여기에서는 스트레스를 받는 개인의 회피를 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 패러다임은 강력하면서도 사용자 친화적이며 Drosophila melanogaster의 한 종류의 사회적 상호 작용에 대한 유전자와 환경의 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
Drosophila melanogaster는 사회적 상호 작용의 다양한 측면을 연구하기 위한 새로운 모델입니다. 예를 들어, 파리는 초파리 스트레스 부취제(dSO)로 알려진 스트레스 중에 방출되는 냄새 물질로 인해 이전에 스트레스 동종동물이 차지했던 영역을 피합니다. T-maze 장치를 사용하면 매우 저렴하고 강력한 분석법으로 responder flys에 의한 dSO 회피를 정량화할 수 있습니다. 강력한 성능을 얻기 위해 필요한 조건이 여기에 제시되어 있습니다. 파리가 dSO를 방출하기 위해서는 스트레스가 많은 경험이 필요하며, dSO의 존재에 대한 강력한 회피 반응을 일으킬 수 있을 만큼 충분한 이미터 파리가 필요합니다. 집단 크기가 아닌 유전적 배경은 반응 파리에 의한 dSO 회피를 크게 변화시켰습니다. Canton-S와 Elwood는 Oregon 및 Samarkand 변형보다 dSO를 피하는 데 더 높은 성능을 보여줍니다. 이 행동 분석을 통해 이러한 사회적 행동의 기저에 있는 메커니즘을 식별하고 dSO의 배출 및 회피에 대한 유전자 및 환경 조건의 영향을 평가할 수 있습니다. 이러한 분석은 돌연변이의 사회적 결함 또는 관심 환경 조건을 식별하는 데 사용되는 간단한 진단 테스트 배터리에 포함될 수 있습니다.
서론
이 방법의 목적은 쉽게 구애와 침략에서 독립적 인 초파리에서 간단한 사회적 행동의 새로운 측면을 정량화하는 것입니다.
사회적 상호 작용은 적절한 발전과 개인의 건강 사회에서뿐만 아니라 전체 사회 집단의 기능에 중요하다. 이러한 상호 작용의 높은 복잡도가 큰 샘플 크기 및 사회적 행동의 유전 적 신경 염기 여전히 제대로 이해되는 바와 같이 동작의 단순화를 허용하는 시스템을 필요로한다. 초파리는 유전자를 식별하는 데 사용될 수있는 강력한 유전 적 모델이고 사회적 상호 작용의 신경 기지. 사실, D. melanogaster의 복잡한 사회적 행동의 레퍼토리를 가지고 있으며, 사회화의 일부 직접 측정은 이미 1-7을 수행하고있다. 그러나, 이러한 노력의 대부분은 상대적으로 복잡한 aggres 사회적 행동에 집중되어왔다시브 상호 작용 3,6, 구애 3,8-12의 다양한 측면, 어떻게 사회적 경험은 학습, 또는 일주기 리듬 13-17 다른 행동에 영향을 미친다. 또한, 이들 분석법은 많은, 파리의 기의 복잡한 상호 작용 패턴을 분석하고 결과 데이터를 분석하는 풍부한 비디오 추적 및 컴퓨터 소프트웨어를 사용에 의존한다. 이러한 ....
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프로토콜
1. 장비 및 사내 만든 시약 (다른 사람을위한 재료의 목록을 참조하십시오)
- 플라이 작업을 수행 할 수있는 초파리 차가운 마취 장치를 준비합니다.
- 작은 플라스틱 상자 (10.2 cm, 폭 12.7 cm 길이), 피펫 팁 상자의 일반적으로 상단 커버 (3.8 cm 깊이 10.2 cm, 폭 12.7 cm 길이)을 충당하기 위해 다공성 폴리에틸렌 시트를 잘라.
- 짓 눌린 얼음 상자 채우기, 다공성 폴리에틸렌 시트 커버.
- T-미로 장치를 준비; 이전에 설명 된 세부 28-31 장치 적응.
- (32) 기술로 플라이 흡인기를 준비합니다.
- 및 테스트 튜브의 스트레스없이 파리를 대체하는 phototaxis 응답 장치를 준비합니다
- 29,33에 의해 설명 된 바와 같이, 역류 장치를 사용합니다.
참고 : 28에 의해 기술 된 바와 같이 T 미로 또한, 다른 목적을 위해 이용 될 수있다.
- 동음 확인ogeneous 조명 조건 : 흰색 벤치 커버로 덮여 벤치에 실험을 수행하고, 화....
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결과
사회적 회피 분석은 다른 플라이에서 방출 응력 신호를 인식 초파리 melanogaster의 능력 (DSO)을 정량화하고, 따라서 사회적 상호 작용의 일 양상을 평가 강력한 시험이다. 분석은 일반적으로 두 가지 옵션 사이에서 선택과 파리를 제시 T-미로로 알려진 다양한 행동 분석에 사용 된 장치를 사용하여 수행됩니다 - 왼쪽 또는 오른쪽으로 19,28-31. 이 경우, 파리 DSO를 방지하는 계산 효율 및 성능 지수 (PI)를 비교함으로써 정량화 하였다. (100)의 PI 모든 파리는 DSO를 피할 수 있음을 나타냅니다 동안 제로의 PI는 50 대 50의 분포 또는 전혀 회피를 나타냅니다. 그리고 -100의 PI는 모든 파리는 DSO 유리 병 안에 갔다 나타냅니다.
파리는 기계적으로 교반 파리에 의해 방출 DSO를 포함하는 유리 병이 나타나고, 하나의 신선한 (DSO-무료) 유리 병된다. 대표 결과는 여기에 제시된하고 힘을 강조이 분석의 시간.......
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토론
이 프로토콜은 사회적 회피 분석에 대한 자세한 절차를 설명합니다. 광저우-S는 이전에 기계적으로되어 강조했다 날아간 유리 병을 방지하며, 응답자의 성별과 수는 사회적 회피 성능 것이 영향을주지 않습니다. 그러나 응답자의 유전 적 배경이 큰 영향을 미친다.
성공적으로이 실험을 수행하기위한 몇 가지 중요한 단계를 다음과 같습니다 : 1) 항상 실험 전에 파리 2 시간을 전송하고 자신의 환경을 방해하지 않도록주의; 2) 일 주기성 리듬과 운동 및 활동 레벨에 따라서 가능한 편차에 링크 성능의 변화를 감소시키기 위해 이상적 Zeitgeber의 ZT5 (시간 광의 개시 후의 시간)과 ZT9 사이에, 하루 중 항상 동시에 실험을 수행; 실험을 수행 할 때 3)의 온도 및 습도 조건을주의; 30 % 이상 23 ~ 25 ° C와 습도 주위 온도가 최고; 4) D 확실하지 수 있도록isturb 파리 결정 시간 동안 T-미로 장치는; 5) 적어도 24 시간을 사용하기 전에 신선한 유리 병을 방.......
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공개 사항
저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.
감사의 글
우리는 새로운 야생형 균주를 멜라노가스터 종으로 식별하는 데 도움을 준 Rachelle Kanippayoor에게 감사드립니다. R.W.F, O.F. 및 AFS는 연구 설계를 담당했습니다. R.W.F, M.N. 및 O.F.가 실험을 수행했습니다. R.W.F, M.N., O.F. 및 AFS가 데이터를 분석했습니다. R.W.F., I.S.M. 및 AFS가 원고를 썼습니다.
이 작업은 The Professional Staff Congress와 The City University of New York이 공동으로 A.F.S.에 자금을 지원한 PSC-CUNY 연구상; Western University에서 A.F.S. 및 I.S.M.에 대한 내부 자금 지원, National Alliance for Hispanic Health's Alliance/Merck Ciencia (Science) Hispanic Scholars Program의 교육 지원, Yale Graduate School of Arts and Sciences의 University Fellowship에서 R.W.F.에 의해 지원되었습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
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참고문헌
- Fry, S. N., Rohrseitz, N., Straw, A. D., Dickinson, M. H. TrackFly: virtual reality for a behavioral system analysis in free-flying fruit flies. J Neurosci Methods. 171, 110-117 (2008).
- Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. High-resolution vide....
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재인쇄 및 허가
