생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

요약

소장은 자주 혈액 흐름에 부정적인 영향을주고 영양분 흡수에 영향을 미칠 수있는 독소에 노출된다. , 화합물 또는 관심의 독소를 multimyograph 및 장간막 동맥을 사용하고 정맥 분리하는 vasoactivity에 대한 검사를 할 수 있습니다.

초록

포유류의 위장 시스템은 지속적으로 해당 시스템으로부터 혈류에 영향을 미칠 수있는 화합물 (바람직한 및 바람직하지 않은)에 노출된다. 소장에 혈액 흐름의 변화는 기관의 흡수 기능에 대한 효과가 발생할 수 있습니다. 발효와 소화 과정을 통해 사료에서 해방 독소에 특히 관심이 생산 효율성을 개선 할 수있는 영역으로 반추 동물에서 개발했습니다. 이 문서와 관련된 비디오는 소 장간막 동맥의 고립 된 단면에서 vasoactivity과 multimyograph를 사용하여 정맥 화면 화합물을 개발 한 체외 생물 검정을 설명합니다. 혈관이 마운트 myograph으로 평형화되면, 생물 분석 자체가 사용될 수있다 : 수축성 응답 또는 관심있는 화합물을 평가하기 vasoactivity 스크리닝 도구로; 약리학 적으로 특정 수용체​​ 작용제에 의해 수용체를 표적 종류의 존재를 결정의; 하나 이상의 길항제의 존재와 수용체의 역할을 결정하고; 또는 길항제를 사용하여 원하는 화합물의 잠재적 인 상호 작용을 결정합니다. 이 모든 것을 통해, 데이터는 실시간으로 수집되고, 하나의 동물로부터 수집 된 조직은 다른 실험 치료의 다수 (체외 이점)에 노출하고, 정확을 제공하는 모세관 침대의 양쪽에 혈관 구조를 의미 할 수있다 소장을 지원하는 구 심성 및 원심성 혈액 공급에 일이 될 수 있는지의 그림.

서론

티슈 침대 혈류량의 변화는 장기의 기능에 큰 영향을 미칠 수있다. 소장의 주요 기능은 영양소 흡수이다. 영양소 흡수 및 혈류 증가 표면 ^일 소화물 이동함에 따라 영양소 흡수에 도움을 위해 장내의 흡수성 표면 동맥 혈류가 필요하다. 혈류의 감소로 인해 transepithelial ^{그라데이션이} 감소로 영양소 흡수의 감소를 일으킬 수있다. 영양소 이외에, 또한 소장의 장간막 국소 혈류에 효과를 발휘하는 2 차 대사, 약물, 독소에 노출 될 수있다. 반추 동물의 경우, 화합물은 사료에서 해방 될 수있다 (예를 들면, 아미노산, 또는 맥각 알칼로이드와 같은 독소와 같은 영양소) foregut의 발효 과정을 통해. 이 화합물은 반추위 발효 미생물의 신진 대사를 살아남을 경우, 지금은 흡수 가능또는 상호 작용 그들은 동물의 위장관을 통과있다.

생체 내 혈류를 측정하는 다른 방법을 사용할 수가있다 (예를 들어, 도플러 초음파, 혈액 유량계, 방사성 표지 된 미소 구, 및 표시 희석 기법 내주) 다양한 실험 시나리오 또는 치료의 평가를 허용한다. Mulvany 및 Halpern ³ 전선을 사용하는 기술을 설명하는 문서 myograph 혈관 링 제제를....

프로토콜

살아있는 동물을 사용하지 않았기 때문에 본 연구에 사용 된 절차는 켄터키 동물 관리 및 사용위원회의 대학의 승인을 필요로하지 않았다. 여기에 사용 된 시료의 수집에 앞서, 모든 동물은 고정 볼트 기절 exsanguinated되었다. 이 켄터키 대학의 연방 정부 검사 도축장 시설에서 실시했다. 미국 농무부 식품 안전 검사국의 공식 대표는 시체의 살아있는 동물과 처리 처리 모든 활동을 관찰했다.

계측의 1 준비

1. 실험의 시작 조직 샘플의 모음 사이의 시간, 장비 설정을 최소화하고 (추가 인원이 가능한 경우 나, 이러한 작업이 동시에 발생할 수있다) 실험 조직을 수집하기 전에 버퍼를 제조 하였다.
   NOTE : 이것은 조직 실험을 실시 가능한 남아있는 시간의 가장 큰 양을 제공하지만, 일부뿐만따라서 그것은 일반적으로 가능한 한 일찍 시작하는 것이 바람직하다, 실험은 오랜 기간 동안 실행할 수 있습니다 (또는 하루에 여러 실험을 완료하는 욕망이있다).
2. 전원을 연결 컴퓨터, 데이터 수집 장비, (버퍼 (들)) 수조와 myograph 장치 (들). myograph 장치 (들)에 교정 장치를 놓고 온도를 미리 설정 따뜻하게 단위 및 교정 장비 (37.5 ° C로 사전 설정) myograph 열을 켜고 수 ....

결과

포함 된 결과를 생성하는 데 사용되는 혈관 3주 간격 내 6 홀스타인 수송아지 (425 ± 8 ㎏)에서 수집 하였다. 의 KCl 농도 증가 처리를 추가로 전형적인 장간막 혈관 수축 반응의 예는 반응의 크기는 (공여체 동물의 크기와 상관) 용기의 크기와 약간 다를 것이다.도 2에 표시 할뿐만 아니라 수있다 부적절한 취급으로 (부정적) 영향을받을 수집 및 청소하는 동안 선박의 (스트레칭). 따라서, 선박의 KCl에 노출 상당한 수축 반응을 관찰하는 것이 중요하다. 무시할 응답이이 시점에서 관찰되는 경우 해당 선박의 절차로 더 이상 진행하지 않는 것이 좋습니다. 그림 2의 9 분의 배양 기간에서 알 수있는 바와 같이, 농도 증가에 대응 님의 증분 증가가 있습니다. 이 partic 것이 바람직하지만신경근 실험 설계, 그것은 항상 발생하지 않을 수 있습니다 또는 다른 치료법으로 자행 될 수있다. 수집 된 데이터의 처리에 사용되지 않지만 용기는 어느 하나에 응답하지 않는 경우는.......

토론

이러한 생물학적 검정의 개발 초기 도전 장간막 혈관 용 반복 수집 사이트 구축했다. 회장 결과적 장간막 통해 소장에서 진행 중에 소장 변화의 기능의 일부와 유사한 패턴으로 변화 샘플 사이트 일관성은 중요하다. 장간막 동맥과 정맥의 회장 지점은 가장 쉽게 식별 해부학 적 랜드 마크를 통해이었다. 맹장의 위치 및 장간막의 왼쪽에 그 말단에 회맹 배 다음으로이 두개골 장간막 동맥 ^(15)의 종료 근처에 있습니다. 이상 장간막의 영역과 회맹 배의 확장 (소 동물에 고유 한) 매우 반복 수많은 동물에서 ¹⁶ 만들어진 샘플링 (플랜지라고). 제조 될 수있는 큰 함정 중 하나는 생물 검정이 단계에있다. 기계적 스트레칭 후속 용기 (P)에 큰 부정적인 영향을 미친다erformance ^(14)와 연구원은 과도하게 제거 및 후속 청소시 조작 또는 뻗어 아르 선박이 기준 화합물 사용에 응답하지 않습니다 알 수 있습니다. 이는 불행하게도 진정한 기능 수준 및 신뢰성있는 데이터의 생성을 위해.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
다중 근그래프	덴마크어 Myo Technologies	610M	근그래프는 이 생물학적 분석에 매우 중요하지만 사용할 수 있는 다른 플랫폼으로도 충분합니다.
Powerlab 8/sp	ADIntruments	ML785
LabChart 7	ADInstruments	버전 7
힘 교정 키트	Danish Myo Technologies	100055	DMT 근그래프
전용 Bottle-top Filter	Nalgene	595-4520	0.22 μ m 기공 크기; 45mm 넥 사이즈
# 5 Jewler ' s 집게	Miltex	555008FT	모든 브랜드의 집게를 사용할 수 있습니다
Noyes Iris Scissors	Miltex	18-1510	모든 브랜드의 가위를 사용할 수 있습니다
해부 범위	Zeiss	Stemi 2000-C	모든 브랜드의 해부 광학 현미경으로 충분합니다
조정 가능한 조직 Matrice	Braintree Scientific	TM C12	이것은 분석에 중요하지 않지만 길이의 단면 간 변동을 크게 줄이고 슬라이싱 과정을 크게 가속화합니다
Krebs-Hensleit 버퍼	Sigma-Aldrich	K3753-10x1L	Krebs를 구입할 필요가 없으며 집에서 만들 수 있습니다
칼슘 탈수	Sigma-Aldrich	C7902-500G
중탄산나트륨	Sigma-Aldrich	S5761-500G
데시프라민-HCl	시그마-알드리치	D3900-5G
프로프라놀롤-HCl	시그마-알드리치	P0884-1G
KCl	시그마-알드리치	P9333-500G
95% O2/5% CO2	Scott Gross	UN3156

염화