때문에 비만 및 다른 동반 질환의 급격한 음의 연결, 역할 지방에 대한 연구는 질병에 재생 및 전반적인 건강을 보증합니다. 우리는 고립과 현장에서 사용하여 지방의 연구를 허용 지방 창고의 절제 및 생체 외 방법에 프로토콜을 제시한다.
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이 논문에서
요약
초록
비만은 지난 수십 년 동안 급격히 증가했으며 미국 성인 인구의 1/3 이상에 영향을 미칩니다. 2005년 비만으로 인한 경제적 영향은 직접 의료비만 해도 1,902억 달러에 달하는 어마어마한 금액에 달했다. 비만은 다양한 질병의 주요 위험 요소입니다. 역사적으로 지방과 신체의 주요 및 필수 기능에 대해서는 알려진 바가 거의 없었습니다. 갈색 지방과 백색 지방은 지방의 두 가지 주요 유형이지만 현재 문헌에서는 브라이트 또는 베이지색 지방이라고 하는 새로운 유형의 지방을 확인했습니다. 연구에 따르면 지방 저장고는 특정 대사 프로필을 가지고 있으며 특정 저장고는 비만 및 기타 관련 질환의 경향을 허용합니다. 이 프로토콜의 목표는 연구자에게 지방에 대한 다양한 요인 효과를 분석할 수 있는 지방 저장소를 식별하고 절제할 수 있는 능력을 제공하는 것입니다. 뿐만 아니라 지방이 질병과 전반적인 건강에 유익하거나 해로운 역할을 합니다. 지방 저장소의 격리 및 절제를 통해 조사자는 조직학적 변화뿐만 아니라 전체적인 형태학적 변화를 볼 수 있습니다. 분리된 지방은 또한 전사 및 번역 변화를 평가하기 위한 분자 연구 또는 관심 표적 및 작용 메커니즘을 발견하기 위한 체외 실험에 사용할 수 있습니다. 이 기술은 단순하고 오염을 최소화하면서 여러 창고를 격리할 수 있도록 설계되었기 때문에 발표된 다른 기술보다 우수합니다.
서론
지방이 때문에 20 세기의 지난 수십 년 동안 비만의 급격한 증가로, 미디어 스포트 라이트에서 주목할만한 활약을 보였습니다. 비만은 현재 성인의 3 분의 1, 미국 (US) 1 어린이와 청소년의 17 %보다 더 많은 영향을 미칩니다. 모든 인종 그룹에 걸쳐, 비만 전염병을 둘러싼 통계 조사는 멕시코 미국 (40.4 %), 모든 스페인 (39.1 %), 그리고 비에 비해 비 히스패닉 흑인 비만 (49.5 %)이 가장 높은 연령 보정 율을 보여 주었다 히스패닉 백인 (34.3 %) 2. 비만의 경제 효과도 의료 시스템에 대한 우려이다. 2012 년, 그것은 2005 년 미국에서 비만 치료의 연간 의료 비용이 1천9백2억달러, 전체 의료 지출 예산의 거의 21 %라고 추정되었다. 슬프게도, 소아 비만은 단독으로 직접 의료 비용 140 억 달러에 대한 책임을 것으로 추정했다. 통계적으로는 평균 의료 비용 것을 결정 하였다비만을 가진 개인이 병적 3-5 않고보다 높은 2천7백41달러 한 해였습니다.
제 2 형 당뇨병, 이상 지질 혈증, 심혈관 질환, 암, 근육 골격 장애 및 만성 염증 비만과 같은 다양한 조건의 주요 위험 인자이다. 비만은 깊이 대사 증후군 및 기타 만성 질환 ....
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프로토콜
참고 : 모든 동물의 절차는 신시내티 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의과 (NIH 출판 없음 국립 보건원 (National Institutes of Health)에서 실험 동물의 관리 및 사용을위한 설명서에 따라 승인을 수행 하였다 . 85-23) 1996 개정.
1. 안락사와 마우스 소독
- 이소 플루 란의 supratheraputic 복용량을 포함하는 드롭 박스에 마우스를 놓고 효과를 흡입 할 수 있습니다. 마우스를 안락사되면, 상자에서 제거합니다.
- Cervically 안락사의 두 번째 수단으로 탈구.
- 70 % 에탄올로 세정하여 동물을 마우스의 외부 표면을 소독.
2. 식별 및 세 가지 다른 지방이 종점의 분리
- 갈색 지방 조직 (BAT) 분리 :
- 확인 모피는 표피와 진피 라예을 통해 절단에 도움이 알코올 클렌징 젖은 상태인지 확인RS.
- 테이블에 대해 그 뒤로와 부정사 위치에 마우스를 놓습니다.
- 단지 집게, 리프트 다이어프램 아래 피부를 잡고 가위로 절개.
- 복막을 노출 마우스의 외주에 가로 잘라.
- 마....
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결과
식별 및 서혜부 피하 지방, 견갑골 갈색 지방, 내장 부고환 지방 (그림 1),뿐만 아니라 대동맥 혈관 주위 지방, 흉부 대동맥 지방, 부신 대동맥 지방과 infrarenal 대동맥 지방의 현지화 (그림 2)를 사용하여 성공적으로 달성되었다 설명 수술 방법. BAT와 WAT 샘플 간의 조직 학적 검사와 차별화 긍정적으로 염색 (그림 3) 헤 마톡 실린 및 에오신 (H & E)를 사용하여 평가 하였다. 세포 사멸 유도 DFFA 같은 이펙터 (CIDEA) 및 기타 지방 특정 마커 모두 상기 절연 및 절제 저장소 측정 하였다 아디포넥틴 (AdipoQ), 퍼 옥시 좀 증식 자 - 활성화 수용체 감마 (PPAR-γ)의 RNA 수준의 분석 (데이터는 보이지 않음).
피하 지방 세포와 혈관 주위 지방 세포의 기본 세포주를 배양 지방 전구 세포에서 분화했다 성공적으로 마이크로 어레이 분석을위한.......
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토론
비만은 합병증의 큰 호스트와 지방이 완전히 이해되지하는 역할의 전체 이해 될 수 있습니다; 지방의 분야에 따라서 지속적인 연구가 필요하다. 동물 모델은, 특히 쥐 모델은 질병 및 잠재적 인 제약 트리트먼트 테스트의 진행에 초기 연구에 이상적이다. 이 모델을 사용하여, 정확한 분리 및 지방 창고의 절제 지방에 영향을 질병의 병리학의 연구에서 매우 중요하고 필요한 도구입니다.
지방 저장소에 대한 현재의 문학, 신진 대사의 행동과 지방 창고 사이의 변화뿐만 아니라, 자신의 해부학 적 위치에 대한 문학의 상당한 양이있다. 그러나, 구체적으로는, 지역화 식별하고 이러한 저장소를 분리하는 방법에 대한 심도있는 방법을 제공하는 몇 가지가있다. 지방의 현재 분리 방법의 검토 결과, 프로토콜 t의 작은 부분 집합이있다모자는 한 번에 하나 또는 두 개의 저장소를 분리하는 방법에 대한 방법을 제공한다. 그러나, 박리 및 오염의 최소량 여러 저장소뿐만 아니라 어드레스 수집 된 샘플을 연구하는 다양.......
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공개 사항
저자는 경쟁하는 재정적 이해관계나 기타 이해 상충이 없음을 선언합니다.
감사의 글
저자는 인정하지 않습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Isoflurane | Med-Vet International | #RXISO-250 | |
| 70% 에탄올 | 피셔 | 07-678-001 | |
| DMEF-12 | Sigma Aldrich | D-6421 | 티슈를 바르기 전에 수조에서 데우십시오. |
| 2ml 마이크로 원심분리기 튜브 | Midsci | MCT-200-C-S | |
| 인산염 완충 식염수 | Sigma Aldrich | P5368-10PAK |
참고문헌
- Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010. NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).
- Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index....
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