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방법 논문

철 산화물 나노 입자와 기능화 자기 세균 Nanocellulose의 제작

12.7K 조회수

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DOI:

10.3791/52951

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2016년 5월 26일

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이 논문에서

요약

여기에서는 손상된 혈관 재건에 응용하기 위해 박테리아 나노셀룰로오스(BNC)를 자성화하는 프로토콜을 제시합니다. BNC는 G. xylinus 균주에 의해 합성되었습니다. 한편, BNC의 자화는 BNC 메쉬 내부의 Fe2+ 및 Fe3+ 철 이온의 현장 침전을 통해 실현되었습니다.

초록

본 연구에서는, 박테리아의 Gluconacetobacter xylinus 의해 생산 세균 nanocellulose (BNC)의 합성 및 자성 박테리아 nanocellulose (MBNC)을 수득 산화철 나노 입자 (IONP) (4의 Fe 3 O)와 동일계 함침. MBNC의 합성은 정확하고 설계된 다단계 공정이다. 간단히, 박테리아 nanocellulose은 (BNC) 펠리클이 유지 G.에서 형성된다 크기와 형태의 우리의 실험 요구 사항에 따라 xylinus 변형. 철 (III) 클로라이드 헥사 하이드레이트 (의 FeCl3 · 6H 2 O)과이 철 (II) 클로라이드 수화물 (50ml을 2 · 4H 2 O) 용액 : 1의 몰비로 준비하여 탈산 소화 고순도 물로 희석한다. BNC 펠리클이어서 반응물 용기에 도입된다. 이 혼합물을 침전 적하하여 교반 한 후, 첨가되는 실리콘 오일 욕 암모늄 하이드 록 사이드 (14 %)에서 80 ° C로 가열철은 BNC 메쉬에 이온. 이 마지막 단계는 BNC 펠리클에 자기 특성을 부여하는 박테리아 nanocellulose 메쉬 내부 현장 마그네타이트 나노 입자 (O 4의 Fe 3)에 형성 허용한다. 독성 분석은 BNC-IONP 펠리클의 생체 적합성을 평가하기 위해 사용되었다. 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)의 생체 적합성을 향상시키기 위해 IONPs을 커버하는데 사용되었다. 주사 전자 현미경 (SEM) 이미지는 IONP가 BNC 매트릭스의 공간을 인터레이스 피 브릴에 우선적으로 위치했지만, 그들 중 일부는 또한 BNC 리본을 따라 발견 된 것으로 나타났다. MBNC에서 수행 자기 현미경 측정은 MBNC의 박막의 자기 특성을 확인, 높은 약한 강도의 자기장이 존재 자구를 발견했습니다. 이 연구에서 얻어진 영률 값이 이전의 연구에서 여러 가지 혈관보고 그와 잘 일치도이다.

서론

bacterian nanocellulose (BNC)도 Gluconacetobacter의 xylinus라고도 아세토 xylinum 균주에 의해 합성하고, 정치 배양 동안 공기 - 액체 계면에서 필름 또는 펠리클의 형태로 증착된다. 이러한 BNC의 펠리클은 재배 용기의 형태를 채용하고, 그 두께는 배양의 일수에 의존한다. A.을 xylinus 중합 후속 결정화 과정 셀룰로오스 마이크로 피 브릴의 합성 배지 중의 글루코스를 사용한다. 글루코오스 잔기의 중합은 사슬 글루칸은 세포 외피 분산 단일 기공 압출 박테리아 세포 막에서 수행된다. 셀룰로오스 마이크로 피 브릴의 결정화는 H-1 본딩 시트의 적층이어서 반 데르 발스 결합하여 글루칸 체인 시트의 형성, 세포 외 공간에서 일어난다.

자석BNC 매트릭스 집적 IC 나노은 동맥 벽의 손상된 부위에서 자성 나노 입자를 포함하는 지시 및 평활근 세포를 한정하는 데 필요한 힘 (SMCs)을 증가시키기 위하여 외부 자기장에 의해 쉽게 조작 될 수있다. 이 전략은 SMCs 떨어진 다른 조직에서 유지하고, 혈류에 의해 가해진 힘에 대항 장소에서 세포를 유지한다. SMCs 그들이 중막이 주로있는 풍부한 층을 형성하는 혈관의....

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프로토콜

세균 Nanocellulose 1. 준비 (BNC)

주 : 달리 지시되지 않는 한 모든 단계는 무균 조건 하에서 수행된다.

  1. 문화 매체를 준비합니다.
    1. 효모 추출물 25 g, 펩톤 15 g, 만니톨 125.0 g 및 고순도 물 500㎖를 결합하여 액체 배지 500㎖의 준비. 4 ℃에서 20 분 및 저장을위한 120 ° C에서이 혼합물을 압력솥.
    2. 효모 추출물 5.0 g, 펩톤 3.0 g, 만니톨 25.0 g 및 고순도 물 100ml에 한천 15 g을 첨가하여 반고체 매체 100㎖를 준비. 20 분 동안 120 ℃에서 상기 혼합물을 오토 클레이브. 일단 90mm X 16mm 플라스틱 페트리 접시에 예금 혼합물을 5 ml를 멸균. 더 사용할 때까지이 온도에서 4 ° C에서 젤에 솔루션 및 저장을 할 수 있습니다.
  2. G.을 재수 xylinus 변형 액체 배지 1 ㎖를 첨가하고, 피펫 팅하여 최대 동결 건조 바이알에 보존아래로 제조업체의 지침에 의해 표시.
  3. 접종 루프를 사용하여 세균 현탁액의 작은 방울 반고체 미디어를 포함하는 배양 접시에 접종. 접종은 접시의 중앙에 가장자리에서 지그재그 방향으로 루프를 이동하여 전....

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결과

G.의 잠복기 xylinus 9 일 총했지만, 펠리클 앞서 형성되기 시작하고 약 2 주 후에 분명했다. 의 BNC의 거시적 인 외관은 그림 1에 표시됩니다, 그 접시 성장 문화의 어떤 모방의 형태.이 그림뿐만 아니라 위의 프로토콜과 관련된 주요 단계를 요약하고있는 BNC-IONP의 펠리클의 제조 방법을 설명합니다 주요 구성 요소의 구성.

SEM 이미지는 미세 구조, 형태, 및 BNC (도 3)에 작용 BNC IONP 분포 섬유의 공간적 분포 (도 4)을 확인하는 데 사용 하였다. 의 BNC는 정의 된 패턴없이 전체 네트워크에 걸쳐 열린 기공을 형성 미세 리본 (직경 약 50 ㎚).......

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토론

의 BNC 펠리클의 두께 및 크기를 쉽게 배양 시간과 정적 배양 중에 성장시킨 플라스크의 크기를 변경함으로써 조작 될 수있다. 의 BNC의 microproperties, 예컨대 기공률 같이, 정적 배양에서의 산소 비율을 변화시킴으로써 변경 될 수있다. 높은 산소 농도는 BNC 11 강하다 얻을. A. 보댕 및 동료 G. 발효 과정에서 100 %의 산소 분위기에서 산소의 산소 비율을 변화시킴으로써 880mm 수은 최대 파열 압력 BNC의 튜브를 제조 xylinus 12. 마찬가지로, BNC의 다공성은 또한 발효 공정에 파라핀 왁스 등의 미소 포로 겐을 포함하여 도입 될 수있다. 이 경우, 생성 된 다공성 및 기공 상호은 기공 크기 (13)에 의존 할 것이다.

의 BNC의 다공성 네트워크는 약물 전달을 위해 그들을 예를 들면 나노 입자로 작용 화 될 수 있도록자치령 대표. .......

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공개 사항

저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

이 작업은 계약 번호 W81XWH-11-2-0067에 따라 국방부에서 자금을 지원했습니다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Glucoacetobacter xylinusATCC700178
AgarSigma AldrichA1296-500G 
D-Mannitol BioxtraSigma AldrichM9546-250G 
효모 추출물BD Biosciences212750
세균학 펩톤시그마 알드리치P0556
수산화나트륨, 물 속 50% 용액시그마 알드리치158127-100G
철(III) 염화 헥사하이드레이트시그마 알드리치236489-100G 
수산화암모늄 마크롱 파인 케미컬6665-46
폴리(에틸렌 글리콜), 평균 Mn 400시그마 알드리치202398-250G 
철 (II) 염화물 테트라하이드레이트Sigma Aldrich44939-250G
일회용 페트리 디쉬Sigma AldrichBR452000
일회용 접종 루프Fisher Scientific22-363-604 
무수 황산칼슘W.A. Hammond Drierite 13001
고진공 그리스Sigma AldrichZ273554-1EA
실험실용 피펫팅 바늘 90도; 무딘 끝Sigma AldrichCAD7937-12EA
pH 테스트 스트립   Sigma AldrichP4786-100EA
둥근 바닥 세 목 각도 타입 증류 플라스크Sigma-AldrichCLS4965250
오일 목욕용 실리콘 오일Sigma-Aldrich85409-250ML 
건조 튜브ChemglassCG-1295-01
격막 마개, 슬리브 유형ChemglassCG-3022-98
자기 교반 막대ChemglassCG-2001-05
콘덴서ChemglassCG-1218-01
온도 조절기BriskHeatSDC120JC-A
교반 핫 플레이트피셔 사이언티픽11-100-49SH 
Comet Assay KitTrevigen4250-050-K
SYBR Gold Nucleic Acid Gel StainLife TechnologiesS-11494
bio-AFMJPK InstrumentsNanoWizard 4a BioScience AFM
NanoindenterMicro Materials Ltd다중 모듈 기계 테스터 
주사 전자 현미경 (SEM)Hitachi High Technologies AmericaHitachi S-4800

참고문헌

  1. Saxena, I. M., Brown, R. M. Biosynthesis of bacterial cellulose. Bacterial Nanocellulose: A Sophisticated Multifunctional Material. , 1-18 (2012).
  2. Chan-Park, M. B., Shen, J. Y. Biomimetic control of vascular smooth muscle cell morpholo....

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