마우스 폐 암 연구에 유용한 점안 및 고정 방법

요약

이 논문의 목적은 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명하는 것입니다. 우리는 간단하고 확실하게 폐 instillations, 정착, 폐 용적 측정을 수행하는데 3 프로토콜을 제시한다.

초록

부상 또는 쥐를 죽이지 않고 직접 폐로 라이브 제제, 세포, 또는 화학 물질을 주입하는 능력은 폐암 연구에서 중요한 도구이다. 폐 기능 측정을 위해 마우스를 삽관하는 방법을 보여주는 게시 된 많은 방법이 있지만, 아무도는 마우스의 큰 동료의 급격한 기관 점안에 대한 잠재적 인 문제없이 없습니다. 본 논문에서는 간단하고 빠른 방법은 효율적인 방식으로 이러한 instillations을 수행하는 연구자있게 것이 기재되어있다. 이 방법은 특별한 도구 나 조명을 필요로하지 않고 약간의 연습을 배울 수 있습니다. 또한, 마우스를 마취 기관을 시각화 목에 작은 절개를 제작 한 후 직접 정맥 카테터를 삽입하는 것을 포함한다. 작은 절개 빠르게 조직 접착제로 폐쇄하고, 마우스를 복구 할 수있다. 숙련 된 학생 또는 기술자는 2 분 / 마우스의 평균 속도로 instillations을 수행 할 수 있습니다. T 일단암이 확립 그는, 폐의 조직 학적 정량 분석​​에 대한 요구가 빈번하다. 전통적으로 고정하는 동안 폐 인플레이션을 표준화 귀찮게하지 않습니다 일반적으로 병리학 및 분석은 종종 매우 주관적 일 수있는 평가 시스템을 기반으로합니다. 이 언젠가 폐 종양의 크기의 추정을위한 총 충분히 적합 할 수 있지만, 폐 세포 구조 또는 임의의 적절한 stereological 정량화 재현성 정착 과정 및 후속 폐 량 측정을 필요로한다. 여기에서 우리는 모두 압력 폐를 고정하고 정확하게 고정 폐 용적을 측정하는 간단한 신뢰할 수있는 절차에 대해 설명합니다. 유일한 요구 사항은 MG-1 300 g의 범위에 걸쳐 정확한 실험 실용 저울이다. 그러므로 여기에 제시된 절차는 크게 마우스에서 폐암을 생성 처리, 및 분석 할 수있는 능력을 향상시킬 수있다.

서론

여러 가지 이유로, 폐암 널리 마우스에서 연구되지 ​​않았다. 그 이유 중 하나는 폐에 대한 액세스가 생체 내에서 매우 곤란하며, 고정 된 폐의 정량 분석은 일반적으로 수행되지 않는다는 것이다. 이 문서에서 설명하는 방법은이 상황을 해결하기 위해 설계되었습니다. 목표는 여기에 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명한다. 이러한 방법 중 어느 것도 완전히 새로운 없지만, 그들은 여기에 설명 된대로 단순화 된 방식으로 독립 실행 형 방법으로 함께 제시되지 않았다.

주로 길이 연구에서 개별 마우스에서 반복 폐 기능 또는 기관지 세척을하는 목적 마우스 폐 삽관 용 방법을 설명 하였다 원고있어왔다. 그 원래의 종이 때문에, MOUS에 다른 접근 방식을 설명했다 몇 가지 다른 논문이 있었다전자 삽관 ^{1 -9.} 이들 방법 모두가 성공적으로 사용될 수 있지만, 그들은 일반적으로 상당한 훈련이 필요하며, 사소 실패율없이 종종있다. 또한, 폐 기능의 측정을 수행하기 위해, 캐 뉼러는 공기 누설이 없도록 충분히 밀접 기관 적합해야한다. 그러나, 삽관 용 다른 실용적인 사용은 폐에 직접 특정 에이전트 (암세포 또는 기타 욕설) 또는 치료제를 제공하는 것이다. 이러한 절차는 꽉 ....

프로토콜

다음 프로토콜은 20-35g 마우스에서 잘 작동하는 시스템을 설명합니다. 방법은 쉽게 간단히 카테터의 크기를 변경하여 더 크거나 작은 마우스에 적응 될 수있다. 모든 동물 프로토콜은 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.

1. 폐 떨어 뜨림

1. 삽관에 사용하는 상용 1 인치 긴 20g 정맥 캐뉼라를 선택합니다.
2. 수동으로도 1에 도시 된 바와 같이 그 선단부에 약간의 곡률을 생성하도록 절곡 카테터 팁을 수정한다.
3. IP는 케타민 (100 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (15 ㎎ / ㎏)의 혼합물로 마취 주사 마우스, 반사 및 움직임의 부재를 확인하여 마취. 즉시 마취 후 눈에 수의학 연고를 적용합니다. 마취는 눈에 수의학 연고를 적용하고 이후 수술 및 점안 마취에 대한 카프로 펜 (5 ~ 10 ㎎ / ㎏ SQ)을 얻었다 직후.
4. 양해 각서 (MOU)를 배치경 사진 플랫폼에 자체 부정사. 도 2에 도시 된 바와 같이, 봉합 루프와 함께 큰 사무실 바인더 완벽 잘 작동에 녹화.
5. 목 청소의 복부 부분을 면도하고 70 % 알코올로 목 영역을 소독. 새로운 라텍스 -와 powder- 무....

결과

절차는 그 자체로 어떤 일반화 된 결과로 연결되지 않는 첫 번째 프로토콜에 대해 설명합니다. 단지 직접 기관지 내로 물질을 주입하기위한 수단을 더 믿을만한 설명한다.도 7은 트립 판 블루가 여기에 기재된 방법에 주입시킨 폐의 일례를 도시한다. 기관 또는 마우스 ^{(11, 12)에} 주어진 다른 염료 또는 추적자로 볼 된 것과 유사한 염료의 광범위한 분포는있다. 우리는 또한 각각 널리 섬유증이나 폐기종, 결과 폐에 블레오 마이신 또는 엘라 스타 제를 제공하기 위해이 방법을 사용했다.

사후 폐에서 구조적 변화를 정량화 기재된 절차는 25cm의 H ₂ O의 압력으로 고정 폐 볼륨에 데이터를 제공 할 이러한 볼륨 측정은 총 수 ^(10)에 세포 또는 조직 밀도의 후속 편견 조직 학적 측정을 변환하는 것이 필수적이다. 본 논문 만 드매우 정확한 폐 용적을 구하는 수단을 스.......

토론

여기에 설명 된 절차는 여러 가지 장점이있다. 먼저 필요한 장비는 간단하고 저렴하다. 둘째, 삽관 빠르게 거의 오류없이 수행 할 수있다. 셋째로, 고정 폐 용적을 일정한 압력으로 폐를 고정하고 측정하는 능력은 폐 ^(10)의 구조 또는 셀의 적절한 정량을 허용한다.

삽관에 한 가지 단점은 작은 수술이다. 이것은 2 ^{차 점적} 주입이 필요한 경우의 절차를 반복 할 수있는 능력을 제한 할 수있다. 그러나, 접착제의주의 수술과 응용 프로그램과 함께 우리는 정기적으로 또는 두 개의 나중에 제 점안 일주일을 할 수 있었다. 연속 반복 instillations가 필요 또는 반복적으로 폐 기능 검사가 필요한 경우, 다른 삽관 방식은 ^13,14 더 바람직 할 수있다합니다.

점안을함으로써, 언급해야 몇 가지 실제적인 문제가 있습니다. 그것은 중요 T입니다오 입의 초기 개방의 혀의 움직임.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
실험실 저울	Ohaus	Adventurer Pro 모델 AV 313	범위가 1-300g인 경우 다른 저울을 사용할 수 있습니다
20g Luer 정맥 카테터	Insylte		다른 여러 가능한 공급업체, 예: , Jelco Optiva
500ml 실험실 병	다양한		기타 여러 가능한 공급업체