설치류의 허혈성 심정지 정지 후 심근 기절을 평가하는 이 프로토콜의 목표입니다.
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이 논문에서
요약
초록
다음 프로토콜은 장애 심장 기능이나 심근 멋진 다음 적당한 허혈성 모욕을 평가하기 위해 사용이다. 이 기술은 심정지 체포와 심폐 바이 패스, 오프 펌프 관상 동맥 우회술, 이식, 협심증, 짧은 허혈 등으로 심장 수술 등 다양한 임상 적 현상과 관련된 허혈 손상을 모델링하는 데 유용합니다. 이 프로토콜은 심근 수축 기능의 측정에 초점을 맞추고 설치류 마음 저체온 hyperkalemic 심정지 체포 및 재관류 모델에 대한 일반적인 방법을 제시한다. 간단히, 마우스 마음, 랑겐 돌프 모드에서 관류하는 심 실내 풍선 계측 및 기준 심장 기능 매개 변수가 기록됩니다. 안정화 후, 심장 이완기 체포를 시작하는 심장 보호 저체온 심정지 액 주입 브리핑을 다음 될 수 있습니다. 심정지는 2 시간에 걸쳐 간헐적으로 전달된다. 심장 후 재관류 및 warme된다정상 체온 온도와 심근 기능의 회복에 d를 모니터링합니다. 설치류에서 총 심근 조직 손상이없는 안정적인 우울 심장 수축 기능이 프로토콜 결과의 사용.
서론
멋진 심근 허혈 또는 심장 보호의 1,2,3,4,5와 허혈성 모욕의 장기간의 짧은 기간 다음 적절한 혈류의 회복에도 불구하고 가역적 인 감소 수축 활동으로 정의된다. 제시된 방법은 구체적으로 수축 기능의 가역적 인 손상을 초래할 수 임상 적으로 허혈성 모욕을 모델링하는 데 사용됩니다 (즉, 심장 수술은 심정지 체포, 허혈, 협심증 등의 짧은 기간을 이용과 관련된 허혈성 모욕). 심한 허혈 연구 (심근 경색, 괴사)와 대조적으로,이 프로토콜은 조직 손상, 개조, 및 세포 죽음없이 심근 기능 회복 및 심장 보호를 평가하기 위해 개발되었다. 종이의 대부분은 저체온증과 간헐적 심정지 전달을 사용하여 심장 수술과 유사한 성분을 가진 표준 심정지 체포 프로토콜에 대해 설명합니다.
심근 PROT심장 수술의 대부분 동안 ection은 심정지 및 심폐 바이 패스에 의존한다. 심정지 (CP) 솔루션과 전략 (혈액, 결정 성, 감기, 따뜻한 등) 다양하지만 가장 일반적인 요소는 1) 고 칼륨 혈증 및 / 또는하여 심근 수축에 의한 에너지 이용을 제한, 이완기의 마음을 체포하기 위해 다른 전략이다 2) 저체온증은 신진 대사를 느리게하고 체포하면서 ATP 및 기타 에너지 매장량을 유지하는 데....
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프로토콜
참고 : 모든 절차가 수명 기관 동물 관리 및 사용위원회 및 관리 및 실험 동물 (10)의 사용을위한 국가 연구위원회 가이드에 따라 모든 동물과 절차에 의해 승인되었다.
회로 모니터링 1. 풍선 제작 및 좌심실 압력
- , 교반 막대와 비커에서. 밀러 등에 따라 11 LV 풍선을 구축 핫 플레이트에 9.5 ml의 증류수, 빛 옥수수 시럽의 14.2 ml의 자당의 33.8 g을 열을 혼합, 설탕 용해 될 때까지 혼합 . 그것은 약 150 ºC에 도달 할 때까지 가열을 계속 용액.
참고 : 수많은 방법은 콘돔 팁과 집착 필름 건설 9,12-의 수정을 포함 LV 풍선을 구성하기 위해 존재한다. 그러나 우리는 집착 필름 풍선의 장점은 적절한 FREQUEN에 대한 이전의 특성을 포함, 위의 방법은 누출이없는 풍선을 구성 비교적 쉽게 찾을CY - 반응 관계 (9). - 길이 조각으로 약 5 센티미터 마른 스파게티 가닥 브레이크와 설탕 용액에 약 1cm 깊이 각 부분의 한 쪽을 찍어 천천히 제거합니다.
- 스티로폼 블록으로 파스타 가닥의 건조 끝을 놓고 설탕 믹스가 떨어지고과 눈물 모양....
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결과
그림 1은 하나의 마우스 실험에서 전형적인 결과를 제시한다. LVP (레드 라인), DP / DT (녹색 선), 온도 (보라색 라인) continusouly ~ 3 시간에 걸쳐 기록되었다. 글자를 표시 - 기준선 측정, B, C, D, E - 재관류, g의 시작, H, I, J - - 재관류 cornary 유량 측정 심정지 액, (F)의 전달. 참고, 우울 LVDP 및 기준에 비해 재관류시 DP는 / DT는.도 1b는 이상 기록 ~ 2 초에서 데이터를 포함한다. 참고 LVP의 감소와 유사한 DT DP /, LVEDP의 인사와 약간의 증가에 약간의 감소. 보통 30 분의 재관류 후에도 1C에 도시 된 좌심실 압력 LVDP 의해 입증 심기능에서 ~ 40 %의 감소가있다.
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토론
위의 프로토콜 세부 방법은 심정지 체포와 관련된 글로벌 허혈 심근 멋진 차를 알아보고자 하였다. 우리의 손에이 프로토콜은 심장 기능에 ~ 대략 40 % 감소를 생산 (LVDP, + DP / DT) 30 분 후 재관류 시점에서 심장 박동에 최소한의 변화. 심장 재관류과의 재탕되면서 심장 기능의 모든 매개 변수 최소 20에서 30 사이의 안정화 전에 크게 감소 심박수와 초기 시점에서 감소된다. 관상 동맥 흐름은 30 분 재관류에 따라 제어 수준보다 20-30% 이하 ~에 일반적으로 크게 인해 충혈 조기 재관류 동안 증가하고 빠진다.
그것은 정의에 의해 멋진 심근 순수한 허혈의 특징 인 세포 사멸 및 괴사의 무료 마음을 떠날 것을 기억하는 것이 중요하다 / MI 모델 (즉,> 20 분 더 흐름 지역 허혈). 초기 연구는 조직 histol을 평가해야이 ogy는 괴사 부상의 부족을 보장합니다. 가능성이 프로토콜은 완전히 인해 제어의 심장 기능에 reductons과.......
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공개 사항
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 심정지 용액 (St Thomas II) | 기호 / 농도 (mM) | ||
| 염화 | NaCl; 110 | ||
| 염화 | KCl; 16 | ||
| 염화칼슘 | CaCL2; 1.5 | ||
| 염화 | MgCL2; 16 | ||
| 중탄산 | NaHCO3; 10 | ||
| Krebs-Heinslet 완충액 | |||
| 염화 | NaCl; 118 | ||
| 염화 | KCl; 4.8 | ||
| 마그네슘 황산염 | MgSO4; 1.7 | ||
| 중탄산 | NaHCO3; 24.9 | ||
| 인산칼륨 (monobasic) | KH2PO4; 1.2 | ||
| 염화칼슘 | CaCL2; 1.4 | ||
| 나트륨 피루브산 | Na 피루브산염; 2 | ||
| 포도 | C6H12O6; 6 | ||
| 풍선 시약 | |||
| 옥수수 시럽 | |||
| 스파게티 | |||
| 실리콘 분산 젤 | |||
| 스티로폼 블록 | |||
| 실험실 오븐 / 인큐베이터 (50C) | |||
| Langendorff 관류 장비 | |||
| 절연 관류 심장 시스템 (IH-SR (Hugo-Sachs) 또는 동급) | |||
| 데이터 수집 시스템 (DSI, ADinstruments 또는 동급) | |||
| 온수 순환기 | |||
| 냉각수 순환기 | |||
| 2-30 ml/min | |||
| 인라인 관류 필터 - 1 um 유리 섬유 | |||
| LVP 및 관류 압력 | |||
| 소형 눈금 실린더(~10mL) | |||
| 소형 온도 프로브 및 온도계(Werner 또는 등가물) | |||
| 관류 resevoir (1L) | |||
| 심정지 resevoir (~ 200 mL) | |||
| 가스 버블러 | |||
| 95/5 O2 / CO2 혼합 | |||
| 수술 도구 및 시약 | |||
| Metzenbaum 및 Potz 수술 용 가위 | |||
| 두 개의 Dumont 크기 5 집게 | |||
| 케타민 | |||
| 자일라진 | |||
| 헤파린 | |||
| 대동맥을 고정하기 위한 부드러운 측면의 작은 클램프(즉, 테이프로 감긴 끝 클램프)실크 | |||
| 2-0 및 4-0 봉합사 |
참고문헌
- Kloner, R. a, Jennings, R. B. Consequences of Brief Ischemia: Stunning, Preconditioning, and Their Clinical Implications: Part 1. Circulation. 104 (24), 2981-2989 (2001).
- Mentzer, R. M. Myocardial protection in heart surgery. J Cardiovasc Pharmacol Th....
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재인쇄 및 허가
