방법 논문

의 침묵

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DOI:

10.3791/52849

⸱

2015년 8월 12일

 ,  , 
1Institute of Biomembranes and Bioenergetics, National Research Council

이 논문에서

요약

siRNA에 의한 유전자 침묵은 암 생물학을 더 잘 이해하기 위해 즉각적인 영향을 미치는 BRCA2 의존적 생물학적 기능을 분석하기 위한 편리한 실험 전략을 나타냅니다. 인간 세포주에서 면역 블로팅을 통해 BRCA2 단백질 발현의 변화를 검출하고 정량화하는 실험 절차와 함께 BRCA2를 효율적으로 침묵시키는 방법을 제시합니다.

초록

종양 억제 단백질 BRCA2와 기존의 생화학 적 분석에 의해 그 검출 침묵은 인간의 BRCA2 단백질 (약 390 kDa의)의 큰 크기 때문에 큰 기술적 도전을 나타냅니다. 우리는 인간의 상피 세포 라인에 각각 내생 BRCA2 단백질을, 인간의 BRCA2를 침묵과 감지 표준 siRNA를 형질 감염 및 면역 프로토콜의 수정 사항을보고한다. 주요 단계는 형질 전환 시약 비율이 높은 siRNA와 같은 실험 내에서 siRNA를 형질의 두 후속 라운드를 포함한다. 안티 BRCA2 항체와 분석을 면역 블 판단으로 우리가 지속적으로 인간 BRCA2 유전자의 70 % 이상 침묵을 달성 표준 프로토콜이 다른 수정을 사용. 또한, 대신에, 종래의 70 ~ 100 °의 C 및 면역 과정의 다른 기술적 최적화 55 ° C에서의 세포 용 해물의 변성은 그대로 BRCA2 단백질의 검출도 가능 WH출발 물질은 매우 낮은 양의 도중에 가능 또는 BRCA2 단백질 발현 수준이 매우 낮은 경우. 인간의 세포에서 BRCA2의 효율적인 침묵은 종양 세포를 포함 그대로 BRCA2와 세포에서 BRCA2 기능을 방해 할 수있는 새로운 분자 경로 및 종양에서 병원성 BRCA2 돌연변이에 의해 영향을받을 수 세포 기능을 조사하기 위해 가치있는 전략을 제공합니다. 효율적인 침묵과 BRCA2와 같은 다른 '큰'단백질의 분석을 위해이 프로토콜의 적응은 쉽게 달성 할 수 있어야합니다.

서론

BRCA2 (유방암 감수성 유전자-2)의 유전자 재조합 효소 RAD51 (1)의 기능을 조절하여 DNA 이중 가닥 나누기를 복구하는 데 중요한 역할을하는 종양 억제 단백질을 암호화한다. BRCA2는 또한 전사의 조절 및 세포주기 조절에 관련이있다. BRCA2 유전자의 생식 세포 돌연변이는 다른 암 유형 3,4에 상 염색체 우성 남성의 유방과 여성에서 난소 암과 전립선 암에 대한 감수성뿐만 아니라 경향을 유도한다. 그러나, 억제 나 DNA 손상의 원인 5-7 화학 치료제로 암세포 더욱 취약 할 수있다 BRCA2 렌더링 기능을 줄이고 암, BRCA2 돌연변이 현상의 위험 증가에도 불구. 산발적 암은 BRCA2 단백질을 제안, BRCA2 단백질의 감소 수준은 일부 암 종류에서 발견 된하지만 BRCA2 돌연변이 (<3 %)의 낮은 비율을 나타내비 돌연변이에 의존하는 메커니즘 7,8 통해 산발적 암에서 종양 발생시 손실 될 수 있습니다. 따라서, 완전히 암 생물학의 맥락에서뿐만 아니라 다른 생물학적 설정에서 BRCA2 기능을 이해하는 것이 중요하다.

포유류 세포에서 유전자의 신규 한 기능을 식별하는 강력한 도구는 그 발현을 침묵하는 것이다. 일례로서, 정상 상피 세포의 다양한 사일런 BRCA2 발현은 최근 anoikis 저항성 암세포 침습 및 전이 능력 (9)의 획득 동안 중요한 단계의 레귤레이터 등 BRCA2의 신규 기능의 확인하게되었다. 유전자 침묵은 작은 셀 간섭 (SI) RNA 또는 특정 유전자를 대상으로 짧은 헤어핀 (SH) RNA 분자 중 하나에 도입함으로써 달성 할 수있다. 고의 siRNA의 효능과 사용의 용이성이 중요한 생물학적 과정에 새로운 통찰력을 확보하기위한 실험을 입을 것이에게 특혜 도구를 만들ND 새로운 치료 목표를 식별합니다. 그러나, 유전자 발현을 효율적으로 녹다운 모든 유전자를 쉽게 달성되지 않을 수 있고, 세포의 종류에 따라 매우 가변적 일 수있다. 세포 내 단백질 수준에서의 감소는 조사중인 가장 관련된 표현형이기 때문에, 유전자 생성물의 분석에 의해 면역 블 유전자 침묵을 정량화하는 것이 중요하다. 이와 관련하여, BRCA2 단백질은 더 도전을 제공합니다 : 큰 단백질 (약 390 kDa의를)되고, 기술적 인 문제가 면역을 포함하여 기존의 생화학 적 분석을 위해 존재한다.

우리는 여기서 인간 상피 세포 라인에 BRCA2의 효율적인 침묵과 분석을 면역 블에 의해 넉다운 BRCA2 단백질의 신속하고 성공적으로 감지에 최적화 된 프로토콜을보고합니다.

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프로토콜

1. siRNA의 솔루션을 준비

  1. (50 μm의 최종 siRNA의 농도)의 RNA 분해 효소가없는 물을 100 ㎕에 BRCA2 siRNA를 건조 펠렛의 5 스크램블 (CTRL)의 nmol의 5 nmol의를 재현 탁. 이는 siRNA를 스톡하고 10 ㎕의 분취 액으로 -20 ℃에 보관해야한다.
  2. siRNA를 재고 10 μL의 나누어지는을 타고 10 μm의 siRNA를 작업 솔루션을 얻을 수의 RNase가없는 물을 40 μl를 추가합니다. 이 희석 사용할 때까지 -20 ℃에서 저장해야합니다.
    참고 : siRNA의 작업 솔루션 / 냉동을 거쳐 3 번 이상 해동 안된다.

인간 상피 세포주 2. 시드

  1. 37 ° C, 5 % CO 2의 가습 된 배양기에서 조직 배양 플레이트에서 세포 단층으로 성장하는 인간 상피 세포주에서 성장 배지를 제거한다.
  2. 한 번 RT PBS로 접시에 세포 (100mm 판 PBS로 10 ml)에 씻으십시오.
  3. 판에서 세포를 분리,0.25 % 트립신 2 ㎖ / 0.53 mM의 EDTA 용액을 추가하고 세포 유형에 따라 3-5 분 동안 배양한다.
  4. 분리 된 세포를 수집하기 전에, 10 % 소 태아 혈청을 함유하는 완전 성장 배지 2 ㎖를 첨가하여 트립신을 중화.
  5. 15 ML 튜브에 세포를 전송합니다.
  6. 스윙 버킷 회 전자에 4 ℃에서 3 분 동안 320-330 XG에서 세포를 원심 분리기.
  7. 항생제 배지 5ml에 세포 펠렛을 재현 탁.
  8. BURKER 챔버 현미경 또는 제조업체의 지시에 따라 자동 카운팅 시스템을 사용하여 세포를 카운트.
  9. 6- 웰 플레이트에 세포가 24 시간 (도 0.5-1 X10 각 배지 2 ㎖로 106 세포) 후 약 80 % 컨 플루 언트 될 시드. 최적의 세포 수는 특정 세포주 및 성장률에 따라 변할 수있다 시딩한다.
    참고 : 항생제에 부정적인 transfe의 효율성을 방해하기 때문에이 시점에서 매체에 항생제를 추가하지 마십시오ction의. 그것은 BRCA2 siRNA를 형질의 고효율을 달성하기 위해 낮은 배양 통로 (<10)에서의 셀은 매우 중요하다.

siRNA를 3. 형질 세포

  1. 24 시간 세포를 도금 한 후, 형질 전환의 첫 번째 라운드를 진행합니다.
    1. 감소 된 혈청 배지 130 μL 지질 계 10 siRNA를 형질 특정 시약 6 μL 희석.
    2. 감소 된 혈청 배지 130 ㎕를 10 μM의 siRNA (30 pmol의) 3 μl를 희석.
    3. 희석 된 형질 전환 시약 희석 된 siRNA를 결합하고 실온에서 5 ~ 10 분 동안 품어.
    4. 배양하는 동안, 세포로부터 배지를 제거하고 새로운 배지 (항생제없이), 37 ℃에서 예열 된 2 ㎖를 추가한다.
    5. 세포에 siRNA를 형질 감염 시약 착물 250 μL (이 양은 6- 웰 플레이트의 웰에 대해 하나의 경우)에 추가.
    6. (37)에서 가습 된 배양기에서 세포를 부화76; 5 % CO 2 C.
  2. 24 시간 후, 단계 3.1.2에 대해 다음 수정과 3.1.1-3.1.5 단계를 반복하여 형질 전환의 두 번째 라운드를 진행 : 감소 혈청 배지 130 ㎕를 10 μM의 siRNA (50 pmol의)의 5 μl를 희석.
    1. 분석하기 전에 37 ℃에서 1~2 일 동안 세포를 품어.
      참고 : 형질과 두 번째 라운드에서 높은 siRNA를 / 형질 시약 비율의 사용의 두 라운드 BRCA2 침묵의 높은 효율을 얻을 필수적이다.

면역 분석 4.를 Lyse 세포

  1. 비이 온성, 비 변성 세제 octylphenoxypolyethoxyethanol의 1 %, 5 mM의 피로 인산 나트륨, 1 mM의 나트륨 오르토 바나 데이트, 10 mM의 불소화 나트륨, 2 mM 페닐 메틸 술 포닐 플루오 리드, 10 μg의 함유 PBS (PH 7.4)로 신선한 용해 버퍼를 준비 / ㎖ 류 펩틴, 10 μg의 / ㎖ 아프로 티닌. 얼음에 보관하십시오.
  2. 세포 및 W에서 매체를 제거접시에 차가운 PBS (2 ㎖ /도)로 한 번에 화산재. 어떤 PBS 이월을 방지하기 위해, 완전히 판에서 제거합니다.
  3. 각 웰에 용해 버퍼 200 μl를 추가합니다.
    주 : 세포가, 다른 분석을 위해 사용될 세포를 Trypsinize 2.1-2.6 단계에서 설명한 바와 같이 용도에 따라 적절한 버퍼 / 배지에서 세포를 재현 탁 될 수있는 경우에 사용된다.
  4. 조심스럽게 균일하게 용해 버퍼를 배포하고 회 전자에 4 ° C에서 15 분 동안 배양 접시를 회전 할 수 있습니다.
  5. 셀 스크레이퍼를 사용하여 얼음 마이크로 원심 튜브에 세포 용 해물을 수집.
  6. 4 ° C에서 25 분 동안 17,900 XG에 원심 분리기와 새로운 튜브에 뜨는를 수집합니다.
  7. 제조업체의 지시에 따라 시판중인 단백질 분석법을 이용하여 단백질 농도를 측정한다.

5. BRCA2의 면역 분석

  1. 20 배 트리스 - 아세테이트 SDS 실행 B의 50 mL로 희석하여 런닝 버퍼를 준비uffer (50 mM의 트리 신, 50 mM 트리스 자료, 0.1 % SDS, pH가 8.24) 증류수 950 mL를.
  2. 다음과 같은 샘플을 준비한다 (20)의 최종 부피 15 총 세포 용 해물의 μg의, 4X 샘플 완충액 5 ㎕의 pH를 8.4에서 리튬 도데 실 설페이트를 함유하는, 10 배 샘플 환원제 (0.5 M DTT) 2 μL 및 용해 완충액을 추가 μL.
    참고 :이 프로토콜은 (5 μg의 아래로) 또한 총 단백질의 낮은 금액을 사용하여 정상 세포 라인에 BRCA2의 검출 할 수있다.
  3. 10 분 동안 55 ° C에서 샘플 변성.
    주 : 55 ° C를 사용하는 것이 중요하다. BRCA2 단백질이 열성 (11)이기 때문에, 더 높은 변성 온도는 그대로 전체 길이 (390 kDa의) BRCA2 단백질의 일관된 손실이 발생할.
  4. 제조업체의 지시에 따라 전기 영동 챔버를 설정한다.
  5. 샘플 및 precasted 젤에 고 분자량 사전 묻은 단백질 표준의 10 μl를 (트리스 - 아세테이트 3~8%)로드 및 AB 120 V에서 실행밖으로 2 시간 12. 55 kDa의 파란색 마커가 precasted 젤을 떠나기 전에 전기 실행을 중지합니다.
  6. 20 배 전사 완충액 50 ㎖, 100 % 메탄올 100㎖ 및 850 ml의 물을 전송 버퍼를 준비한다.
  7. 5 분 동안 100 % 메탄올에 침지하여 PVDF 막 (0.45 ㎛의 공극 크기)을 활성화하고 증류수로 헹구고, 적어도 5 분 동안 전송 버퍼로 평형화. 사용까지 4 ° C에서 전송 버퍼의 전송 장치의 스폰지를 적시 게.
  8. 전기 영동 실행이 종료되면, 다음 순서 (상향식)에 전송 스택에 샌드위치 조립 : 전송 버퍼 포화 세 스폰지 번 3MM 급 용지는 전사 완충액, 겔, 활성 PVDF 멤브레인 번 3MM 포화 전송 버퍼에서 포화 고급 종이 시트는, 세 스폰지는 전송 버퍼 (13, 14)에서 포화. 4 ℃에서 하룻밤 mA의 4 ° C에서 180에서 4 시간 동안 350mA의 장치 및 전송 단백질에 스택을 놓습니다.
    주 : 고 분자량 단백질의 완전한 전송을 보장하기 위해 4 시간 또는 밤새 행 (제조 및 가장 전송 프로토콜에 의해 제안 된 바와 같이) 존재 BRCA2 매우 큰 단백질,이를 1 시간에서 전송 시간을 연장하는 것이 중요하다. 또한, 인해 긴 전송 시간에, 그 과열을 최소화하고 샌드위치 분해를 촉진하기 위해 4 ℃에서 냉장실에 블 롯팅을 수행하는 것이 필수적이다. 세미 드라이 전송 시스템은 큰 단백질을 전송하기위한 좋은하지 않습니다.
  9. 전송 한 후 (30 μL 방지 BRCA2 토끼 폴리 클로 날 항체로 4 ℃에서 하룻밤 5 % 탈지 분유와 프로브를 포함하는 TBS-트윈 0.25 %에서 실온에서 1 시간 (TBS-T)를 위해 그것을 차단, TBS로 막을 세척 [: 300 (v / v)로 희석 한] 9 mL를 TBS-T + 5 % 탈지 분유로 희석 μg의 200 / ㎖).
  10. 다음 TBS 10ml에 희석 한 서양 고추 냉이 퍼 옥시 다제 - 접합 된 항 - 토끼 이차 항체에 1 μL로 1 시간 동안 필터를 부화, TBS-T로 세 번 막 (각 10 분)을 씻어-T + 5 % 탈지 분유. 그 후, TBS-T로 막 세 번 (10 분마다)을 씻는다.
  11. 강화 된 화학 발광 (ECL) 웨스턴 블로 팅 검출 시약을 사용하여 제조업체의 지침에 따라 BRCA2 단백질을 공개 ECL에 의해 면역을 수행합니다. 높은 해상도 ECL 필름에 immunochemiluminescent 밴드를 시각화.
  12. 10 항 튜 불린 항체의 1,000 (10 μL : β-tubulin에하는 단일 클론 항체를 이용하여 1 희석을하여 부하 제어와 같은 필터에, β - 튜 불린 (55 kDa의)처럼, 하우스 키핑 유전자에 대한 항체와 면역을 수행 실온에서 1 시간 동안 ml의 TBS-T + 5 % 무 지방 분유). 고추 냉이 퍼 옥시 다제 - 복합 항 마우스 대신 항 - 토끼 차 항체의 사용을 제외하고, 세척 및 BRCA2 (5.10-5.11)에 기재 한 바와 같이 차 항체를 품어.
  13. (immunochemiluminescent 밴드 감동 필름의 디지털 이미지를 획득 전용 이미지 분석 소프트웨어에 의한 밴드 강도를 분석 예., ImageJ에).

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결과

세포 기능에 BRCA2 사일런의 효과를 조사하기 위해 생물학적 / 생화학 적 분석을 진행하기 전에 첫 번째 단계는 스크램블링 된 siRNA (siRNA의 비는 타겟팅) BRCA2의 siRNA와 나란히 (도 1a를 이용하여 소음의 특이성을 확인하는 것이다 ). 그것은 BRCA2 사일런의 높은 효율을 얻기 위해 높은 siRNA의 / 형질 비율의 siRNA 형질 감염의 두 번째 라운드를 수행하는 것이 중요하다. 실제로, siRNA를 형질의 한 라운드를 수행하거나 낮은 최저 효율 (그림 1B) 초래 두 번째 라운드 (siRNA를 25 pmol의와 형질 전환 시약의 6 μL)에 형질 전환 비율이 낮은의 siRNA를 사용하여. 두 번째 단계는 유전자 침묵의 최고 수준을 얻기 위해 최적의 최소 시간을 평가하는 것이다. 세포 유형에 따라, 이는 siRNA를 형질 번째 라운드 후 24 내지 48 시간이 변할 수있다. 예를 들어, 24 시간은 Nthy ...

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토론

암수 유방암, 난소 암, 전립선 암, 췌장암 및 흑색 종 3,4- 포함한 여러 암 종류의 위험 증가 BRCA2 유전자 납 생식계 돌연변이는, 다수의 연구는 생물학적 기능을 이해하고 수행 되었기 때문에 BRCA2 단백질의. 이러한 연구의 대부분은 인해 BRCA2 같은 거대한 단백질을 분석하는 기술적 인 문제에 유전 적 기반 주로. BRCA2 단백질 발현을 침묵하고 분석하기위한 여기에 설명 된 방법은 생물학적 분석법의 광범위한 스펙트럼에 BRCA2 종양 억제 유전자의 기능을 연구하기위한 효율적인 수단을 제공한다. 침묵 프로토콜은 아직 BRCA2의 성공적이고 일관성있는 최저에 대한 몇 가지 중요한 변경뿐만 아니라 팁을 표준 siRNA를 형질 전환 절차를 기반으로합니다. siRNA의 형질 전환 프로토콜은 보통 LEN 이용한다 shRNA를, 다르게, 안전하고 신속하고 효율적이며tiviral 벡터는, 특정 바이오 절차를 필요로하지 않고 간편하게 세포 배양 설비가 갖추어져...

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공개 사항

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감사의 글

이 작업은 FIRB-Merit 보조금 RBNE08YFN3_005 및 RBNE08HWLZ_012와 이탈리아 경제 재정부부의 CNR "FaReBio di Qualità" 프로젝트의 지원을 받았습니다.

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재료

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이름회사카탈로그 번호댓글
BRCA2 siRNADharmaconL-003462-00SMARTpool: ON-TARGETplus BRCA2 siRNA
Ctrl siRNADharmacon  D-001810-10-05ON-TARGETplus 비표적 풀
리포펙타민 RNAiMAX 시약 Life Technologies13778075Transfection Reagent
OPTI-MEM I Reduced Serum MediumLife Technologies31985-070Medium for transfection procedure
NuPAGE Tris-Acetate 3-8% 1,5 mm Gel precastLife TechnologiesEA0378Gel for protein electrophoresis
NuPAGE LDS 샘플 버퍼 Life TechnologiesNP0007단백질 전기영동 시약
NuPAGE 시료 환원제(10x)Life TechnologiesNP0004단백질 전기영동용 시약
NuPAGE AntioxidantLife TechnologiesNP0005단백질 전기영동용 시약
HiMark Pre-stained protein standardLife TechnologiesLC5699Prestained marker for gel 전기영동
XCell SureLoc Mini-Cell  SystemLife TechnologiesEI0002단백질 전기영동/전달용 장비
NuPAGE Tris-Acetate SDS Running BufferLife TechnologiesLA0041웨스턴 블로팅용 시약
PVDF 멤브레인MilliporeIPVH00010웨스턴 블로팅용 시약
NuPAGE Transfer BufferLife TechnologiesNP0006-1웨스턴 블로팅용 시약
BRCA2 H-300 토끼 다클론 항체Santa Cruz Biotechnologysc-83261:300 희석
베타-튜불린 단클론 항체Sigma AldrichT4026-100UL1:1,000 희석
탈지 분유Sigma Aldrich70166웨스턴 블로팅용 시약
Tween-20Sigma AldrichP1379웨스턴 블로팅
용 시약SuperSignal West Pico/Femto 화학발광 기질Pierce Thermo Scientific34080/34096화학발광 시스템
PNT1A 세포SIGMA Aldrich(ECACC용)95012614PNT1A SV40 Nthy 세포로 불멸화된 인간, 정상 전립선 상피
SIGMA Aldrich(ECACC용)90011609Nthy-ori 3-1 세포주 인간, 갑상선 여포 상피 세포
세포 증식 Kit I (MTT)Roche11465007001세포 증식 어세이용 키트

참고문헌

  1. Thorslund, T., West, S. C. BRCA2: a universal recombinase regulator. Oncogene. 26, 7720-7730 (2007).
  2. Yoshida, K., Miki, Y. Role of BRCA1 and BRCA2 as regulators of DNA repair, transcription, and cell cycle in response to DNA damage. Cancer Sci. 95, 866-871 (2004).
  3. Martin, A. M., et al. Germline mutations in BRCA1 and BRCA2 in breast-ovarian families from a breast cancer risk evaluation clinic. J Clin Oncol. 19, 2247-2253 (2001).
  4. Castro, E., Eeles, R. The role of BRCA1 and BRCA2 in prostate cancer. Asian J Androl. 14, 409-414 (2012).
  5. Vencken, P. M., et al. Chemosensitivity and outcome of BRCA1- and BRCA2-associated ovarian cancer patients after first-line chemotherapy compared with sporadic ovarian cancer patients. Ann Oncol. 22, 1346-1352 (2011).
  6. Farmer, H., et al. Targeting the DNA repair defect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategy. Nature. 434, 917-921 (2005).
  7. Arbini, A. A., et al. Mitochondrial DNA depletion sensitizes cancer cells to PARP inhibitors by translational and post-translational repression of BRCA2. Oncogenesis. 2, e82(2013).
  8. Yang, F., Guo, X., Yang, G., Rosen, D. G., Liu, J. AURKA and BRCA2 expression highly correlate with prognosis of endometrioid ovarian carcinoma. Mod Pathol. 24, 836-845 (2011).
  9. Guaragnella, N., Marra, E., Galli, A., Moro, L., Giannattasio, S. Silencing of BRCA2 decreases anoikis and its heterologous expression sensitizes yeast cells to acetic acid-induced programmed cell death. Apoptosis. 19, 1330-1341 (2014).
  10. Mahato, R. I., Rolland, A., Tomlinson, E. Cationic lipid-based gene delivery systems: pharmaceutical perspectives. Pharm Res. 14, 853-859 (1997).
  11. Su, L. K., et al. Characterization of BRCA2: temperature sensitivity of detection and cell-cycle regulated expression. Oncogene. 17, 2377-2381 (1998).
  12. Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
  13. Towbin, H., Staehelin, T., Gordon, J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc Natl Acad Sci U S A. 76, 4350-4354 (1979).
  14. Burnette, W. N. ' 'Western blotting': electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate--polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A. Anal Biochem. 112, 195-203 (1981).
  15. Hunter, F. W., et al. Dual targeting of hypoxia and homologous recombination repair dysfunction in triple-negative breast cancer. Mol Cancer Ther. , (2014).
  16. Drew, Y., et al. Therapeutic potential of poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor AG014699 in human cancers with mutated or methylated BRCA1 or BRCA2. J Natl Cancer Inst. 103, 334-346 (2011).
  17. Bryant, H. E., et al. Specific killing of BRCA2-deficient tumours with inhibitors of poly(ADP-ribose) polymerase. Nature. 434, 913-917 (2005).
  18. Ihnen, M., et al. Therapeutic potential of the poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib for the treatment of sporadic human ovarian cancer. Mol Cancer Ther. 12, 1002-1015 (2013).
  19. Jeong, J. H., Jo, A., Park, P., Lee, H., Lee, H. O. Brca2 Deficiency Leads to T Cell Loss and Immune Dysfunction. Mol Cells. , (2015).

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