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방법 논문

생체 분자 시간적으로 방출 제어용 고분자 전해질 계면 섬유의 복합 공사장 공중 발판

8K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/53079

⸱

2015년 8월 19일

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, National University of Singapore, 2Mechanobiology Institute, Singapore, National University of Singapore, 3Department of Surgery, National University of Singapore

이 논문에서

요약

조직 공학을 위한 스캐폴드는 세포 틈새의 복잡한 생화학적, 생물물리학적 미시환경을 다시 요약해야 합니다. 여기에서는 계면 고분자 전해질 복합체 섬유를 플랫폼으로 사용하여 지속적인 생화학적 방출을 가진 복합 다중 구성 요소 고분자 골격을 만드는 방법을 보여줍니다.

초록

조직 공학에 사용되는 다양한 골격은 생리학적 세포 틈새를 모방하기 위해 통제된 생화학적 환경을 필요로 합니다. 계면 고분자 전해질 복합체(IPC) 섬유는 소분자 약물, 세포, 단백질 및 성장 인자와 같은 다양한 생물학적 제제의 제어된 전달에 사용할 수 있습니다. IPC 섬유를 만드는 방법론의 단순성은 제어된 생체 분자 전달을 위한 응용 분야에 유연성을 제공합니다. 여기에서는 IPC 섬유를 친수성 다당류와 소수성 폴리카프로락톤의 두 가지 다른 고분자 골격에 통합하여 다성분 복합 골격을 만드는 방법을 설명합니다. 우리는 IPC 섬유가 이러한 고분자 구조에 쉽게 내장될 수 있음을 보여주었으며, 이를 통해 생체 분자의 지속적인 방출 및 향상된 보존 능력을 향상시킬 수 있음을 보여주었습니다. 우리는 또한 세포 행동에 시너지 효과를 줄 수 있는 지형학적 단서와 지속적인 생화학적 방출을 가진 복합 고분자 골격을 만들었습니다. IPC 섬유가 있는 복합 고분자 지지체는 세포 틈새를 재현하는 새롭고 간단한 방법을 나타냅니다.

서론

세포외 기질은 세포 행동을 지시하는 고유한 생화학적, 생물물리학적 단서를 가지고 있습니다. 이러한 생리학적 3차원(3D) 미세환경을 모방하는 것은 재생 의학 및 조직 공학 응용 분야에서 널리 연구되는 전략입니다. 예를 들어, 자연적으로 파생된 기질과 합성 기질은 모두 생물물리학적 세포 환경을 모방하기 위한 수단으로 지형학적 단서로 변형되었습니다. 1 예를 들어, 폴리카프로락톤(PCL) 스캐폴드는 패터닝된 PDMS 기판에 주조하여 쉽게 패터닝할 수 있습니다. 2 그러나 대부분의 합성 골격은 생체 내에서 제어된 생화학적 환경을 부적절하게 요약합니다.합성 물질의 벌크 또는 표면 변형은 세포 부착을 위한 생화학적 단서만 제시하지만 여전히 생화학적 전달에 대한 시간적 조절이 부족합니다. 3 따라서, 세포외 기질의 시간적으로 조절되는 생화학적 전달 시스템을 모방할 수 있는 최적의 골격이 필요합니다.

미세구와 같은 생화학적 전달 시스템은 다단계 합성 공정의 심각성과 복잡성으로 인해 생체 활성이 손실되고 통합 효율이 낮다는 문제로 어려움을 겪고 있습니다. 4-6 원스텝 제조 및 혼입 방법을 사용하는 대체 방법은 혼입의 비효율성 및 생체 활성의 손실 없이 유리한 생화학적 미세환경을 생성할 수 있는 우수한 잠재력을 가지고 있음이 입증되었습니다. 한 가지 실행 가능한 솔루션은 계면 고분자 전해질 복합체(IPC) 섬유를 사용하여 생물학적 제제를 전달하고 보호하는 것입니다. 두 개의 반대 전하를 띤 고분자 전해질 수용액을 함께 사용하면 계면에서 IPC 섬유를 추출할 수 있습니다. 수용액에 있는 거의 모든 유형의 hydrophlic 생체 분자는 음전하를 띤 또는 양전하를 띤 고분자 전해질 용액에 첨가될 수 있으며, 따라서 복합화 과정에서 IPC 섬유에 유용한 생체 분자의 통합을 용이하게 합니다. 또한 이 공정에는 수성 및 주변 조건만 필요하므로 생체 활성이 손실될 위험이 줄어듭니다. 이 방법을 사용하여 활성 성장 인자2,7 짝수세포 8,9가 성공적으로 전달되었습니다. 또한 IPC 섬유를 형성하는 간단한 방법으로 모든 모양이나 방향으로 성형할 수 있습니다. 이러한 섬유의 안정성은 복합 골격을 생성하기 위해 소수성2 및 친수성 중합체7 모두에 통합되는 데 유리했습니다. IPC 섬유가 있는 이러한 복합 골격은 세포에 물리적 고정을 제공하면서 생리학적으로 관련된 생화학적 환경을 만드는 데 유용합니다.

이 연구에서는 IPC 섬유를 활성 생체 분자의 방출 제어를 위한 지형이 있는 친수성 및 소수성 골격에 통합하는 방법을 보여줍니다. 개념 증명으로, 키토산과 알긴산으로 만든 IPC 섬유를 생체 적합성, 비면역원성 및 비항원 pullulan-dextran 친수성 하이드로겔 또는 생체 적합성 폴리카프로락톤 소수성 스캐폴드에 통합합니다.

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프로토콜

고분자 전해질 솔루션 1. 준비

  1. 리아 외에서 설명하는대로, 키토산을 정제. 간략하게, 1 %를 만드는 2 % 키토산 용액 (/ V W) (v / v) 아세트산 함유하고, 진공 필터 (93)가 급 여과지. pH가 10 분 동안 1,200 XG에서 7 원심 침전 된 키토산에 안정화 될 때까지 5M 수산화 나트륨을 사용하여 여과 액을 중화. 뜨는을 가만히 따르다 및 키토산을 씻어 탈 이온수를 추가합니다. 원심 분리 및 세척 단계를 두 번 더 반복합니다. 정제 된 형태를 얻기 위해 -80 ° C 및 동결 건조 O / N에서 석출 키토산 동결. 제습 캐비닛에 정제 된 키토산을 저장합니다.
  2. 무균 조직 배양 접시에 정제 키토산 1g을 달아. 생물학적 안전 캐비넷의 UV 램프에 최대한 가깝게 조직 배양 접시에 키토산을 넣고 15 분 동안 UV 광에 노출. 무균 핀셋을 사용하여, 유리 용기에 멸균 키토산 놓는다. 용해 키토산은 0 필터링 사용.0.5 %와 1 % 사이의 최종 농도 15M 아세트산 (W / V).
  3. 알긴산 나트륨 0.1 g을 칭량하고 (w / v)의 용액을 1 %를 얻기 위해 탈 (DDI)의 증류수 10ml에 녹인다. 완전한 용해를 보장하기 위해 볼텍스 혼합기에서 적어도 2 시간 동안 알긴산 나트륨 염을 섞는다. 0.2 μm의 주사기 필터를 통해 알지네이트 용액 필터. 4 ° C에서 알지네이트 솔루션을 저장합니다.
  4. 제조자가 권장하는 신경 성장 인자 (NGF), - 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 또는 베타 인간 재조합 성장 인자 재구성.

IPC 섬유 2. 도면

  1. 유사한 순 전하를 갖는 고분자 전해질 용액의 10 내지 20 μL의 분취 액으로 단백질, 성장 인자 또는 다른 생물 분자를 섞는다. 순 음전하 (예, 소 혈청 알부민 [BSA])와 생물학적 분자 알지네이트 용액을 혼합한다. 양전하 (예 : VEGF)와 생물 분자와 혼합되어야키토산 솔루션입니다.
  2. 파라 필름으로 덮여 안정된 평평한 표면에 키토산 및 알긴산의 작은 분취 량 (10 ~ 20 μL)를 놓습니다. 키토산 및 알긴산 액 근접 배치 아니라 서로 접촉한다.
  3. 가볍게 키토산과 알긴산 방울에 집게 한 쌍의 각 끝을 찍어. 함께 집게 곤란하여 고분자 전해질의 방울을 가져와. 물방울이 서로 접촉 할 때, 서서히 두 방울 (도 1a)의 인터페이스에서 IPC 섬유 그릴 수직 상방 집게를 당긴다.
  4. 이러한주의 깊게 회전 맨드릴 상에 부착되어 플랫 고분자 담체로 집 전체에 겸자에 그려진 IPC 섬유의 단부를 배치했다 (제 3 및 4 참조). 유니폼과 IPC 섬유 beadless 형성 할 수 있도록 10mm / sec의 고정 된 속도로 맨드릴을 돌립니다. Incorporated의 버스트 방출을 일으킬 것이다 비드를 형성 할 것이다 IPC 섬유 드로잉 속도를 증가생화학 및 조기 섬유 종료. (10)
  5. 통합의 효율성을 결정하기 위해, 남아있는 모든 액체가 1X 인산염 완충 생리 식염수 500 μL (PBS)으로 희석하여 파라 필름에 남아 수집합니다. BCA의 (BSA에 대한) 분석 (VEGF 및 NGF의 경우) 또는 ELISA 혼입 생체 분자를 검출하기 위해 적절한 분석을 통해 잔사 중의 단백질 또는 성장 인자의 함유량을 측정한다.

복합 하이드로 겔 풀루 란 - 덱스 트란의 비계 (PD) 다당류 및 IPC 섬유 3. 제작

  1. IPC 섬유 수집을 위해 희생 풀루 란 프레임 제조
    1. 풀루 란 다당류를 달아 (W / V) 수용액을 20 %를 만드는 증류 탈 (DDI) 물과 혼합. 균일 성을 보장하기 위해 풀루 란 솔루션 O / N을 섞는다.
    2. 10cm 직경의 조직 문화 폴리스티렌 (FPC 기판) 접시에 풀루 란 용액 15g 캐스트. 37 ° C에서 풀루 란 솔루션 O / N을 건조. 7에 풀루 란 영화를 잘라MM은 7mm 사각 프레임을 X.
  2. 풀루 덱스 트란 폴리 사카 라이드 용액을 제조
    1. 30 %를 만들기 다당류의 솔루션 풀루 란과 덱스 트란 (/ V W) : DDI 물 (3 1 비율). 폴리 사카 라이드 용액의 균질성을 확인하기 위해 O / N 섞는다. 천천히 20 %의 최종 농도를 달성하기 위해 다당류 용액에 중탄산 나트륨으로 추가 (W / V). 용액의 균일 성을 보장하기 위해 O / N을 섞는다. 4 ° C에서 다당류 솔루션을 저장합니다.
  3. 풀루 란 프레임 IPC 섬유를 수집
    1. 악어 클립을 사용하여 희생 풀루 란 프레임 (3.1)를 붙입니다. 플라스틱 코팅 된 접착 테이프를 사용하여 회전 맨드릴의 끝에 악어 클립 및 풀루 란 프레임을 스틱. 10mm / sec의 일정한 속도로 부착 된 프레임 맨드릴을 돌립니다. 풀루 프레임은 원하는 방향으로 회전 맨드릴 상에 부착 될 수있다.
  4. 집게 쌍 (1 절)와 ATTAC을 사용하여 IPC 섬유 그리기H 회전 풀루 란 프레임 상에 IPC 섬유의 그린 끝. 일정 속도로 IPC 섬유를 그린다. IPC 섬유의 말단부에 도달 한 후, RT에서 N / 섬유 - 온 - 프레임 구조의 O를 건조.
  5. PD 하이드로 겔 지지체에 IPC 섬유의 포함
  6. . (/ V W) 나트륨 수용액 및 100 μL의 10M 수산화 나트륨을 트리 메타 11 %, 100 ㎕를 추가 풀루 덱스 트란 용액의 각 그램 가교 7 1 ~ 2 분 동안 stirplate를 이용하여 60 rpm으로 용액을 혼합하기. 트리 메타 포스페이트 나트륨과 수산화 나트륨을 첨가 한 후, 폴리 사카 라이드 용액을 거의 즉시 가교 것이다. IPC 섬유를 완전히를 포함하는 섬유 - 온 - 프레임 구조에 점성 다당류 용액을 붓고. 화학적으로 가교 결합 된 복합체 지지체 (도 1b)를 형성하기 위해 30 분 동안 60 ° C에 결합 된 덱스 트란, 풀루 란 - IPC 섬유 (PD-IPC)를 부화.
  7. 주의 : 흄 후드 단계 3.3.2을 수행하고 적절한 보호 동등를 사용아세트산 등의 pment 부식성 및 인화성이다.
  8. PD-IPC 지지체의 기공 형성을 유도하기 위하여, 20 분에 20 % (w / v)의 아세트산 전체 골격 잠수함.
  9. 100 rpm으로 흔들어 섞으면 서 5 분간 1X PBS에 세척 PD-IPC 골격에 의해 미 반응 시약을 제거합니다. 이 단계를 2 번 반복합니다.
  10. 초과 PBS를 제거하고 즉시 -80 ° CO / N의 PD-IPC 발판을 동결. 비계 어떤 제어 방출 또는 생체 활성 분석에 사용하기 전에 적어도 24 시간을 동결 건조.

PCL 및 IPC 섬유의 복합 비계 4. 제작

주의 : 디클로로 메탄은 위험한 물질이다. 디클로로 메탄을 처리 할 때 흄 후드 및 개인 보호 장비를 사용합니다.

  1. 깨끗한과 패턴 PDMS 기판 만들기
    1. 소프트 리소그래피 공정을 이용하여 원하는 치수의 FPC 기판의 일부를 사용하여 깨끗한 폴리 디메틸 실록산 (PDMS) 탄성 기판 만든다. patte 만들기원하는 템플릿 지형 폴리 (메틸 메타 크릴 레이트)에 표준 소프트 리소그래피 방법을 사용하여 rned PDMS 기판. (12)
  2. IPC 섬유 수집을 위해 희생 PCL 프레임 제조
    1. PCL을 달아 (W / V) 솔루션을 0.9 %를 만들 디클로로 메탄에 용해. PDMS 기판의 모든 1cm 2 지역의 경우, 0.9 % PCL 용액 500 μl를 놓습니다. 완전히 흄 후드에서 증발 디클로로 메탄 용매를 모두 허용합니다. 원하는 두께로 필름을 두껍게 0.9 % PCL 주조의 과정을 반복합니다. PDMS 기판에서 건조 PCL 필름을 제거합니다. 적절한 크기의 구멍을 뚫는을 사용하여 PCL 프레임에 구멍을 만듭니다. (2)
  3. PCL 프레임 IPC 섬유를 수집
    1. 악어 클립 (4.2.1)에서 구멍 희생 PCL 프레임을 부착합니다. 플라스틱 코팅 된 접착 테이프를 사용하여 회전 맨드릴에 악어 클립 스틱. PCL의 FRAM에 IPC 섬유의 그린 끝을 연결합니다10mm / 초 (제 2)의 일정 속도로 회전을 시작하기 전에 전자. IPC 섬유 드로잉 종료 후, 섬유에 프레임 구조의 O / N에서 4 ℃에서 건조.
  4. 섬유에 프레임이 패턴 PCL 기판으로 구성 퍼가기
    1. 필요에 따라, 깨끗한 또는 패턴 PCL 기반을 만들기 위해 PDMS 기판에 0.9 % PCL 용액 500 μl를 삭제합니다. 원하는 두께와 발판을 얻었다 0.9 % PCL 용액 다층 캐스트. 완전히 흄 후드에서 증발 디클로로 메탄 용매를 모두 허용합니다.
    2. PCL베이스의 상단에있는 섬유에 프레임 구조 (섹션 4.3.1)을 놓습니다. 원하는 두께를 얻기 위해 섬유의 프레임 구성을 여러 번에 0.9 % PCL 솔루션을 추가하고 완전히 PCL-IPC 복합 지지체 (그림 1C을) 제조, IPC 섬유를 포함.

복합 IPC 공사장 공중 발판에서 생물학 작용제의 릴리스 5. 측정

  1. 배치 합성 PD IPC-또는PCL-IPC 골격 및 독립 실행 형 IPC 섬유를 별도로 24 웰 플레이트에.
  2. 발판을 담그고 독립형 IPC 섬유를 1X PBS 500 μL와 함께. 37 ° C에서 샘플을 품어. 다양한 시점 (릴리스 미디어)에서 PBS를 수집하고 1X PBS 500 μL로 교체합니다.
  3. 통합 생체 분자 누적 방출 프로파일을 계산하는 BCA 분석 (BSA), ELISA (VEGF 및 NGF) 또는 다른 적절한 분석을 이용하여 분리 배지에서 단백질 또는 증식 인자의 양을 측정한다.

합성 IPC 공사장 공중 발판에서 세포의 6. 시드 출시 생물 제의 생체 활성 테스트하는

  1. 적어도 20 분 동안 생물학적 안전 캐비넷에 UV 광을 사용하여 동결 건조 PD-IPC 또는 PCL-IPC 복합 지지체 멸균.
  2. 200 ㎕의 성장 배지에 2 × 105 세포의 세포 현탁액을 수득 표준 세포 배양 기술을 사용한다. 복합체 지지체 상 농축 세포 현탁액을 시드. AfteR 20 분, 완전히 비계 잠수함하는 성장 미디어의 최고 최대 볼륨을 설정합니다.
  3. 이러한하는, Alamar 블루 대사 활동 분석, PC12의 신경 돌기 가지 분석 또는 면역와 같은 표준 기술을 통해 세포 활성을 측정합니다.

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결과

이 글에서, 우리는 다양한 생체 분자의 서방에 대한 IPC 섬유와 복합 발판을 만드는 노력했다. 본 연구에서 사용 된 생체 분자의 특성을 표 1에서 발견된다. IPC 섬유는 제 PD-IPC 복합체 지지체 (도 1B)를 만들기 위해 PD 친수성 하이드로 겔에 포함 하였다. 모델 분자 BSA 먼저 제어 생체 릴리스 복합체 지지체를 사용하는 타당성을 결정하기 위하여 시험 하였다. BSA는 45 ± 0.97 %의 효율과 PD-IPC 골격에 통합했다. PD-IPD에서 출시 BSA는 수반 정상 상태이어서 초기 감쇠 버스트 릴리스 (그림 2)와 선형에 가까운 반응 속도를 보였다. 후 2 개월, BSA는 97 %의 총 방출을 달성했다. 반대로, 단독 섬유 IPC하여 4 시간 내에 80 %의 BSA의 신속한 방출을 나타내었다.

다음으로, 우리는 PD-IPC의 scaffo를 사용하여 VEGF의 방출 프로...

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토론

IPC 섬유 개의 반대로 대전 된 고분자 전해질의 상호 작용에 의해 형성된다. 프로세스는 안정된 섬유 형성을위한 자기 조립 공정을 용이하게 고분자 전해질의 계면에서의 복잡한 추출을 이용한다. IPC 섬유 형성의 메카니즘은 유사 대전이 고분자 전해질 복합체 과정에서 혼입 될 수있는 생리 활성 물질로 첨가되도록. 10,11는 반대로, 반대로 대전 된 고분자 전해질로 생리 활성 물질의 첨가는 즉각적인 침전이 발생할 것이다. IPC 섬유에 대한 간단한 제조 방법은 세포, 성장 인자 및 작은 분자 등의 다양한 생체 물질을 포함에 다양성을 준다. IPC 섬유이 중요한 기능은 또한 다른 물리적 특성과 생체 분자 (충전 및 분자량)과 성장 인자가 높은 효율로 혼입 된 PD-IPC 및 PCL-IPC 복합 지지체 모두에서 관찰되었다. 콘트라에서ST는, VEGF 및 NGF 용 미세 방법론을 사용하여 캡슐화 효율은 각각 16 % 6 13 8 % 정도로 낮을 수있다.

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공개 사항

저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

이 작품은 우수 연구 센터, 제어 공학 연구소, 싱가포르 중 하나에 의해 관리되는 싱가포르 국립 연구 재단에 의해 지원되었다. MFAC는 1122703037. BKKT는 제어 공학 연구소 지원 연구를위한 과학, 기술 및 연구 기관 (싱가포르) 및 국가 기관 (프랑스) 프로젝트 번호에 따라 공동 프로그램에 의해 지원됩니다. 우리는 증명 판독 비디오 제작에 협조 원고와 양 새벽 JH 네오 씨 다니엘 HC 웡 감사합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
풀루란 Hayashibara Inc 일본 오카야마분자량 (MW) 200 kDa. 이 재료는 풀루란 프레임과 PD-IPC 스캐폴드를 만드는 데 사용되는 제약 등급의 풀루란입니다.
덱스트런시그마 AldrichD1037MW 500 kDa. 이 소재는 더 이상 Sigma Aldrich에서 생산하지 않습니다. 대안은 카탈로그 번호 31392(Sigma Aldrich)입니다. 이 재료는 PD-IPC 스캐폴드를 만드는 데 사용됩니다.
중탄산나트륨 Sigma AldrichS5761중탄산나트륨은 풀루란-덱스트란 다당류 용액에 천천히 첨가해야 합니다. 중탄산나트륨의 빠른 첨가는 침전을 초래할 것입니다. 
나트륨 트리메타포스페이시그마 알드리치T5508이 화학 물질은 흡습성이므로 제습 캐비닛에 보관해야 합니다. 나트륨 트리메타포스페이트의 수용액은 항상 신선하게 만들어야 합니다.
수산화나트륨Sigma AldrichS5881이 물질은 위험하므로 니트릴 장갑과 같은 적절한 보호 장비로 취급해야 합니다.
키토산시그마 알드리치448877MW 190-310 kDa. 75%에서 85%의 아세틸화 정도. 키토산의 정제는 안정적인 IPC 섬유를 생성하는 데 필요합니다.
아세트산Merck이것은 다른 브랜드 유형으로 대체 될 수 있습니다. 이 물질은 부식성 및 가연성입니다. 흄 후드에서 이 화학물질을 취급할 때는 안면 보호대, 니트릴 장갑, 실험실 코트 및 신발 커버와 같은 보호 장비를 착용해야 합니다. 
갈조류에서 추출한 알긴산 나트륨 염, 저점도시그마 알드리치A2158하룻밤 동안 물에 녹입니다. 멸균 0.2 를 통한 필터; &마이크로; M 사용 전 주사기 필터. 4 °C에 보관하십시오.
둔감한 혈청 알부민Sinopharm 화학 시약메마른 PBS에서 녹이고 0.2 µ를 사용하여 거르십시오; M 사용 전 주사기 필터 
BCA 분석 키트Pierce23225이 키트는 PD-IPC 스캐폴드에서 BSA 방출을 측정하는 데 사용되었습니다. 
인간 재조합 혈관 내피 성장 인자R& D 시스템293-VE성장 인자를 0.2% 헤파린 용액에 용해시켜 최종 농도 5  mg/ml입니다.
그마 AldrichH3393의 헤파린 나트륨 소금이것은 다른 브랜드 유형으로 대체 될 수 있습니다. 헤파린 염을 1%의 최종 농도로 멸균수에 용해시키고 0.2 µ를 통해 여과합니다. M 사용 전 주사기 필터 
인간 배꼽 정맥 내피 세포 (HUVEC)LonzaC2517A이 주요 세포 유형은 PD-IPC 스캐폴드에서 방출된 후 VEGF 생체 활성을 결정하기 위한 분석에 사용되었습니다.
Alamar blueLife TechnologiesDAL1025세포 대사 활동을 측정하는 데 사용됩니다. Alamar blue를 세포와 함께 배양하고 2-4시간 동안 표준 세포 배양 조건을 유지합니다. 570nm에서 흡광도를 측정하여 세포 활성과 상관관계가 있는 Alamar blue 퍼센트 감소를 확인합니다. 
ScanVac Coolsafe LyophilizerLabogene7.001.200.060이것은 -105에서 -110  °C입니다. 이것은 다른 표준 실험실 동결 건조기로 대체될 수 있습니다.
폴리카프로락톤(PCL)시그마 알드리치181609MW 65kDa. 이것은 더 이상 Sigma Aldrich에서 제조하지 않습니다. 이것은 Sigma Aldrich 카탈로그 번호 704105로 대체될 수 있습니다.
디클로로메탄시그마 알드리치V800151이것은 다른 브랜드 유형으로 대체될 수 있습니다. 이 물질은 위험하므로 흄 후드에서 처리해야 합니다. 이 화학 물질을 취급할 때는 항상 보호 장비를 착용해야 합니다.
폴리디메틸실록산(PDMS, 184 실리콘 엘라스토머 키트)다우코닝(240)4019862엘라스토머 키트는 폴리머 베이스와 가교제와 함께 제공됩니다. 폴리머 베이스와 가교제를 다른 비율로 혼합하면 PDMS의 강성이 달라집니다.
인간 재조합 베타 신경 성장 인자 (NGF)R & D 시스템256-GF는 멸균 DI 물에서 최종 농도 100 로 재구성되었습니다. &마이크로; g⁠/⁠ml입니다. 부분 표본 및 -20 °에 저장; C를 사용할 때까지.
인간 중간엽 줄기세포(Human Mesenchymal Stem Cells, hMSC)Cambrex이 세포 유형은 NGF와 나노 지형의 시너지 효과를 결정하기 위한 분석에 사용되었습니다.
쥐 PC12 갈색세포종 세포 ATCC: 이 세포 유형은 NGF의 생체 활성을 측정하기 위해 신경돌기 성장 분석에 사용되었습니다. NGF로 방출 배지에 노출된 후 신경돌기 확장으로 세포 수를 측정하고 총 세포 수로 정규화합니다.
등급 93 여과지WhatmanZ699675이것은 pH 7에서 수산화나트륨과 함께 침전된 후 키토산의 정화에 사용됩니다.
스윙 버킷 원심분리기Eppendorf5810R1,200 x g 속도로 키토산을 정제하는 데 사용됩니다.
일정한 속도로 회전하는 맨드릴이 있는 모터RhymebusRM5E모터는 풀루란 또는 PCL 프레임의 IPC 섬유 제작에 사용됩니다.
인산염 완충 식염수FirstBase여과를 통해 살균(0.2 µ M 필터) 및 오토클레이브. 
직경 10mm 조직 배양 폴리스티렌 접시 (TCPS)GreinerTCPS 접시는 풀루란 프레임의 주조에 사용됩니다.
인간 VEGF ELISA 키트R & D 시스템DVE00ELISA 키트는 이형 매체에서 VEGF를 검출하는 데 사용됩니다.
인간 NGF ELISA 키트R& D 시스템DY256ELISA 키트는 이형 매체에서 NGF를 검출하는 데 사용됩니다.
플라스틱 코팅 접착 테이프Bel-Art9040336접착 테이프는 앨리게이터 클립을 회전 맨드릴에 단단히 접착하는 데 사용됩니다
트 돼지 시

참고문헌

  1. Annabi, N., Tamayol, A., et al. 25th Anniversary Article: Rational design and applications of hydrogels in regenerative medicine. Adv. Mater. 26 (1), 85-124 (2014).
  2. Teo, B. K. K., Tan, G. D. S., Yim, E. K. F. The synergistic effect of nanotopography and sustained dual release of hydrophobic and hydrophilic neurotrophic factors on human mesenchymal stem cell neuronal lineage commitment. Tissue Eng. Part A. 20 (15-16), 2151-2161 (2014).
  3. Lee, K., Silva, E. A., Mooney, D. J. Growth factor delivery-based tissue engineering: general approaches and a review of recent developments. J. R. Soc. Interface. 8 (55), 153-170 (2011).
  4. Sun, Q., Chen, R. R., Shen, Y., Mooney, D. J., Rajagopalan, S., Grossman, P. M. Sustained vascular endothelial growth factor delivery enhances angiogenesis and perfusion in ischemic hind limb. Pharm. Res. 22 (7), 1110-1116 (2005).
  5. Rui, J., Dadsetan, M., et al. Controlled release of vascular endothelial growth factor using poly-lactic-co-glycolic acid microspheres: in vitro characterization and application in polycaprolactone fumarate nerve conduits. Acta Biomater. 8 (2), 511-518 (2012).
  6. King, T. W., Patrick, C. W. Development and in vitro characterization of vascular endothelial growth factor (VEGF)-loaded poly(DL-lactic-co-glycolic acid)/poly(ethylene glycol) microspheres using a solid encapsulation/single emulsion/solvent extraction technique. J. Biomed. Mater. Res. 51 (3), 383-390 (2000).
  7. Cutiongco, M. F. A., Tan, M. H., Ng, M. Y. K., Le Visage, C., Yim, E. K. F. Composite pullulan-dextran polysaccharide scaffold with interfacial polyelectrolyte complexation fibers: A platform with enhanced cell interaction and spatial distribution. Acta Biomater. 10 (10), 4410-4418 (2014).
  8. Yow, S. Z., Quek, C. H., Yim, E. K. F., Lim, C. T., Leong, K. W. Collagen-based fibrous scaffold for spatial organization of encapsulated and seeded human mesenchymal stem cells. Biomaterials. 30 (6), 1133-1142 (2009).
  9. Yim, E. K. F., Wan, A. C. A., Le Visage, C., Liao, I. C., Leong, K. W. Proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cell encapsulated in polyelectrolyte complexation fibrous scaffold. Biomaterials. 27 (36), 6111-6122 (2006).
  10. Liao, I. C., Wan, A. C., Yim, E. K. F., Leong, K. W. Controlled release from fibers of polyelectrolyte complexes. J. Control. Release. 104 (2), 347-358 (2005).
  11. Wan, A. C. A., Liao, I. C., Yim, E. K. F., Leong, K. W. Mechanism of fiber formation by interfacial polyelectrolyte complexation. Macromolecules. 37 (18), 7019-7025 (2004).
  12. Yim, E. K. F., Reano, R., Pang, S., Yee, A., Chen, C., Leong, K. W. Nanopattern-induced changes in morphology and motility of smooth muscle cells. Biomaterials. 26 (26), 5405-5413 (2005).
  13. Sun, H., Xu, F., Guo, D., Yu, H. Preparation and evaluation of NGF-microsphere conduits for regeneration of defective nerves. Neurol. Res. 34 (5), 491-497 (2012).
  14. Simón-Yarza, T., Formiga, F. R., Tamayo, E., Pelacho, B., Prosper, F., Blanco-Prieto, M. J. PEGylated-PLGA microparticles containing VEGF for long term drug delivery. Int. J. Pharm. 440 (1), 13-18 (2013).
  15. Patel, Z. S., Ueda, H., Yamamoto, M., Tabata, Y., Mikos, A. G. In vitro and in vivo release of vascular endothelial growth factor from gelatin microparticles and biodegradable composite scaffolds. Pharm. Res. 25 (10), 2370-2378 (2008).
  16. Sun, H., Xu, F., Guo, D., Liu, G. In vitro evaluation of the effects of various additives and polymers on nerve growth factor microspheres. Drug Dev. Int. Pharm. 40 (4), 452-457 (2014).
  17. Lee, P. I. Kinetics of drug release from hydrogel matrices. J. Control. Release. 2, 277-288 (1985).
  18. Cutiongco, M. F. A., Choo, R. K. T., Shen, N. J. X., Chua, B. M. X., Sju, E., Choo, A. W. L., Le Visage, C., Yim, E. K. F. Composite scaffold of poly(vinyl alcohol) and interfacial polyelectrolyte complexation fibers for controlled biomolecule delivery. Front. Bioeng. Biotechnol. 3 (3), 1-12 (2015).
  19. Yow, S. Z., Lim, T. H., Yim, E. K. F., Lim, C. T., Leong, K. W. A 3D Electroactive Polypyrrole-Collagen Fibrous Scaffold for Tissue Engineering. Polymers. 3 (1), 527-544 (2011).
  20. Leong, M. F., Toh, J. K. C., et al. Patterned prevascularised tissue constructs by assembly of polyelectrolyte hydrogel fibres. Nat. Commun. 4, 2353(2013).
  21. Di Benedetto, F., Biasco, A., Pisignano, D., Cingolani, R. Patterning polyacrylamide hydrogels by soft lithography. Nanotechnology. 16 (5), S165(2005).
  22. Revzin, A., Russell, R. J., et al. Fabrication of poly(ethylene glycol) hydrogel microstructures using photolithography. Langmuir. 17 (18), 5440-5447 (2001).
  23. Yim, E. K. F., Liao, I. C. Tissue compatibility of interfacial polyelectrolyte complexation fibrous scaffold: evaluation of blood compatibility and biocompatibility. Tissue Eng. Part A. 13 (2), 423-433 (2007).
  24. Chaouat, M., Le Visage, C., Autissier, A., Chaubet, F., Letourneur, D. The evaluation of a small-diameter polysaccharide-based arterial graft in rats. Biomaterials. 27, 5546-5553 (2006).
  25. Eshraghi, S., Das, S. Mechanical and microstructural properties of polycaprolactone scaffolds with one-dimensional, two dimensional, and three-dimensional orthogonally oriented porous architectures produced by selective laser sintering. Acta Biomater. 6, 2467-2476 (2010).

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