초파리에서 에탄올 민감도와 빠른 내성을 측정하기 위한 간단한 분석은 이러한 중요한 에탄올 관련 행동을 조사하기 위해 이 모델 유기체의 사용을 용이하게 합니다. 여기에서는 파리의 에탄올 감도와 빠른 내성을 측정하기 위한 비교적 간단하고 확장 가능한 분석법이 설명됩니다.
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이 논문에서
요약
초록
알코올 사용 장애 (AUD)는 건강에 심각한 도전이다. AUD로 큰 유전 요소에도 불구하고, 몇 가지 유전자는 분명하게 자신의 원인에 연루되어있다. 초파리, 초파리 melanogaster의는 알코올과 관련된 행동의 기초 분자 유전 메커니즘을 탐구하기위한 강력한 모델이므로 확인하고 AUD에 영향을 미치는 유전자의 기능을 이해하는 데 큰 약속을 보유하고있다. 이러한 유형의 연구를위한 모델 초파리의 사용은 안정적 에탄올 행동 반응을 측정하는 분석법의 가용성에 의존한다. 이 보고서는 파리에서 에탄올 감도와 빠른 내성을 평가하기위한 적절한 분석을 설명합니다. 이 분석에서 측정 에탄올 감도가 초파리 시험 직전 음식없이 수납되어 사용되는 부피의 에탄올 농도, 이전에보고 된 유전자 조작의 다양하고, 또한 시간의 길이에 의해 영향을 받는다. 한편, 에탄올 S이 분석에서 측정 ensitivity 플라이 처리, 파리의 성별, 항생제 또는 살아있는 효모와 성장 매체의 보충의 활력에 영향을받지 않습니다. 정량 에탄올 감도 세 가지 방법은 모두 본질적으로 구별 에탄올 감도 결과에 선도적 인 기술되어있다. 전반적인 단순 결합이 분석의 확장 성 성격, 그리고 상대적으로 낮은 비용으로 업을 설정 초파리 에탄올 감도와 빠른 관용의 크고 작은 규모의 유전 적 분석에 적합하게합니다.
서론
알코올 사용 장애 (AUD)는 전 세계적으로 (1 검토) 거대한 건강 문제입니다. AUD의 개발 구동 메커니즘 복잡하지만, 이러한 장애는 유전 주요 구성 요소를 가지고 (예를 들어, 2). AUD 및 보존 행동 반응의 대형 유전은 더 나은의 분자 기초를 이해하는 방향으로 에탄올과 관련된 행동의 특정 유전자의 참여를 조사하기 위해 유전자 모델 생물을 사용하여 강한 관심을 생성 한 (3,4 검토) 많은 종에서 에탄올 AUD. 초파리, 초파리 melanogaster의는 (3,4 검토) 에탄올과 관련된 행동의 분자 유전 학적 메커니즘을 탐험을위한 선도적 인 모델 생물로 떠오르고있다. 파리의 연구 (5 검토) 에탄올 행동 반응의 여러 신호 전달 경로에 대한 역할을 강조했다. 흥미롭게도, 유전자 및 경로의 일부 행동 응 답에 영향을 미치는 그파리에서 에탄올 ES는 또한 설치류 에탄올과 관련된 행동 및 / 또는 인간 AUD (예 : 6-14)에 연루되어있다. 초파리 모델 시스템에서 사용할 수있는 유전 적 도구의 스위트 룸과 함께 종에서 에탄올과 관련된 행동을, 구동 메커니즘의 보존, 에탄올 행동 반응의 유전학을 조사를 위해....
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프로토콜
분석 전에 1 일
- 짧은 (1-5 분) CO 2에서 11 (단일 섹스)의 그룹 신선한 식품 유리 병에 파리를 수집합니다.
- 파리는 환경 제어 공간에서 음식을 유리 병에 (일반적으로 25 ° C, 상대 습도 60 %, 12 시간 빛 / 어둠 사이클) O / N을 복구 할 수 있습니다.
- 계획된 실험에 적합한 최종 농도 (들)에 정제 (≥18 MΩ) 물에 순수 (100 %) 에탄올을 희석하여 에탄올 용액 (들)을 준비합니다. 솔루션 (들) RT O / N로 복귀 할 수 있습니다.
참고 : 에탄올의 희석은 발열이다.
분석 2. 일
- 파리의 각 바이알을 테스트하려면, 깨끗하고 빈 식품 유리 병을 (i)를 준비; 즉, 검사 바이알 (ⅱ) 새로운 셀룰로오스 아세테이트 플러그, (ⅲ) 실리콘 마개 및 (IV)의 에탄올 용액 (표 3 참조)를 1 ㎖.
- 55-65%에 20 ~ 25 ° C의 온도와 상대 습도를 조절하여 테스트 룸을 준비합니다.
- 다른 노동자 되세요튜브의 각 그룹에 고유 코드를 할당하고 이후의 코드를 기록합니다. 몇 분 동안 적응 시험 방에 파리 코드화 된 튜브를 놓습....
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결과
이 에탄올 진정 작용 분석에서 원시 데이터는 에탄올 증기 노출 시간의 함수로서 진정시켰다 파리의 수이다. 원시 데이터는 시간의 함수로서 파리 퍼센트 활성으로 전환된다 (primary 데이터를도 1A, B, D - F). 곡선 적합로부터 기본 데이터에서 에탄올에 진정 감도 보간을 통해, 진정 작용 시간 50 (ST50)로 곡선 (AUC) 아래 진정제 또는 AEA가 날아간의 50 %에 필요한 시간을 정량화 할 수있다. 이전 (평균 R 2 = 0.934, N = 24, 그림 1A에게) 예상대로 S 자형 곡선이 기본 다소 더 나은 데이터 (평균 R 2 = 0.997, N = 24 맞는 있지만 18 3 차 다항식 곡선, 잘 기본 데이터에 맞게보고; 그림 1B). 곡선 근사화 ST50에서 값을 결정하는 것에 대한 대안으로서, 주 데이터의 에탄올 진정 감도도 영.......
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토론
재현성 의미있는 표현형을 정량 간단 분석은 행동의 분석을위한 큰 가치입니다. 여기에 설명 된 작품은 초파리에서 에탄올 진정 감도와 빠른 내성을 측정하기위한 분석의 몇 가지 실용적인 측면을 해결합니다. 이 작품이 아니 긴하지만, 행동 분석 연구에서 피험자에 대한 환경 및 유전 적 배경을 일정하게 유지에 의해 촉진된다. 또한, 비교는 일반적으로 사육과 나란히 테스트 파리의 그룹 사이에해야한다. 이를 위해,이 작품의 개별 실험 내의 모든 파리가 동일한 유전 적 배경을 가지고 균일 한 환경 조건 표준 음식 매체와 (25 ° C, 상대 습도 60 %, 12 시간 빛 / 어둠 사이클)에서 나란히 양육되었다 (10 % 음식 매체가 명시 적으로 조작 된 이들 실험을 제외 크로즈, 3.3 %의 옥수수 가루, 2 % 및 1 % 효모 한천).
ETH여기에 설명 anol 진정 작용 분석은 저렴하고 상업적 공급원 (표 3)으로부터 쉽게 사용할 모두 거의.......
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
이 연구는 미국 국립보건원(National Institutes of Health), 미국 국립 알코올 중독 및 알코올 남용 연구소(National Institute for Alcoholism and Alcohol Abuse)의 보조금으로 지원되었습니다(P20AA017828, R01AA020634, P50 AA022537). 저자는 유용한 토론을 해준 Jill Bettinger와 기술 지원을 제공한 Jacqueline DeLoyht에게 감사를 표합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 식품 바이알 | VWR | 89092-772 | 좁은 |
| 플러그 | Genesee/flystuff.com | 49-102 | 좁은 |
| 실리콘 스토퍼 | Fisher Scientific | 09-704-1L | #4 |
| 에탄올 | Pharmaco-Aaper | 111000200 | 200 proof |
참고문헌
- Rehm, J., et al. Global burden of disease and injury and economic cost attributable to alcohol use and alcohol-use disorders. Lancet. 373, 2223-2233 (2009).
- Prescott, C. A., Kendler, K. S.
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재인쇄 및 허가
