번식 및 생체 내 연구에 적합한 제브라피시 시설이 쉽고 저렴한 방식으로 지어졌습니다. 유지 보수가 최소화됩니다. 이 시설은 학생 참여 및 독립적인 연구에 이상적입니다.
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이 논문에서
요약
초록
생체 내에서 생물 의학 연구는 임상 발전에 시험관 연구 결과에 번역 중요한 것입니다. 제한된 자원을 가진 작은 교육 기관은 사실상 불가능 구축 및 연구를위한 일반적인 설치류 시설을 유지하기 위해 찾을 수 있습니다. Zebrafish의 연구는 약리학, 생리학, 개발 및 유전 연구에서 생체 연구를위한 중요한 대안이 될 입증되었습니다. 이 문서는 기능 제브라 피쉬 설비가 간단하고 저렴한 방법으로 구축 할 수 있다는 것을 보여줍니다. 우리는 설비가 최소한의 도구와 전문 지식에 대한 하나의 작업 일에 내장 될 수 있음을 보여줍니다. 본 연구에서 구축 한 27 1.8 L 수조 제브라 피쉬 시설의 비용은 약 1,500달러했다. 우리는 3 개월의 초기 작업 (150) 물고기 식민지의 유지 보수는 1,000 달러 것으로 추정된다. 연구는 제안을 위해 도입 된이 프로젝트 참여 학생들은 제브라 피쉬의 aquaculturing합니다.
서론
생체 내 모델은 시스템 및 유기체 수준에서 번역 할 시험관 연구에서 수 있기 때문에 종합적인 생물 의학 연구 수행에 필수적이다. 예를 들어, 작은 포유류, 설치류, 즉, 함께 연구 약물의 개발 및 사용 가능한 약물의 개선에 필요한 입증되었다. 그러나, 복잡성 (재정적 물류는)이 사실상 불가능 구축하고 실험이 작은 연구 교육 기관에서 제안에 대한 설치류 시설을 유지 보수 할 수 있도록 다음과 같은 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, 생체 내 연구는 덜 정교한 물류 필요한 다른 동물 종을 사용하여 수행 될 수있다. 제브라 피쉬 (다니오 레 리오 (rerio))을 성공적으로 유전학, 개발, 병태 생리 및 약리학 1,2,10,11,12을 연구하는 생체 내 모델로 사용되어왔다. 실험에 대한 제브라 피쉬를 수용하는 데 필요한 시설은 R에 비해 상대적으로 간단하고 훨씬 적은 비용이odent의 시설과 서비스를 제공합니다. Kim 등. (3)는 최근 상세히 부품 및 노동 비용을 모두 포함하는 약 $ 1,500에 대한 구축 할 수있다 (80) 탱크 제브라 피쉬의 주택 시스템을 설명했다. 이것은 상용 공급 업체의 수에 상관없이 기성품, 80 탱크 시스템을 구입해야 할 것이라고 거의 $ 8,500 극명한 대조를 이룬다. 그러나, 김 등의 알에 의해 주어진 설명. 물고기 연구의 초보자 따라하기 복잡하고 어려울 수 있습니다. 우리는 제브라 피쉬 설비가 1,500 달러 투자에 대한 단순화 된 방식으로 구성 할 수 있다고 생각합니다.
작은 교육 기관에서 생체 시설의 설립은 자신의 능력을 더 강력하고 철저한 연구를 생산하는와 추가 도구를 제공합니다. 생체 내 결과에서 지원하는 체외 데이터 일반적으로 체외 방식 만 사용하여 얻은 데이터보다 더 포괄적 인 생물 의학 연구를 생성합니다. 이 때문에,생체 내 연구 시설의 구현은 크게 전반적인 연구 노력에 기관의 성공을 향상시킬 것입니다 (외부 자금 조달 등의 연구, 출판, 통신, 추구 학생 노출을.).
이 연구에서 설명 된 것과 같은 Zebrafish의 시설의 건설은 금융 번이 수축하는 동안 (생체 내 연구 시설없이 또는 기관) 제한된 시설과 연구 교육 기관에 이상적입니다.
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프로토콜
참고 :이 프로토콜은 장로교 대학의 IACUC의 지침을 따르십시오.
표 1에 획득 1. 재료.
2. 제조업체의 지침에 따라 5 선반 크롬을 조립합니다. 이 시설을 수용하는 데 사용됩니다.
3. 물 용기와 여과 시스템 (도 1a 및도 2)을 구축.
- 가이드로 그림 1A를 사용하여, 최종 설치 위치와 크기를 결정하기 위해 18 갤런 물통, 펌프, 필터 및 UV 램프의 레이아웃.
- 부품이 배치되면, 측정 및 조립에 필요한 길이로 ¾ "PVC 파이프를 잘라. 특정 공간 요구 사항 및 제한 사항에 따라 모든 파이프의 길이가 다릅니다.
- PVC 프라이머와 시멘트를 사용하여 이전 배치로 파이프 및 피팅을 조립, 아래 (3.3.2과 3.3.3)를 참조하십시오.
- 모래 사포 파이프의 절단면들은 터치에 매끄러운까지D 이물질이 없습니다.
- 프라임 파이프의 외부에서 프라이머 PVC 포함 면봉 구입 PVC 프라이머 피팅의 내부.
- 포함 면봉을 사용하여 파이프의 외부로 PVC 시멘트를 적용하여 함께 파이프 피팅 시멘트. PVC 점착을 필요로하는 모든 단계를 반복합니다.
- 선반 건설의 한면에 18 갤런 양동이를 놓습니다.
- 리저버 탱크의 측면에 격벽 커넥터를 설치.
- 격벽에 ¾ "PVC 파이프를 연결합니다.
- ¾ "¾을 사용하여 펌프 흡입구에 관"의 다른 쪽 끝을 연결 제조사 스레드.
- 두 개의 90도 팔꿈치 및 ¾ "PVC 파이프를 사용하여 펌프에 필터를 연결합니다.
- 물에서 염소 및 화학 수준 이물질을 필터링하고 감소시키기 위해 하나의 활성탄 필터 뒤에 하나의 종이 필터를 사용한다.
- 필터 accordi에 UV 램프를 연결제조업체의 지침을 ng를.
- 와이어 타이를 사용 랙 제 선반의 상부 측에 펌프 및 필터 시스템을 첨부. 선택된 선반 / 랙의 크기 및 레이아웃에 따라 조립 및 첨부 파일의 순서를 다릅니다.
- 펌프와 필터 시스템 조립 및 선반에 부착하면 물이 저수지에 물 갤런 당 1 bioball를 추가합니다.
4. 주요 공급 라인 (그림 1B 및 2)를 구축합니다.
- 측정하고 주요 공급 UV 램프를 연결하는 PVC 파이프 "¾의 조각을 잘라
- UV 필터에서 오는 PVC 배기 "¾에 티를 연결하여 주요 공급 라인을 시작합니다 PVC 티"¾을 사용합니다. .
- 시스템의 유지 보수 및 세척을위한 드레인로 사용하기 위해 PVC 티의 바닥에 온 - 오프 밸브를 추가합니다.
- PVC를 "측정 ¾ 절단함으로써 PVC 티"¾의 상단에서 메인 공급선 시작원하는 길이로 파이프 랙 선반들 각각에 대한 공급 파이프를 제공한다.
- 설치 ¾ "랙의 각 선반을 입력합니다 수평 라인 PVC 티를.
- 선택적으로 (그리고 제안)을 추가 ¾ "온 - 오프 밸브 각 선반 공급선 각 선반의 단리 및 시스템의 모듈 설계를 허용하도록.
- 상단 선반에 줄을 감압로 ¾ "PVC 파이프를 사용합니다. 이 라인은 선반의 후면에서 실행되는 경우, 저장이 선반을 사용합니다. 주 배기 라인 ¾와 (그림 1B) "온 - 오프 밸브 라인을 감압을 종료합니다.
- 위의 단계는 프라임 완료하고 저장 및 여과 시스템을 구성 할 때 이전에 수행으로 함께 PVC 파이프 시멘트되고 나면.
5. 주 배기 라인 (그림 1C 2)를 구축합니다.
- 랙 (F)의 다른쪽에 메인 배기 라인의 수직 길이를 실행주요 공급 라인을 ROM. 각 선반에서 물고기 탱크의 상단과 드레인 라인에서 주요 공급 라인을 수신 할이 수직 라인 2 "PVC 파이프를 사용합니다.
- "수직 주 배기 라인 PVC 파이프와 2 사용"2 조각을 잘라 각각의 선반에서 물고기 탱크 드레인 라인을받을 PVC 티를. 스폰지 필터를 통해 재활용 된 물을 배출하기 위해 저장 탱크의 주요 배기 라인을 종료합니다.
- 2 "PVC 파이프 조각의 전체 길이를 열어 1 인치를 잘라 PVC는 물고기 탱크에서 수평 드레인 라인 티셔츠와 수직 주 배기 라인에 연결합니다.
- PVC 캡 2 "2 수평 드레인 라인을"모자.
- 프라임 필요한 피팅 (커넥터 또는 니플 팔꿈치)를 사용하여 시멘트 조각.
6. 물고기 탱크 (그림 3)를 구축합니다.
- 드릴, 구멍 톱 위쪽 가장자리 아래의 "물고기 탱크 (1)의 뒤쪽에 구멍"1 1/8를 잘라. (외부로 탱크의 내부에서) 구멍을 통해 (첨부 # 18 O 링) 스레드 ¾ "PVC 남성 어댑터를 밀어 넣습니다.
- 부착하고 90도 3/4를 조 '물고기 탱크 배기 파이프를 만들기 위해 남성 어댑터에 PVC 팔꿈치를 스레드. 배기계 거치지 지브라 피쉬 않도록 유지 너트를 나사 결합하기 전에 미세한 메쉬의 조각을 추가한다.
- 탱크 뒤에 배수 라인의 열린 공간으로의 배기 파이프 결말 물고기 탱크를 배치
7. 물 시스템 시작
- 이러한 저장조에 사용한 것과 여러 용기에있어서, 시스템 내에 포함 된 물이 3 배 양을 측정한다. 이 물이 48 시간 동안 조절 실온에 서 보자.
- 시스템에 물을 추가하고 3 일의 최소 순환 할 수 있습니다.
- 오염물 그쪽의 시스템을 제거하기 위하여 순환 초기 삼일 걸쳐 격렬 시스템에서 물을 변경t은 파이프 내에 상주.
- 스타터 제브라 피쉬를 추가하고 질소 순환이 설정 얻을 수 있습니다. 일관된 7로 pH를 정상화 1.8 L 당 일곱 제브라 피쉬를 유지하고 Linbo 4 McNabb (6)에 의해 제안 주말 동안 하루에 한 번 주 일 동안 하루에 두 번을 공급합니다.
- 질산 모니터 (<75 ㎎ / L), 아질산염 (<10 ㎎ / L), 암모늄 물고기를 추가 한 후 첫 주 동안 매일 (0 ㎎ / L), 두 번 매주 한 번 원하는 수준은 일반 물 변화와 유지되었다 .
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결과
펌프 및 Flters 시스템 구축
랙 조립 및 첫 번째 단계를 설정되면 펌프와 필터 시스템을 구축하는 것입니다. 필터 시스템에 연결되어 펌프 손쉽게 필터 유지 보수 및 교체 할 제 선반의 하부 레벨 위에 위치된다. 유사하게, UV 램프 필터 PVC 파이프를 연결하고 필요한 (도 4a)와 같은 UV 램프를 쉽게 교체 할 수 있도록 플라스틱 와이어 타이 제자리에 유지된다. 즉시 종이 필터, 활성탄 필터, 및 UV 램프 PVC 파이프를 통해 설치되는 펌프를 다음. Bioballs 질산염 암모니아 독성 폐기물 변환 박테리아의 성장을위한 표면을 제공하기 위해 탱크에 첨가된다. 시스템의 물 갤런 당 하나의 bioball은 세균의 성장을 허용 할 수있는 충분한 지역입니다. 오버플 경우 bioballs가 저장 부에 유지되며 contamina의 기회 있도록 저수지의 플라스틱 뚜껑을 장착 할 수있다기는 최소화된다. 오버 플로우 이벤트가 매우 어렵다하더라도, 배출 시스템 (저장조의...
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토론
이 문서의 주요 목적은 기능 제브라 피쉬 시설의 건설이 복잡하지 않고 최소한의 건설 지식 초보자 물고기 연구자들에 의해 만들어 질 수 있음을 입증하는 것입니다. 또한,이 문서에서는이 기능 제브라 피쉬 시설에 대한 자료는 지역의 애완 동물 공급 상점 또는 하드웨어 상점에서 쉽게 저렴하게 획득 할 수 있음을 보여줍니다. 모든 재료 및 도구는 시스템의 구성을 획득되었으며 어항 약 1 근무일 잡히게되면. 72 시간 첫 번째 실행이 결정되는 등의 누출 또는 낮은 수압으로 시스템의 모든 실패를, 할 수 있습니다. 시스템 내에서 오염 물질이 순환에서 제거 될 때까지이 처음 실행도 할 수 있습니다. 예를 들어, PVC 접착제는 순환의 처음 몇 시간 동안 제거한다 유해 유기 물질을 함유 할 수있다. 이 시스템은 허용하고 렌즈 유지 볼륨과 물 교체의 조정을 용이하게하는 주 배수 밸브가 ANCE. 또한, 시스템은 기압의 조정을 용이하게 해소 압력 라인을 갖는다. 이 수압 규제 할 수 있으므로 하나 또는 두 개의 구획 (가구)이 사용될 ...
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공개 사항
저자는이 문서에 대한 관심의 충돌을 선언합니다.
감사의 글
저자는 연구 및 공동 작업 (SPARC) 수상의 작은 약국 상을 통해이 프로젝트의 금융 지원을 위해 약국의 장로교 대학 학교의 연구의 사무실에게 감사의 말씀을 전합니다. 저자는 씨 존 Smink, 수생 동물 연구소의 관리자 클렘 슨 대학 (Clemson University), 클렘 슨, 자신의 기술 지원 원고 개정 SC 감사합니다.
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재료
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| 스레드 밀봉 테이프 | 윌리엄 H 하비 | 1 | |
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| 8-fl oz LO-VOC 프라이머 | 오티; | ||
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| 1/4-in 바베드 드립 관개 온/오프 밸브 | Mister Landscaper | 33 | |
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| 드롭인 필터(하우스 포함 ); | 월풀 | 6 | |
| 2인치 직경 90도 PVC 엘보 | LASCO | 3 | |
| 2인치 직경 90도 티 | LASCO | 3 | |
| 3/4인치 직경 90도 슬립 엘보 | LASCO | 15 | |
| 3/4인치 직경 PVC 어댑터 | LASCO | 7 | |
| 3/4인치 직경 PVC 티 | LASCO | 12 | |
| 2인치 직경 PVC 캡 | LASCO | 3 | |
| 1인치 직경 x 3/4인치 직경 PVC 어댑터 | LASCO | 2 | |
| 3/4인치 PVC 소켓 인라인 볼 밸브 | 아메리칸 밸브 | 5 | |
| 1/2인치 직경 x 3/4인치 직경 PVC 어댑터 | 라스코 | 8 | |
| 3/4인치 직경 PVC 캡 | 라스코 | 1 | |
| 2인치 x 5피트 PVC 파이프 | 샬롯 파이프 | 4 | |
| ¾ -인치 x 10피트 PVC 파이프 | 샬롯 파이프 | 3 | |
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참고문헌
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