여기서는 입체적 정상 조직 절편에 살아있는 종양 세포의 침윤을 연구 프로토콜을 제시한다. 이 기관 배양 기술은 주로 시험 관내에서 잠재적으로 항 - 침습 약물을 시험에 적용된다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
병아리 심장 분석의 목적은 입체적 종양 침윤을 연구하는 중요한 장기 배양 방법을 제공하는 것이다. 분석은 침습적 및 비 침습적 세포를 구별하고, 종양 침윤에 대한 시험 화합물의 효과에 대한 연구를 가능하게 할 수있다. 암 세포 - 중 집계 또는 단일 세포로 - 배아 병아리 마음의 조각에 직면하고 있습니다. 며칠 또는 몇 주 동안 정지에서 기관 배양 후 직면 문화는 고정 및 조직 학적 분석을 위해 파라핀에 포함. 암세포 및 정상 조직 사이의 입체적인 상호 작용은 다음 헤 마톡 실린 - 에오신으로 또는 심장 조직의 에피토프 또는 대향하는 암 세포에 대한 면역 조직 화학 염색을 한 후 염색 직렬 섹션에서 재구성된다. 분석은 암세포 침윤이 암세포 및 그들의 이웃 기질 호스트 소자 (근육 섬유 모세포, endoth 분자 사이의 상호 작용의 결과 인 것으로 최근의 개념과 일치elial 세포, 세포 외 매트릭스 성분 등). 여기서,이 기질은 환경 생체 조직 절편 같은 암세포에 제공된다. 분석의 관련성에 대한 지원은 여러 양태이다. 프로그레시브 직업 및 교체 시간과 숙주 조직의 공간 및 침입과 대향 세포의 생체 내에서 비 - 침입 일반적 분석의 결과와 상관 관계 : 분석에서 내습 암 침윤의 기준에 따른다. 또한, 생체 내에서 세포의 침입 패턴은 병리학 자에 의해 정의 된 바와 같이, 분석에서 조직 학적 이미지에 반영된다. 많은 잠재적으로 항 - 침습 유기 동족체 화합물과 얻어진 결과의 정량 구조 - 활성 관계 (QSAR) 분석은 임상에서 사용되는 플라보노이드 및 칼콘, 공지 된 항 - 전이성 약물 구조 - 활성 관계 (예를 들어, 미세 소관 억제제의 연구를 허용 )뿐만 아니라 분석에서 침입을 억제한다. HoweveR, 분석은 암 침공 계정 면역 학적 기여를 고려하지 않습니다.
서론
침략은 악성 종양의 특징이다. 이 활동은 주변 조직의 파괴에 이르게뿐만 아니라 전이 형성에 연루되어 아닙니다. 암 환자가 침윤 및 전이, 효율적인 안티 침습적 치료법으로 사망 때문에 여전히 종양 세포의 침윤이 개발되었다 모방 부족한 실험실 분석이다. 병아리 심장 분석의 목적은 입체적 종양 침윤을 연구하는 중요한 장기 배양 방법을 제공하는 것이다. 분석은 침습적 및 비 침습적 세포를 구별하고, 종양 침윤에 대한 시험 화합물의 효과를 연구 할 수있다.
분석의 사용 배후의 이론적 근거는 종양은 종양 세포가 지속적으로 기질 (숙주 세포 및 세포 외 기질)과 상호 작용 생태계 있다는 실제적인 개념이며, 이들 분자 상호 침입 통해 그 미세 조정 (1)이다. 그래서, 분석에서 종양 세포 livi 직면종양 세포에 의해 침윤 용 기판으로서, 또한 간질 세포와 행렬 요소의 다른 유형의 소스로서 역할뿐만 NG 병아리 배아 심장 단편 2. 병아리 심장 근육 세포, 섬유 아세포 및 내피 세포를 포함하고, 세포 외 매트릭스는 라미닌, 피브로넥틴 및 콜라겐의 상이한 유형으로 구성된다. 이와 같이, 삼차원 기관 배양 기술은 환자의 종양 침윤에 관련 많은 세포와 분자의 상호 작용을 포함한다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
그림 다른 분석 단계의 도식 개요. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
예비 배양 심장 조각 1. 준비 (PHFs)
- 구일 37 ° C에서 수정 된 병아리 달걀을 품어. (둥지 월요일에, 예를 들어) 종양 세포 집합체와 (목요일에, 예를 들어) 사일 동안 PHFs의 후속 준비를 할 수 있습니다 날짜와 마지막 대결하여이 부화를 완료합니다.
- 물 70 % (v / v) 에탄올로 소독 쉘. 멸균 용액 및 재료를 이용하여 조직 배양 내각 모든 상기 조작을 수행. 무딘 집게를 사용하여 배아 극에서 쉘을 엽니 다.
- HOL에 의해 배아를 잡아 당깁니다땡 안구 적출술 스푼 (그림 2)와
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
도 5에 제시된 조직 학적 단면은 성공적인 분석의 숫자의 최종 결과를 나타낸다. 문화의 소리 조직학가 가능한 세포를 표시하고 종양 세포와 정상 조직 사이의 상호 작용을 해석 할 수 있습니다. 또한, 정상 조직에서 어떠한 면역 반응은 면역 거부 시스템이 개발되기 전에, 예를 들어 사용 된 병아리 배아의 정확한 기간을 확인하는 관찰 할 수 없다. 배양 기간 동안 (총) 오염의 부재를 나타냅니다 볼 수없는 박테리아는 없습니다. 마지막 부분의 둥근 가장자리는 삼각 플라스크 벽에 (임시) 준수의 흔적없이 서스펜션의 문화를 확인합니다.
많은 화합물 분석에서 테스트되었습니다. 직면 PHF / 종양 집계 쌍 작은 삼각 플라스크 (단계 2.7)이 이전 된 시점에 약은 일반적으로 순간에 문화 매체에 전달됩니다. 일부에 공지 (도구로서 사용hibitors과 활성제) 종양 침윤 과정에 연루 경로와 이펙터 분자를 해명합니다. 구조적으로 관련이 있었다 다른 화합물의 경우, 정량적 구조.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
PHFs의 제조 동안, 단편 현탁액에 체류하지 않을 수도 있지만, 혈관 벽에 부착; 이는 배양액의 부피를 증가시킴으로써 극복 될 수있다. PHFs 수가 너무 낮고, 그 크기가 너무 큰 경우, 배양액의 부피를 감소시킨다. 집계 테스트 세포의 실패는 온도 나 미생물 감염에 변동 때문일 수 있습니다. 또한, 집계 무능력 세포의 고유 한 특성 일 수있다. PHF에 골재의 부착 동안에, 접착 불량은 반고체 한천 배지 위에 잠복기를 연장하거나 여과지 흡수에 의해 배양 주위 이상의 유체 배지를 제거함으로써 극복 될 수있다. 이 경우 미생물 오염에 대해서도 확인합니다. 절편 동안 어려움 파라핀 블록의 분해에 기인 할 수있다 : 블록의 저장 기간 (한번 용융 파라핀) 너무 오래 되었으면이 발생한다. 예술 절편 때ifacts은 마이크로톰 나이프의 무결성 및 고정 문화 코퍼스의 aliena의 유무를 체크해야 일어난다. 문화 괴사 지역은 가난한 배양 조건의 징후이다. 이러한 영역은 문화 중심지에 한정되.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.
감사의 글
비디오 필름에서 분석 기술을 시연해 준 Marleen De Meulemeester에게 감사드립니다. B. I. R.은 플랑드르 연구 재단(FWO – Vlaanderen)의 박사후 연구원입니다. L.M.M.은 플랑드르 암 리그(Vlaamse Liga tegen Kanker)로부터 Emmanuel van der Schueren 보조금을 받았습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Ringer의 소금 용액 | Braun | CEO123 | |
| Bacto-agar | Becton Dickinson | 214010 | |
| Tris-(hydroxymethyl)-aminomethaan Analar | VWR | 103157P | |
| BSA : 소 혈청의 알부민, cohn V fract. | 시그마 | A4503-500G | |
| MEM-Rega 3 | 라이프 테크놀로지스 | ||
| 자이로토리 쉐이커 | New Brunswick Scientific | G10 및 G33 | |
| 삼각 플라스크 50ml | Novolab | 92717 | |
| 유리 페트리 접시 | Novolab | 68516 | |
| 홍채 절제술 가위 | Rumex | 11-0625 | |
| 보정된 안구 그리드가 있는 매크로스코프 | 와일드 | 157702 | |
| 파라핀 왁스 | 국제 의료 제품 | 8599956 | |
| Eosin Y | Sigma | 230251-25g | |
| Harris의 헤마톡실린 | 시그마 | HHS32-1L | |
| 커버슬립 수지(Tissue-Tek) | Sakura | 4494 | |
| 파라핀 용융 장치 | GFL | 1052 | |
| 파라핀 절편용 마이크로톰 | Reichert | ||
| 가스 인/아웃렛이 있는 Erlemeyer 플라스크용 스텝퍼 | Novolab | 2602421 및 260243 | |
| Diaminobenzidine | Sigma | D8001 | |
| REAX 흔들 테이블 | Heidolph | 54131 | |
| 24웰 티슈 접시 | VWR | NUNC142475 | |
| 안과 적출 스푼 | Rumex | 16-060 | |
| 날카로운 집게 | Rumex | 4-111T | |
| 무딘 집게 | Nickel-Electro Ltd | 7112 | |
| 삼각 플라스크 5ml | Novolab | 211901 | |
| 현미경 슬라이드 세척 및 탈지 | 국제 의료 제품 | 8613908 |
참고문헌
- Mareel, M. M., Bracke, M. E., Van Roy, F. M., de Baetselier, P. Molecular mechanisms of cancer invasion. Encyclopedia of Cancer. JR, B. ertino 2, Academic Press. San Diego. 1072-1083 (1997).
- Mareel, M., Kint, J., Meyvisch, C. Methods of study of the invasion of malign....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
