이 원고는 일반적으로 사용되는 알츠하이머병의 마우스 모델과 함께 사용하도록 맞춤화된 Morris water maze(MWM) 프로토콜을 설명합니다. MWM은 형질전환 마우스 모델에 널리 사용됩니다. 마우스 모델의 배경 변형률에 민감한 절차의 구현은 그룹 차이를 감지하는 데 필수적입니다.
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이 논문에서
요약
초록
MWM(Morris water maze)은 알츠하이머병과 같은 신경인지 장애를 포함한 질병의 형질전환 마우스 모델에서 해마 의존성 공간 학습 및 기억을 평가하는 데 일반적으로 사용되는 작업입니다. 그러나 사용된 마우스 모델의 배경 변형은 관찰된 행동 표현형에 상당한 영향을 미칠 수 있으며, 일부 변형은 다른 균주에 비해 우수한 학습 능력을 나타냅니다. 전이유전자 음성 마우스와 전이유전자 양성 마우스 간의 차이를 감지할 수 있도록 하려면 배경 변형에 민감한 훈련 절차를 식별하는 것이 필수적입니다. MWM 프로토콜을 마우스 모델의 배경 변형에 맞게 조정하지 않으면 훈련이 부족하거나 과도하게 진행될 수 있으며, 이로 인해 프로브 시험에서 그룹 차이가 가려질 수 있습니다. 여기에서는 F1 FVB/N x 129S6 배경과 함께 사용하도록 조정된 MWM 프로토콜에 대해 설명합니다. 이것은 알츠하이머병과 관련된 기억력 결핍에 대한 돌연변이 P301L 타우(rTg(TauP301L)4510 마우스)의 연령 의존적 효과를 연구하기 위해 자주 사용되는 배경 균주입니다. 또한 사용된 특정 테스트 환경에 따라 다시 최적화하기 위한 전략도 설명되어 있습니다.
서론
형질 전환 마우스 모델은 알츠하이머 병 (AD)의 병태 생리학뿐만 아니라, 치료 적 개입의 가능성을 평가하는 수단이되어왔다. 이러한 모리스 물 미로 (MWM)인지 적 작업은 일반적으로 기억력 결핍의 분자 상관 관계를 파악하고 전임상 약물의 효능을 평가하기 위해 이러한 모델과 함께 사용된다. 이는인지 작업의 동적 범위는 치료 효과 미묘한 검출 충분히 넓은 것이 그러나 중요하다. 광고의 마우스 모델,인지 적자는 일반적으로 나이에 따라 달라집니다, 그리고 마우스는 성능이 점진적 감소를 표시 (예를 들면, 1). 민감한 태스크인지를 사용하여 동물 노화와 관련된 비용을 줄일 이전 동물의 생명에 미묘한 차이를 검출 할 수있다. 예를 들면, 해마 의존적 반스 훈련 실험의 수를 줄이는 것이 15-5 미로 D 결과, 작업의 어려움을 증가보다 이른 나이에 3xTg 모델에서 적자의 금 속 탐은 이전에 2를보고했다. 적자 이전 검출뿐만 아니라 이것은 또한인지 결핍의 기초 분자의 변화를 식별 할 수있는 가능성이 높아, 상당한 시간과 비용 절감을 제공한다.
인지 작업의 감도에 영향을 미치는 하나의 요인은 마우스 모델의 유전 배경 균주이다. 예를 들어, BALB / c 마우스는 C57BL / 6 (3)....
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프로토콜
모든 실험 절차는 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 기준에 따라 수행과 웨스트 버지니아 대학의 IACUC에 의해 승인되었다.
1. 사전 처리
- 풀 설정
- 이 편안한 높이로 상승되도록 사전 처리 풀 소품.
- 약 1cm의 레벨로 사전 - 처리 풀에 물 2 L (21 ℃에서)를 놓는다.
참고 : 색상을 추가하지 마십시오.
- 순서
- 테스트 룸에 동식물 사육장에서 쥐를 가져와.
- 주제 식별 확인 (대상 번호, 꼬리 문신, 귀 클립, 등.).
- 영구 마커 마크 마우스의 꼬리는 테스트 할 남아있는 것과 테스트를 미리 처리받은 케이지 내에서 마우스를 구별한다. 같은 색으로 한 장에 모든 쥐를 표시합니다.
- approxima위한 전사 비이커에 마우스를 놓고tely 5 초. 그런 다음, 부드럽게 사전 처리 풀에 비커에서 마우스를 붓는다.
- 타이머를 사용하여, 마우스를 20 초 동안 풀에 남아 있도록.
- 20 초 후, 부드럽게 마우스의 앞에 (를 낚시를하지 않고) 특종을 배치합니다. 간단히 마우스가 특종을 탐구 할 수 있도록, 필요한 경우, 천....
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결과
우리는 그림 3은 베타 - 아밀로이드 (Tg2576 마우스) 및 돌연변이 P301L 타우 공간 참조 메모리 (RTG (TauP301L) 4510 마우스) (예를 들면, 1,5,7,8).의 효과를 연구하기 위해 모리스 물 미로를 사용했다 대표적인 결과는 모터 및 시각적 능력을 평가하기 위해 테스트 환경 A.을 이용하는, 학습 및 기억 8 성인 발병 P301L 타우 발현의 효과를 조사 연구에서보고 된 마우스는 각 트레이닝 블록으로 이루어져 볼 플랫폼 트레이닝 블록들간에 비교 하였다 3 시험. 눈에 보이는 플랫폼 훈련 경로 길이는 유전자가 긍정적 인 제안, 컨트롤 및 TauP301L 마우스 (그림 3A) 사이에 차이가 없었다 음의 마우스는 비교 수영을 나타내는 두 그룹은 시각적 (플래그) 플랫폼을 표시를 볼 수 있습니다. 어떠한 마우스 배제 기준에 따라 성능 무능으로 확인되지 않았다. 숨겨진 플랫폼 훈련 블록에서 다음.......
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토론
MWM 태스크 널리 공간 학습 및 기억을 평가하는 데 사용된다. 그러나,이 작업의 안정성은 많은 요인들에 의해 영향을 배경 균주 및 테스트 환경 모두의 최적화를 필요로 할 수있다. 도 4는 동일한 트레이닝 프로토콜에 나타낸 두 개의 다른 테스트 실 (동등한 크기 및 레이아웃)에 사용되는 시각적 적용된 상당히 상이한 프로브의 성능을 수득 하였다. 테스트 룸의 많은 기능이 공간 큐 4에 기여할 수 있기 때문에,이 두 개의 객실이 시험을 더 어렵게 만든 알 수없는 방식으로 유의 한 차이가 있다고 추측했다. 추가 미로 큐 수정에서는 효과적으로 시각적 큐의 수를 늘리는 것을 정했다. 또한, 커튼의 사용을 최소화하여, 존재할 수도있는 청각이나 후각 큐는 변경되고 있습니다. 두 개의 테스트 룸의 조명 수준은 그러나 새로운 동식물 사육장에서 홈 케이지 빛 레벨이 결과, 낮았다, 상당했다높은 조명 수준 차이에서 시험 방에 홈 케이지에서 갈 때. 그것은 BALB / c 마우스는 광 레벨을 제공하.......
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공개 사항
저자가 공개하는 게 없다.
감사의 글
신경 질환 및 뇌졸중의 국립 연구소, -이 작품은 일반 의료 과학 국립 연구소 (U54GM104942 리드 / 잉글 러 - Chiurazzi)에 의해 지원되었다 (애쉬 - R01NS33249, R01NS63249 및 R01NS79374), 코 브레 (잉글 러 - Chiurazzi - P20GM109098) 알츠하이머 협회 (리드 - NIRG-12-242187), WVU 교수 연구 상원 그랜트 (리드), 의학 딘의 사무실의 WVU 대학 (잉글 러 - Chiurazzi)에서 WVU PSCOR 보조금 (리드) 및 내부 자금. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 NIH 또는 알츠하이머 협회의 공식 견해를 대변하지 않습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Viewer Tracking Software | Biobserve | 이 특정 소프트웨어는 필수 사항이 아닙니다 - 다른 추적 시스템을 사용할 수 있습니다 | |
| 사전 처리 풀 | 크기 대략 1 피트 너비 x 2 피트 길이 x 1.5 피트 깊이 | ||
| 플라스틱 비커 | 1 L | ||
| 스쿱 | |||
| 작은 그물 | |||
| 스톱워치 | |||
| 무독성 백색 템페라 페인트 | 모든 색상의 페인트를 사용할 수 있지만 대부분의 추적 소프트웨어 프로그램에서는 페인트가 동물의 색상과 대비되어야 합니다. | ||
| 눈에 보이는 플랫폼 | 색상은 미로의 색상과 대조되어야 함 | ||
| 커튼봉 | |||
| 욕조 | 일반적으로 흰색, 직경 약 4피트 | ||
| 숨겨진 플랫폼 | 물과 같은 색으로 칠함 |
참고문헌
- Ramsden, M., et al. Age-dependent neurofibrillary tangle formation, neuron loss, and memory impairment in a mouse model of human tauopathy (P301L). The Journal of Neuroscience. 25, 10637-10647 (2005).
- Attar, A., et al.
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재인쇄 및 허가
