마우스 기관에 적용 높은 정밀도 아연 동위 원소 측정

요약

쥐 장기에서 고정밀 아연 동위원소 비율을 측정하는 기술을 소개합니다.

초록

우리는 마우스 기관에서 높은 정밀도 아연 동위 원소 비율로 측정 할 수있는 방법을 제시한다. 아연은 자연스럽게 마우스 기관 사이에 분획있다 (5) 안정 동위 원소 ⁽⁶⁴ 아연, 아연 ^{66, 67} 아연, ⁶⁸ 아연 및 아연 ^70)로 구성되어있다. 우리는 먼저 아연 원자를 확보하기 위해 다른 기관을 용해하는 방법을 보여줍니다; 이 단계는 HNO _3, H ₂ O _(2)의 혼합물에 의해 실현된다. 우리는 그 다음 묽은의 HBr / HNO ₃ 매체에 음이온 교환 크로마토 동중 간섭 (예, 니켈)로부터 특히 다른 모든 요소에서 아연 원자를 정제. 이러한 처음 두 단계는 고순도 화학 물질을 사용하여 깨끗한 실험실에서 수행된다. 마지막으로, 동위 원소 비율은 낮은 해상도, 다중 콜렉터 유도 결합 플라스마 질량 분석계를 사용하여 측정된다. 샘플 correc 인 스프레이 챔버 및 질량 분광기에 의해 유도 된 분획을 사용하여 동위 원소 주입표준 (표준 브라켓 기술)의 비율로 샘플의 비율을 비교하여 테드. 이것은 전체 전형적인 절차는 50ppm (2 SD) 재현성 동위 원소 비를 생성한다.

서론

높은 정밀도의 측정은 (더 이상 100 PPM / 원자 질량 단위) 아연 안정 동위 원소 조성은 다중 콜렉터 플라즈마 소스 질량 분석기의 개발로 약 15 년 감사 가능한 왔으며 보낸 주로 어스 적용된 행성 과학. 의료 분야에 응용 프로그램은 소설이며, 아연의 대사 (예를 들어, 알츠하이머 병)를 수정 질환의 바이오 마커로서 강력한 잠재력을 가지고있다. 이 논문은 여러가지 마우스의 장기에 고정밀 아연 천연 안정 동위 원소 비율을 측정하는 방법을보고한다. 같은 인간의 샘플에 적용될 수있다. 이 방법은 장기 원자의 나머지 아연의 화학적 정제 한 다음 질량 분광기상에서 동위 원소 비의 분석 용해 이루어져있다.

아연 동위 측정 품질은 화학 정제의 품질 (아연의 순도, 낮은 빈 샘플 콘텐츠에 의존샘플에 존재하는 아연의 양에 ared, 높은 화학적 과정의 수율)과 계기 바이어스 컨트롤. 최종 Zn으로 분획의 고순도가 매트릭스 효과를 동중 간섭 비 등압 간섭 모두를 제거하는데 필요하다. 동중 핵종 직접 간섭 (예를 들어, ⁶⁴ 니켈)을 만듭니다. 비 동중 간섭은 소위 "매트릭스"효과를 생성하고, 시료 ^1로 비교되는 순수한 아연 표준에 비해 이온화 상태를 변경하여 측정 분석의 정밀도를....

프로토콜

참고 : 동물을 포함하는 절차는 Université 파리 디드로의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.

재료 1. 준비

1. 하위 종기 더러움을 정화하기 위해 산의 1 L (HNO _3의 HBr)를 증류.
2. 뜨거운 (~ 100 °의 C)에서 커와 팁 어댑터 청소 적어도 이틀 동안 HNO ₃ 산욕을 농축시켰다.
3. 며칠 동안 감기 3 N HNO ₃ 조에서 피펫 팁을 세척하고 탈 이온수 개별적으로 세 번 씻어.

2. 샘플 준비

1. 케타민과 자일 라진의 복강 내 주사하여 쥐를 마취. 발가락 핀치 방법으로 마취를 평가합니다.
2. 1.5 ㎖의 튜브에 헤파린의 존재하에 심장 천자에 의해 혈액을 수거.
3. 원심 분리 (10 분, 1,500 XG)에 의해 혈액 세포에서 플라즈마를 분리 및 폴리 프로필렌 (C)에 플라즈마를 전송폴리 프로필렌 정보를 사용하여 ryogenic 병.
4. 심장을 관통 DPBS를 간 정맥을 절단하고 주입하여 기관에서 남아있는 혈액을 제거합니다. 자궁 전위에 의해 마우스의 죽음을 평가합니다.
5. 멸균 스테....

결과

1.5 N의 HBr에서 메인 아연 종 (ZnBr3-) 음이온 교환 수지와 함께 강한 착물 형성은 대부분의 다른 요소는 수지와 상호 작용하지 않는 상태. 아연은, 희석 HNO ₃ 매질을 변화 ^-6,7- 수지로부터 방출되는 Zn을 Zn과의 분화 ^​​2+ 변경함으로써 회수된다.

동위 원소 비율은 전형적으로 표준 편차에 대하여 1,000 분율로 표현된다 :

X = (66) 또는 (68)과 함께 사용 기준 물질은 Zn으로 "리"표준 JMC 3-0749 L ^1이다. &quo.......

토론

측정의 재현성이 다른 분석 세션 동안 수행 동일한 샘플 복제의 분석을 통해 평가된다. 예 ^6에서, 우리는 같은 지상파 록 7 번 복제 된 우리가 표 2에보고 된 결과를 얻었다.

동위 원소 분별 ^(10)의 이론에서 예상하고 지금까지 어떤 태양계 물질의 측정 (예, 운석 ^{11-13, 3-5,} 심해 퇴적물 ^(14), 동물 ^{15-17 식물)으로,} 결과는 질량을 따라 종속 법 (도 1 참조). ⁶⁸ 아연 및 아연 ⁶⁴ 질량 사이의 차이가 ⁶⁶ 및 ⁶⁴ 아연 Zn으로 차이가 두 배이므로 δ ⁶⁸ 아연은 약 ⁶⁶ 배 아연 (도 1) δ이다. 이것은 우리의 측정은 그 데이.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
다중 수집 유도 결합 플라즈마 질량 분광기	Thermo-Fisher
음이온 교환 수지 AG1 X8 200-400	Bio-Rad	140-1443-MSDS
테플론 비커	Savillex	200-015-12
수축 테프론으로 만든 자체 제작 테프론

콜런