방법 논문

그레이 스케일 분석을 사용하여 마우스의 탈모의 정량 분석​​을위한 새로운 기술

DOI:

10.3791/52185

⸱

2015년 3월 9일

 ,  ,  , 
1Pediatric Endocrinology, Children's Hospital at Montefiore

이 논문에서

요약

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탈모증은 화학 요법의 부작용을 포함하여 다양한 조건에서 발생할 수 있는 일반적인 형태의 탈모입니다. 우리는 유망한 새로운 탈모증 치료법에 대한 연구를 용이하게 하기 위해 표준 젤 이미저를 사용하여 회색조 분석을 수행하여 쥐의 탈모를 정량화하는 방법을 개발했습니다.

초록

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탈모증 남성형 탈모, 다낭성 난소 증후군, 및 원형 탈모증 등 다양한 조건에서 발생할 수있는 탈모의 일반적인 형태이다. 탈모증은 암 환자의 화학 요법의 부작용으로 발생할 수있다. 이 연구에서 우리의 목표는 연구자가 정확하게 평가하고 탈모의 이러한 다양한 형태의 새로운 치료 방법을 비교 할 수 마우스에서 탈모를 정량화 할 수있는 일관되고 신뢰할 수있는 방법을 개발하는 것이 었습니다. 방법 마우스 검정 (또는 회색) 모발의 양에 비례하여 발생 거친 광 흡수를 측정 마우스의 이미지를 획득하고 처리하는 표준 겔 이미 저를 이용한다. 이러한 방식으로 정량화 된 데이터는 표준 통계 기법 (즉, ANOVA, T 시험)을 사용하여 분석 될 수있다. 이 방법은 왁싱에서 화학 요법에 의한 탈모증, 원형 탈모증과 탈모의 마우스 모델에서 테스트되었습니다. 이 보고서에서 상세한 프로토콜 대가입니다ented 검증 C57BL / 6의 데이터와 C3H / 마우스의 HEJ 균주를 포함하여 이러한 측정을 수행합니다. 이 새로운 기술은 애플리케이션의 상대적인 단순성, 대부분의 연구 실험실에서 쉽게 사용할 장비에 의존하고 대물인가 주관적인 평가보다 더 강력하다 정량적 평가를 포함하여 다수의 이점을 제공한다. 쥐의 모발 성장의 정량화 개선 탈모증 모델의 연구를 개선하고 전임상 연구에서 유망한 새로운 치료법의 평가를 더 용이하게 할 것입니다.

서론

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탈모증 (탈모)는 여러 원인으로 심리적으로 감정적으로 고통 이벤트가 될 수 있습니다. 남성 패턴 대머리는 35 세 1로 남성의 약 3 분의 2에 영향을 미치는 탈모의 가장 흔한 원인이다. 탈모의 유사한 패턴은 다낭성 난소 증후군을 가진 여성에서 관찰 할 수있다. 이러한 질환의 모두에서, 탈모 안드로겐 매개된다. 탈모증은 인구 2의 1.7 %에 영향을 미치는자가 면역 질환, 원형 탈모증으로 발생할 수 있습니다. 탈모는 화학 요법과 같은 세 응급 치료의 부작용으로 발생할 수있다. 화학 요법 환자의 높은 비율 (65~85%)는 탈모 4,5 어느 정도 경험한다. 탈모의 심리적 영향은 잘 설정 화학 요법으로 연구되어왔다. 화학 요법에 의한 탈모는 불안, 우울증, 부정적인 신체 이미지 저하 자부심과 6,7 복지의 축소 된 의미에서 발생할 수 있습니다. 높은 체육여성 암 환자의 rcentage (47-58%)는 화학 요법의 가장 충격적인 양상으로 탈모를 고려, 8 % 감소 치료까지 탈모 4,6의 두려움. 탈모 8,9 심리적 심지어 의료 결과를 줄이는 치료를 지원하는 안드로겐 성 탈모증의 증거가있다. 마찬가지로, 원형 탈모증은 심리적 영향이 심한 <....

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프로토콜

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윤리 문 : 동물을 포함한 모든 연구 기관의 IACUC의 승인을 받아야합니다 (다음 데이터는, 프로토콜은 몬테 피오레 IACUC, 프로토콜 번호 11-6-240 및 # 13-7-100에 의해 승인되었다). 촬영시에는 여전히 그들을 유지하기위한 목적으로 지시 된 바와 같이 동물이 빛 마취를 제공,이 프로토콜에 대한 요구되는 고통스러운 절차는 없습니다.

사진 1. 취득

  1. 인쇄 된 텍스트와 종이를 사용하여 겔 이미 저에 대한보기의 설정 포커스와 필드. 촬영 지역에 걸쳐 광원의 균일 성을 확인합니다. , 균일 성을 보장 반사 사진에 대한 광원 내장 된 젤 화상 카메라를 사용하는 데 도움이. 이 더 그레이 스케일 분석에 적합하지 않은 동물의 실루엣을 만드는 것처럼, transillumination 광원을 사용하지 마십시오.
    참고 :이 약간 관심 (ROI)의 지역에 걸쳐 광학 평균을 제공한다 초점에서 마우스를 배치하고 의지합니다관심의 매우 작은 (즉, <10 픽셀) 지역에 대한 계량 적 오류를 줄일 수 있습니다. 관심 영역 확대 핀트 조정이 마이너 의해 영향을받지 않으며 동물의 크기의 차이에 의해 영향을받을 것이다.
  2. 케타민 (100 ㎎ / ㎖) / 자일 라진 (xylazine) (20 ....

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결과

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이 기술은 C3H / 마우스 개체로 이식 HEJ 16 원형 탈모증 탈모증 마우스 모델을 이용하여 검증 하였다. 이러한 동물은 시간에 따라 서서히 진행 글로벌 탈모를 개발한다. 그러나, 탈모 패치에서 발생, 상당한 변동성을 도입하고 질적 평가를 방해 한 마우스에서 다음에 따라 달라질 수 있습니다. 이 모델은 유효성의 평가로서 마우스의 상이한 위치에서 측정 한 광학 밀도 사이의 상관 관계를 테스트 할 수있는 기회를 제공했다.

같은 마우스가 상관 관계를 보였다에 첫 번째 질문 조치 겹치지 않는 영역에서 투자 수익 (ROI)의 경계에서 다른 노출, 변형을 사용하고, 투자 수익 (ROI)의 경우. 유의 한 상관 관계 (P <0.0001) 마우스 (그림 4A)의 등 표면에 대 직사각형, 타원형 표준에 의해 정의 된 ROI를 비교 볼 수 있었다. 마찬가지로 높은 상관 관계는 동물에와 diffe에 다른 사이트에서 볼 수.......

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토론

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이 보고서에서, 상세한 설명은 설치류 탈모 정​​량화 새로운 기술이 제공된다. 이 기술은 대부분의 실험실에서 쉽게 사용할 이미지 수집 및 분석, 장비 젤 이미 저를 사용합니다. 측정 기법에서 작은 변화 (도 4-5)에 강인하도록 도시되었으며, 치료 모델에서 시각적 탈모 (도 6)의 정도에 잘 상관된다. 이러한 기술들은 성공적 탈모증 (17)의 평가 실험 치료에 사용되어왔다.

설치류에서 모발 성장을 평가하기위한 정량적 도구는 탈모증에 대한 치료제의 연구를 발전에 매우 도움이 될 수 있습니다. 탈모에 대한 많은 마우스 모델 어려운 치료 개입의 주관적 평가에 대한 결과를 기반으로 할 수 있습니다 고유 변동성을 가지고있다. 형태의 결과를 제공 마찬가지로 정량적 평가연속 측정 그룹 평균과 표준 편차 / 표준 오차로 요약 될 수 있으며, 표준 통계 기법 (ANOVA, T 검정)을 사용하여 시험 할 수있다. .......

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공개 사항

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저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

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이러한 연구를 지원해 주신 몬테피오레 아동병원(Children's Hospital at Montefiore, Department of Pediatrics)에 감사드립니다. C3H/HeJ 생착 마우스로 연구를 수행할 수 있도록 재정적 지원을 해주신 National Alopecia Areata Foundation에 감사드립니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
KODAK Gel Logic 100 이미징 시스템Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA사진을 얻고 분석하기 위한 젤 이미저에는 반사 사진을 위한 광원이 내장되어 있어야 합니다.
Kodak/Tiffen Q-13 그레이 스케일figure-materials-1 Imatest그레이스케일 표준
C57BL/6J 마우스연구를 위한메인 주 바 하버
C3H/HeJ 생착 마우스Jackson Laboratories, Bar Harbor, MaineMice 대표 연구
대표 잭슨 연구소

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McAndrews, P. J. American Hair Loss Association. , http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp (2011).
  2. Safavi, K. H., Muller, S. A., Suman, V. J., Moshell, A. N., Melton, L. J. 3rd Incidence of alopecia areata in Olmsted Count....

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