 각 기술 4,5. 여기에, 우리는 의식이나 마취 기니 돼지 중 하나에 대 한 4 개의 서로 다른 혈액 샘플링 기법을 제시한다. 절차는 모든 비 터미널 절차는 실험 동물 (6) 혈액 수집을위한 가이드 라인을 초과하지 않는 양의 샘플 및 샘플의 수를 제공합니다. 모든 설명 방법은 철저한 테스트를 거쳤으며 우리의 연구 시설에서 연구에서 생체 내 혈액 샘플링 반복 적용되고있다.

서론

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기니 피그 인해 비타민 C, 인간의 태반과 함께 효소와 지질 단백질 프로파일뿐만 아니라 공유 유사성을 대사 비교 혈장 단백의 영양 공급을위한 요구 사항으로 인체에 생물학적 유사성의 숫자로 가치 및 검증 실험 동물 모델 태아 개발 1-3,7,8. 이 기니피그 등의 비 알코올 지방간 질환, 심혈관 질환과 비타민 C 결핍증의 추정 효과뿐만 아니라, 예를 들면의 효과로 다이어트 관련 질병의 효과 연구를위한 매력적이고 적합한 모델을 만든다. 산모식이 개입을 개발 자손.

반복 채혈은 종종 생체 내 연구에서 모두 장기 및 단기 필요합니다. 인해 종 특이 해부학 차이 샘플링 기술의 변조는 다른 설치류 모델에 비해 기니피그의 혈액 시료를 얻기 위해 필요 4,5. 따라서 샘플링 및 처리 모두에 대한 상이한 요건 및 옵션을 가지고, 이는 정맥과 동맥의 과정에서 변화를 포함하고, 또한 그 기니아 피그 테일이 없다. 복재 또는 눈꺼풀 정맥에서 샘플링, 동물에 최소한의 불편과 스트레스를 유발하고 3,9 마취가 필요하지 않습니다. 이 기술은 혈액 (100 ~ 400 μL), 예를 들면 소량의 샘플을 반복 할 수 있습니다., 혈장 생화학 적 마커를 결정합니다. 더 작은 샘플 크기 (50 내지 100 μL)에 충분한 경우,이 아주 쉽게 귀 정맥을 천공하여 얻을 수있다. 이 기술은 또한 의식적 동물에서 수행하고 10,11 혈당을 측정 할 때, 예를 들면 유용 할 수있다. 경정맥에서 샘플링은 혈액의 많은 양 (1 ~ 2 ㎖)의 수집을 위해 수 있지만 마취가 필요합니다.

여기에, 우리는 의식이나 마취 기니 돼지 중 하나에 대 한 4 개의 서로 다른 혈액 샘플링 기법을 제시한다. PROCedures 않은 모든 터미널 절차는 실험 동물 (6) 혈액 수집을위한 가이드 라인을 초과하지 않는 양의 샘플 및 샘플의 수를 제공합니다. 그것은 스트레스를 최소로 유지해야한다는 동물 복지뿐만 아니라 좋은 과학의 이해 관계에 있습니다. 따라서, 단지 잘 훈련 된 유능한 개인은 동물의 절차를 수행해야합니다.

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프로토콜

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표시된 절차는 식품, 농업 및 수산부에서 덴마크의 동물 실험 검사관에 의해 승인 프로토콜에 따라 수행 하였다.

측면 복재 또는 눈꺼풀 정맥에서 1 혈액 샘플링

  1. 마취없이이 절차와 하나의 조사, 기니피그를 처리 하나, 그리고 하나의 샘플을 수집의 도움을 수행합니다.
  2. 혈관이 표시 될 때까지 전기 면도기와 뒷다리의 눈꺼풀 영역을 면도. 영역 천자 사이트 방해 모피 않도록 충분히 크다 확인.
  3. 미지근한 물을 욕조에 뒷다리를 놓고 조심스럽게 혈관이 더 팽창하고 분명하게 다리를 문질러.
  4. 깨끗한 수건으로 다리를 닦은 거즈 또는 70 % 알코올로 적신 면봉으로 구멍 사이트를 소독.
  5. 기니피그을 억제하고 즉시 무릎 관절 t 위에 부드럽게 가압하면서 하방으로 연장 뒷다리오 정체를 제공합니다.
  6. 21 G 바늘이나 란셋을 사용하여 정맥에 구멍. 혈액 등을 수집합니다., 수집 또는 모세관 튜브를 사용하여. 조심스럽게 혈액 흐름을 돕기 위해 다리를 조작.
  7. 샘플이 획득 된 후, 정체를 놓습니다. 출혈이 멈출 때까지 천자 사이트에 부드러운 압력을 거즈 나 탈지면의 조각을 적용합니다.
  8. 지혈을 보장하기 위해 5 ~ 10 분 동안 케이지와 모니터에 동물을 반환합니다.

귀 정맥에서 2 혈액 샘플링

  1. 한 동료의 도움으로 단독으로 또는 바람직 마취없이이 절차를 수행합니다.
  2. 거즈 또는 70 % 알코올에 적신 면봉을 사용하여 귀에의 등 표면을 소독.
  3. 정체를 제공하는 귀베이스에 가벼운 압력을 적용합니다.
  4. 21 G 바늘이나 란셋을 사용하여 정맥에 구멍을하고, 혈액을 수집.
  5. , 정체를 해제 샘플을 획득하고 나면, GE와 거즈 나 탈지면의 조각을 적용출혈까지 천자 사이트에 ntle 압력이 중지되었습니다.
  6. 지혈을 보장하기 위해 5 ~ 10 분 동안 케이지와 모니터에 동물을 반환합니다.

경정맥에서 3 혈액 샘플링

  1. 하나의 추가 조사의 도움을 사용하여이 절차를 수행; 하나 기니피그 처리 한 샘플을 수집.
  2. 이 절차의 전체 기간 동안 적합한 마취제로 기니 피그를 마취시키다. tiletamine의 혼합물 (0.93 ㎎ / ㎏), zolazepam (0.93 ㎎ / ㎏), 자일 라진 (1.49 ㎎ / ㎏) 및 butorphanol (0.06 ㎎ / ㎏)을 사용할 수 있습니다.
  3. 그 뒷면에있는 마취 기니 피그를 놓고 조심스럽게 꼬리 쪽 앞다리를 철회.
  4. 면도하고 소독 (예., 70 % 알코올로) 목의 복부 부분.
  5. 코트 응고 위험을 감소시키기 위해 헤파린 또는 EDTA 샘플링 이전에 하나와 주사기.
  6. 바늘 하나 ML의 주사기 AP 통신에 장착 (23 G는 나) 쇄골을 만져와 25 G를 삽입에 근접하여 1cm는 어깨 관절의 수준 정중선 측방. 약간의 부정적인 압력을가하면서 약간 위쪽과 중간 각도에서 주사기를 유지합니다. 경정맥이 매우 피상적​​ 위치해로 기본 구조물을 훼손하지 마십시오. 정맥의 증가 정체를 제공하기 위해 약간 뒤로 기니 돼지의 목을 기울입니다.
  7. 혈액 샘플이 얻어진다 앞다리를 해제하고, 바늘이 후퇴 전에 정체를 경감. 천자 사이트에 부드러운 압력을 적용 거즈 나 탈지면의 건조 조각을 사용합니다.
  8. 복구 케이지에 동물을 반환하고 마취에서 지혈 및 복구를 보장하기 위해 모니터링 할 수 있습니다.

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결과

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의식이나 마취 기니피그 하나로 비 종단 생체 채혈 기법 개의 상이한 접근법이 제시되었다.도 1 기니피그 가능한 천자 사이트에서 횡 복재 및 족부 혈관의 과정을 도시한다. 기니 돼지 귀의 등쪽 표면에 보이는 귀 정맥은 단지 매우 소량이 필요할 때 이러한 정맥 혈액 샘플링을 위해 사용될 수있는도 2에 도시되어있다. 경정맥 혈액 샘플링을위한 기니피그의 위치는 그림 3에서 쇼이다. 경정맥의 과정은 권장 천자 사이트에서 최상위를 가리키는 화살표와 화살표로 설명된다.

장갑을 낀 설치류 팔다리; 피부 표시에 집중하십시오.

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토론

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마우스 및 래트에 비해, 기니피그 자연에 의해 공포되고 침착 접근 및 스트레스를 줄이기 위해 올바르게 처리되어야한다. 보기의 동물 복지의 관점에서,주의 행동을 자연스럽게 우선 순위; 그러나,이도. 수집 된 데이터, 예를 들면에 불안 - 관련 효과의 위험을 줄일 스테로이드 증가한 혈중 농도, 12 글루코스 것이다. 마찬가지로, 일일 처리는 정상적인 절차에 동물을 습관화하고 더욱 스트레스를 감소시키는 역할을 할 수있다. 특히 혈액 샘플링 기술 실용적 전문성 제 숙련 작업자를 관찰하고 능력이 달성 될 때까지 이후의 감독하에 기술을 수행함으로써 획득되어야한다. 선택한 기술은 이상적으로 모두 최소한으로 스트레스와 불편 함을 감소해야하지만, 또한 표본의 크기 및 액세스의 요구 사항에 생존뿐만​​ 아니라 준수를 보장 할 수 있습니다. 모든 제시 혈액 샘플링 방법에 대해서는 무균 기술해야한다감염의 위험을 최소화하고 오염되지 않은 샘플의 수집을 보장하기 위해 사용된다.

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공개 사항

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저자가 공개하는 게 없다. 모든 절차는 유럽 협약 ETS (123)의 이사회에 따른다 덴마크의 동물 실험 법에 의해 승인되었습니다.

감사의 글

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우리는 애니 B. 크리스텐센, 엘리자베스 V. 안데르센, 벨린다 B. Bringtoft 및 실험 의학, 프레데릭 스 버그 캠퍼스, 보건 의료 학부, 덴마크 코펜하겐 대학의학과에서 동물 관리인의 숙련 된 지원을 인정합니다. 야곱 Lønholdt는 절차를 촬영에서 자신의 뛰어난 기술 지원에 대해 감사한다. 이 연구는 생체 내 약리학과 코펜하겐의 대학에 대한 LIFEPHARM 센터에 의해 부분적으로 지원되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
전기 면도기Wella (Contura), 덴마크273207대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급업체
주사기 B.Braun-Omnifix-F, 독일9161406V대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급 업체
NeedlesBD Microlance, 스페인301156대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급업체
Microvette 수집 튜브 사르스테트, D-51588Nü mbrecht, Germany201,288,100대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급업체
Accu-Check 분석기Roche A/S Diagnostics, 덴마크대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급업체
Heparin 5000 IE/mlLEO Pharma, 덴마크대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급 업체
AnesthesiaZoletil 50, Chemvet, 덴마크대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급 업체
AnesthesiaNarcoxyl vet 20 mg / ml, Intervet, 덴마크대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급 업체
AnesthesiaTorbugesic vet 10 mg / ml, Scanvet, 덴마크대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급업체
: 중성 눈 연고:대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급업체
의 거즈 또는 면봉 대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급업체
소독제(알코올대체 제품을 사용할 수 있습니다. 여러 공급업체
: , : 70%)

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
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