방법 논문

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

DOI:

10.3791/53196

⸱

2015년 11월 20일

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, University of New Mexico, 2Department of Neurosciences, University of New Mexico, 3Department of Neurosurgery, Boston Children's Hospital, 4Department of Neurology, Harvard Medical School

이 논문에서

요약

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Encephalopathy of prematurity는 조산으로 인한 손상과 관련된 중추 신경계 이상을 포함합니다. 이 보고서는 융모막염을 모방한 자궁 내 일시적인 전신 저산소증-허혈 및 양수 내 지질다당류 투여(LPS)에 대한 임상적으로 관련된 쥐 모델, 그리고 감염 자극 및 태반 관류 부족이 CNS 발달에 미치는 관련 영향을 설명합니다.

초록

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미숙아 뇌증 (나서도 EoP)이 가장 좋은 사전 번역 목표에. 조산과 관련된 이상이 중추 신경계 (CNS)를 포괄하는 용어이며, 조산과 관련된 뇌 손상에 대한 새로운 치료 전략을 발견, 나서도 EoP의 전임상 모델은 유사한 메커니즘을 포함해야 산전 글로벌 부상으로 인간의 관찰과 모성 - 태반 - 태아 시스템의 여러 구성 요소를 포함한다. 이상적으로, 모델은 성숙 동물에 기능 적자의 비슷한 스펙트럼을 생산하고 병태 생리의 여러 측면을 요점을 되풀이한다. 초기 조산의 병원체에 의한 염증과 관련된 인간의 전신 태반 관류 결함, 태반 underperfusion 및 / 또는 융 모양 막염을 모방하기 위해, 우리는 내 양수 리포 폴리 사카 라이드 (LPS)과 결합 산전 일시적인 전신 저산소증 - 허혈 (TSHI)의 모델을 개발했다. 임신 스프 라그 돌리 쥐에서, TSHI 자궁 동맥 폐색 O를 통해N 배아 일 18 (E18)는 태아에 CNS 손상 증가와 연관된 그레이딩 태반 underperfusion 결함을 유도한다. 내 양수 LPS 주사와 결합하면 태반 염증이 증가하고, 중추 신경계 손상은 관련 백질, 보행 및 이미징 이상으로 복잡해집니다. 태아 TSHI 및 TSHI + LPS 산전 모욕은 신경 세포, 희소 돌기 아교 세포와 축삭, 서브 플레이트의 손실, 매우 태어난 아이들에서 관찰 된 것과 모방 성인 동물의 기능 적자의 손실을 일으키는 원인이되는 자궁 모욕을 recapitulating 포함 있어서는 Eop 모델의 기준을 몇 가지 충족 조기. 또한,이 모델은 발산 부상 유형에 의해 유도 된 염증의 해부 수 있습니다.

서론

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37주 추정 재태 연령 1 일 이전에 미국에서 태어난 신생아의 12 % 이상, 미숙아에서 주 산기 뇌 손상 (PBI)는 영구 장애의 중요한 원인이다. PBI는 미숙아에서 미숙아도 되나 뇌증 (나서도 EoP)는 전체 중추 신경계 (CNS)에 영향을줍니다. 중추 신경계 손상은 종종 자궁에서 시작하고, 융 모양 막염 및 저산소증과 패혈증과 같은 산후 합병증을 포함하여 출산 과정에 의해 악화된다. 전신 모욕에서 PBI는 신경 발달을 변경하고 감정 조절, 메모리 및 집행 기능 1, 2에 영향을 미치는 뇌성 ​​마비, 간질,인지 지연과 수많은 신경 정신 장애로 이어집니다. 많은 진전이 이루어지고 있지만, 제한된 이해는 조산에서 중추 신경계 손상의 세포 및 분자 결과가 조기를 태어나는 아이들의 신경 학적 후유증의 무리로 변환하는 방법으로 남아있다. 지식 뒷다리의 부족실시간 CNS 부상 심각도의 진단 및 신흥 개입의 정보를 투여 ERS. 또한이 취약한 환자 인구 연령에 적합한 치료 전략이 애매 남아있다.

자궁 내 염증은 극단적 인 미숙아에서 매우 일반적인 3 복잡한 태아 - 모체 - 태반 염증 폭포를 포함한다. 자궁 내 감염은 흔히 무증상이다. 급성 염증, 또는 조직 학적 융 모....

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프로토콜

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시설 보호 및 사용위원회 모두 보스턴 아동 병원에서 뉴 멕시코 건강 과학 센터의 대학은 모든 실험 절차를 승인했다.

참고 : 이전 절차, 인감을 시작으로, 살균 및 모든 수술기구 및 수술 커튼 압력솥. 또한, 0.125 %의 bipivucaine 0.1 ㎎ / ㎏ 부 프레 노르 핀을 포함하여 멸균 유리 병에서 수술 후 약물을 준비합니다. 또한 무균 리포 폴리 사카 라이드 (LPS) 용액을 제조 : 0.04 ㎎ / ㎖ LPS (0111 : B4) 에반의 파란색 색소를 희석 포함 멸균 식염수에 있습니다.

1. 마취

  1. 3 % 이소 플루 란 평형 70 %, 질소 30 %와 산소의 혼합물로 배아 일 18 (E18) 임신 한 스프 라그 돌리 래트에 마취를 유도한다.
  2. 유도 챔버에서 쥐를 제거하고 37 ℃로 설정 드리 워진 수술 순환 담요에 쥐 부정사를 놓습니다. 코 콘에 마취를 전송하고 isoflura을 감소2 % NE 수준.
  3. 부드럽게 각막 건조를 방지하기 위해 각각의 눈에 안과 연고를 적용합니다. 절차 중에 연속적으로 온도, 호흡 속도 및 동물의 심박수를 모니터링. 모자 생리는 절차 전반에 걸쳐 안정적으로 유지해야합니다.

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결과

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E18에서 TSHI + LPS에 이어, 헤 마톡 실린과 에오신 염색 중요한 병리학 태반 둘 이상 (도 1) 및 뇌 (도 2)을 보여준다. E19과 E21에 검사의 태반은 탈락과 미로에 걸쳐 미세 출혈 및 괴사와 심하게 부종이다. 중요한 염증성 침윤 및 증가 된 혈관도 관찰된다. (P2)에 조사 뇌는 뇌실 공개뿐만 아니라 흰색 물질과 서브 플레이트 신경 세포의 손실은 가짜에 비해. 이전에, 우리는 TSHI + LPS 염증을 유발하고 지속 백질 및 젊은 성인 (20)에 상당한 모터 손상과 동반 축삭 이상을 얻을 수 있다고보고있다. TSHI + LPS도 크게 염화칼륨 공동 수송에게 P15의 피질 2 (KCC2) 단백질 발현, γ - 아미노 산의 개발 (GABA) ergic 억제 중심 염화 공동 수송, (그림 3을 감소 강한>, * P <0.05). 이러한 데이터는 회로 성숙 중요한 산후 기간 동안 KCC2의 발육.......

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토론

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미숙아 뇌증 때문에 부상의 메커니즘을 중복 병인, 신경 발달 시간 코스, 인간의 뇌 네트워크 형성의 복잡함의 복잡한 상호 작용의 동물 모델 어렵고, CNS의 다양한 표현형은 인간의 미숙아에서 명백한 모욕. 나서도 EoP는 특정 세포 형 취약점과 관련된 (즉, 미성숙 희소 돌기 아교 세포) (21)뿐만 아니라 다양한 발달 조절 경로 (즉, 서브 플레이트, 막 수송과 수용체 서브 유닛) 12,13,22. 동물 모델은 가능한 한 근접 사람의 상태를 복제 그러나 상당한 진전이 가능하다. 여기, 우리는 모델을 회색과 흰색 물질의 손상 및 복구 모두의 사후 평가를 허용, 미숙아에서 관찰 중추 신경계 손상의 메커니즘의 이질성을 통합하는 태아 모욕을 개발했다. 인간에 ​​상승 세균 감염은 양막과 강수을 약화세포막의 테 조기 파열. 또한, 태반 관류 결함이 태반 인터페이스를 강조하고 태반 항상성을 방해. 따라서, 태반 underperfusion는 자궁 내 감염 CNS 부상.......

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공개 사항

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저자가 공개하는 게 없다.

감사의 글

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저자 댄 Firl, 크리스 코베트 및 제시 DENSON, 박사 과정에 감사드립니다. 자금 조달이 SR에 NIH NINDS R01 NS060765에 의해 제공되었다, LJ에 P30 코 브레 파일럿 프로그램 및 뉴 멕시코 대학의 LJ에 아동 건강 서명 프로그램.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
식염수, 0.9%SigmaS8776
LPS 011B4SigmaL2630
Evan's Blue DyeSigmaE2129
수술용 장갑Biogel40870
또는 수건Cardinal Health287000-008멸균
PDI 알코올 준비 패드Fisherbrand06-669-62
미니 Arco 충전식 가위Kent Scientific Corp.CL8787
Betadine 외과 수술 용 스크럽퍼듀 제품 LP67618-151-17
눈 윤활제리프레시 라크리 윤활유00023-0312
무딘 집게Roboz RS-8100
가위RobozRS-6808
수술용 가위RobozRS-5880
수술용 가위FS14002-16
주사기BD3096281ml
바늘BD30512225G 5/8
바늘BD30512830G 1
면 팁 애플리케이터Fisherbrand23-400-114소형, 6인치 멸균
면 거즈 스폰지Fisherbrand22-362-178
바늘 홀더Kent 사이언티픽 코퍼레이션INS60010912.5CM STR
용기 클립Kent Scientific Corp.INS60012030G 압력
3-0 Perma Hand Silk SuturesEthicon1684GBlack braided, 3-0 (2 metric), 18", 비흡수성,  PS-1 24mm 바늘, 3/8 서클
인슐린 주사기BD3284380.3cc 3mm 31G
펜토바르비탈
부프레노르핀
부피바카인
이소플루란
탄산리튬아크로스 화학 물질554-13-2
Superfrost Plus 현미경 슬라이드VWR48311-703
HematoxylinLeica3801521Surgipath Gill II Hematoxylin
EosinLeica3801601Surgipath Eosin
XylenesFisherbrandX3S-4조직학 등급
PermountFisherbrandSP15-100
커버 글라스Fisherbrand12-548-5PFisher Finest 프리미엄 커버글라스

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Blencowe, H., et al. Preterm birth associated neurodevelopmental impairment estimates at regional and global levels for 2010. Pediatr Res. 74, Suppl 1. 17-34 (2013).
  2. Mwaniki, M. K., Atieno, M., Lawn, J. E., Newton, C. R.

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태그

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