번역 상 암 연구를위한 인체 조직에 대한 작업

요약

중개 암 연구는 인간 조직 추출에 의존합니다. 체외 분석을 위한 추출 방법을 최적화하기 위해 많은 작업이 진행되었습니다. 여기에서는 제한된 샘플에서 최대한의 데이터 출력을 허용하는 조직 처리 방법에 대해 설명합니다.

초록

인간의 이익을 위한 의학 연구는 인간 조직과 피험자의 필요성에 의해 크게 방해를 받고 있습니다. 그러나 인간 표본에 대한 동의를 얻은 후에는 장기, 조직 및 세포의 무결성을 최고 수준으로 보장하기 위해 귀중한 샘플을 최대한 조심스럽게 다루어야 합니다. 불행히도, 조직 처리는 정의상 숙주에서 조직을 추출해야 하며, 이러한 변화는 큰 세포 스트레스를 유발하고 후속 분석에 큰 영향을 미칠 수 있습니다. 이러한 응력으로 인해 시편이 더 이상 회수된 현장을 대표하지 않게 될 수 있습니다. 따라서 대표성을 보장하기 위해 이러한 표본을 처리하는 동안 엄격한 프로토콜을 준수해야 합니다. 시료 처리에 최적의 기법이 사용되도록 하기 위해 원하는 분석도 고려해야 합니다. 다음은 제한된 조직 샘플에서 다운스트림 생산을 극대화하기 위해 처리된 조직에서 수행할 수 있는 조직 검색, 처리 및 다양한 분석을 위한 프로토콜입니다.

서론

의학 연구는 인간 세포주 및 동물 모델 모두 연구 막대한 이득이다. 세포주 나은 시스템의 구성 요소의 제어뿐만 아니라, 적절한 유기체의 세포의 사용을 허용한다. 세포주는 응답 ^{(1)에 영향을} 미칠 수있는 다른 세포, 기질 구성 요소 및 기관의 영향을 요점을 되풀이하지 않을 수 있기 때문에, 더 대표하면서, 건강과 질병에 대한 책임을 질 수 있습니다 메커니즘을 획기적으로 단순화 된 스냅 샷을 제공, 인간 세포에 대한 작업. 반면에, 동물 모델은 인간의 질병 및 유전 적 이질성 재생 전적으로 정확하지 않지만, 대부분의 모델 동물 ^2,3-에서 전체 시스템의 입력을 허용함으로써 추가 통찰력을 제공.

단점은 제쳐 놓고, 두 방법은 자신의 장점을 가지고 상호 보완 적이다. 그러나, 주요 목표는 전신, 멀티 기관 시스템에서 인간의 세포와 기관, 연구 남아있다. 따라서, 중개 연구는 탁을 가지고더 나은 메커니즘을 기저 질환을 파악하기 위해, 인간의 기관 및 환자에서 추출한 조직의 연구를 촉진 장족의 발전 갖추고 있습니다. 중개 연구함으로써, 몸 전체에서 적절한 세포에서 치료 및 질환의 연구 결과와 동물 세포 일 ⁽⁴⁾ 사이 모두의 장점을 제공하는 이점을 제공한다.

프로토콜

윤리 문 :이 프로토콜은 텍사스 MD 앤더슨 암 센터의 대학에 의해 승인됩니다.

1. 표본 조달

1. 잉여 종양 및 관련 정상 조직 ^10-12에서 연구 조직 샘플을 수집합니다. 젖은 얼음에 보관 검체는자가 분해를 방지 할 수 있습니다.
2. 병리학 적 진단을 용이하게하기 위해 모든 조직, 의료 기기 및 필요한 검사에 대한 병리학 부서 수술 중 제거 이물질을 보냅니다.
3. 적용 할 수있는 연구 조직 은행의 정책 및 절차에 따라 연구에 할당 된 조직을 처리합니다.
   참고 : Biospecimen 컬렉션 병리학의 조정을 포함, 병리학 '조수, histotechnologists 및 조직 조달 전문가.

2. 병리학 품질 보증 (QA)

1. 완료하고 초기 품질 보증 조치로 환자 기록을 확인하고 진단 PA를 검토 병리학에 문의tient 레코드 (병리학 리포트, 조직 슬라이드 등) 및 조직 샘플. 등이 biorepository 모범 사례 ^10-12에 따른다 등 종양의 비율, 괴사, 조직 종양 인터페이스, 같은 관심의 형태 학적 특성에 대한 판사의 조직 샘플.
2. 초기 검토 후, biospecimen의 숙....

결과

아래에 표시된 결과는 처리 흑색 종 종양에 대한 광범위한 면역 표현형 유동 세포 계측법 게이팅 전략을 도시한다. 염색의 날, 조직 샘플은 225 RPM의 회전하에 37 ℃에서, 소화 I 콜라게나 제 및 60 분간의 DNase I 인큐베이션 균질화 하였다. 소화 후, 세포 현탁액은 파편을 제거하기 위해 70 μm의 세포 여과기를 통해 여과하고, 세포를 면역 세포 계측법 표현형에 대한 항체의 형광 표지 된 흐름으로 염색 하였다. MACS 버퍼에 4 ° C에서 조직 저장 O / N에서 여러 마커 게이팅 전략과 염색 (그림 3) 아래에 표시됨. 도시 된 바와 같이, 4 ° C에서 MACS 버퍼에 설명 저장 O / N로 처리 표본 극히 제한 사망률을 보여줍니다. 또한,이 도면은 전술 한 바와 같이 그 처리 조직 흑색 종 종양 면역 세포 서브 세트의 다색 광범위한 표현형 허용 보여준다.

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토론

궁극적으로, 처리의 방법은 원하는 가설에 의해 결정 (그림 1)을 수행 할 기술적 분석을 예상해야합니다. 다음 섹션에서는 조직 섹션에서 수행 할 수있는 잠재적 인 분석을 설명하는 개요 역할을한다. 그것은 결코 완전한 개요를 의미하지만, 기술을 설명하고 자신의 강점과 약점을 나열하여 가이드 샘플 처리 방법 및 다운 스트림 분석의 선택에 도움을주기위한 것입니다으로하지 않습니다.

착색 유동 세포 계측법은 갓 해부 조직 절편을 수행 될 수 있고, 또는 그의 단편을 4 ℃에서 MACS 완충액 O / N을 기억. 계측법 고도로 특이 표현형과 조직 샘플에서 추출 된 세포 집단의 분석을 용이하게하고, 하나의 셀에서 최대 17 세포 표면 마커 및 세포 내 단백질, 사이토 카인 및 단백질의 염색을 가능 흐른다. 더욱이, 특정 세포 계측기는 localizat를 결정하기 위해, 단일 세포 배율을 허용세포 내에서 단백질의 이온보다는 전적으로 양성 및 신호 강도. 마지막.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
바늘	BD	305167
스테인레스 스틸 일회용 메스	Miltex	4-410
조직 배양 접시	Corning	353003
생검 카세트	Thermo Fisher	58931
RNA 안정화 솔루션	Ambion	AM7021
1.5 ml Eppendorf 튜브	Phoenix	MAX-815
50ml 튜브	Corning	430290
10% 중성 완충 포르말린	StatLab Medical Products	28600-5
포르말린 용기	Fisher Scientific	23-032-059
최적 절단 온도 솔루션(OCT)	Sakura Finetek	4583
Tissue-Tek Cryomold	Sakura Finetek	4557
Dnase i	Roche	10104159001
콜라겐 분해 효소 I	Roche	11088793001
70μ m 세포 스트레이너	BD Bioscience	352350
96 웰 라운드 바닥 플레이트	Corning	3799
Live/Dead 염색 용액	Life Technologies	L34957