축삭 변성과 백질 신경 생물학의 연구를위한 다목적 쥐 모델 피질의 흰색 물질 스트로크

요약

여기에서는 비가역적 내피 산화질소 합성효소(eNOS) 억제제(L-Nio)의 국소 주입에 의해 쥐 백질에서 초점 스트로크를 생성하는 방법론을 제시합니다. 제시된 것은 두 가지 정위 변형, 역행 신경 세포 추적, 그리고 이 기술의 잠재적 응용을 확장하는 새로운 조직 라벨링 및 해부입니다.

초록

뇌졸중 임상 스트로크 프리젠 테이션의 최대 25 %를 백질 계정에 영향을주지는 5 ~ 10 배 더 클 수있다 속도에서 자동으로 발생하고 혈관성 치매의 발전에 크게 기여하고있다. 초점 백질 행정의 몇 가지 모델이 존재하고 적절한 모델이 부족 뇌졸중 이러한 유형의 후 부상 응답 및 수리에 관련된 neurobiologic 메커니즘의 이해를 방해하고있다. 다른 피질 뇌졸중 모델의 주요 제한은 국소 적 백질에 경색을 제한하지 않거나 주로 비 뮤린 종 검증되었다는 것이다. 이것은 백질 행정 신경 생물학을 연구 쥐 연구 도구의 다양한 적용 할 수있는 능력을 제한한다. 여기에서 우리는 돌이킬 수없는 eNOS의 억제제의 지방 주입을 사용하여 쥐의 흰색 문제에 초점 뇌졸중의 안정적인 생산을위한 방법론을 제시한다. 우리는 또한이 독특한 정위를 포함하는 일반적인 프로토콜에 몇 가지 변화를 제시변화, 크게이 기술의 응용 가능성을 확장 역행의 연결을 추적뿐만 아니라 신선한 조직 라벨 및 해부. 여러 방법이 뇌졸중이 일반적이고 파악 하였다 형태의 neurobiologic 효과를 분석하는 이러한 변화 할 수 있습니다.

서론

피질하 백질에 영향을 미치는 뇌졸중은 흔한 임상 실체로, 미국에서 매년 임상 뇌졸중의 최대 25%를 차지합니다 ¹. 백질에 대한 허혈성 손상은 또한 상당히 높은 비율로 조용히 발생하며 혈관성 치매의 발병에 기여합니다 ^2,3. 현재 이러한 형태의 뇌허혈을 앓고 있는 환자들은 치료법이 거의 없습니다. 이 질병의 임상적 중요성에도 불구하고, 임상적으로 타당한 동물 모델은 거의 존재하지 않는다 ^4,5.

이 프로토콜의 목표는 쥐 백질 내에서 국소 허혈성 병변을 생성하는 것입니다. 이 인간 질병의 쥐 모델을 통해 뇌졸중에 대한 축삭 손상 반응과 백질의 세포 요소, 즉 축삭돌기아교세포와 성상세포가 축삭돌기에 어떻게 반응하고 뇌졸중 후 복구되는지에 대한 구체적인 연구를 할 수 있습니다.

이전 보고서에서는 여기에 설명된 것과 유사한 엔도텔린-1(ET-1) ⁶을 사용하여 피질하 백질 뇌졸중 모델을 설명했습니다. 실험 프로토콜에 대한 몇 가지 주요 변경 사항이 이루어졌으므로 이 모델의 잠재적 용도가 확장되었습니다 ^7,8. 이 프로토콜은 마우스 뇌 백질 내에서 초점 스트로크를 생성하기 위한 신뢰할 수 있고 수정 가능....

프로토콜

이 프로토콜에서 동물의 사용은 캘리포니아 로스 앤젤레스의 동물 보호 및 사용위원회의 대학 승인 절차에 따라 수행되었다.

참고 : 대상 쥐 인구를 식별하여 시작합니다. 이전 연구에서 유일한 수컷 야생형 C57 / BL6 마우스는 다양하지만 유전자 또는 녹아웃 마우스는 또한 사용될 수 있으며, 사용되어왔다. 정위 좌표가 C57 / BL6 해부학을 기반으로합니다. 각 사용자가 처음에 흰색 문제에 스트로크의 현지화를 확인하는 것이 좋습니다.

1. 흰색 물질 스트로크 유도 - 내측 각도 접근

1. 선단 직경이 15 내지 25 ㎛의 ⁽¹¹⁾ 사이가되도록 0.5 mm 모세관을 이용하여 뽑아 유리 피펫을 제조함으로써 시작한다.
2. 멸균 0.9 % 생리 식염수에 27.4 ㎎ / ㎖ (130 μM)에서 - L-니오의 멸균 10 μL 나누어지는 ((1) -iminoethyl-L - 오르니 틴 염산 N (5))를 준비합니다.
3. 인출 된 유리 피펫을 사전 작성유리 피펫을 부착하여 L-니오 (2-5 μL)의 작은 부피를 진공 라인에 접속 튜빙. 벤치 위에 피펫 평면을 배치하고, L-니오 용액에 끌어 끝을 삽입합니다.
   1. 피펫의 0.5 m....

결과

제시된 모델을 사용하여, 백질 기본 앞다리 감각 피질 확실 타겟팅 될 수있다. 일반적으로 인간의 열공 경색에서 알 수 있듯이이 화학적으로 유도 된 뇌졸중 모델은 초점 축삭과 수초 손실, astrocytosis 및 microgliosis (그림 1)을 생성한다. 세 주사를 이용하여 임상 적으로 유용한 모델 앞다리 모터 태스크 ^7에 이른 장애 및 뇌 조직 경험 작지만 상당한 부분 확립 면역 조직 화학, 면역 형광 및 생화학 기술이 양적 레벨에서 가능하고 신뢰할 수 있다는 허혈. 뇌졸중 유도 후 이른 시점 (HR)에서 축삭 분자 조직 변경 (도 2)을 검출 할 수있다. 칠일에서, 스트로크는 축삭 손실 (그림 1a)의 외접 영역의 성숙을 완료합니다. 우리의 손,이 방법은 초점 백질 병변 approxima을 생산tely 800 μm의 수평 직경과 뇌량의 전후방 축 방향.......

토론

피질 행정 이전 모델 번호 ^12-14 래트 및 마우스에서 내부 ^-6,15- 캡슐에 엔도 텔린 -1의 국소 주입, 피질 및 선조체 백질 포함 설명되었다. 작은 초점 스트로크의 최근 모델은 콜레스테롤 microemboli의 경동맥 ^(16)에 주입 한 번의 침투 세동맥 ^(17)의 photothrombotic 폐쇄를 활용하고있다. 이러한 모델은 각각 장단점 ^5를 모두 갖는다. 현재 기술 모델은 축삭 이상 손실, 수초 저하, 초점 괴사 코어와 최소이며, ⁷ 세에 따라 상당히 빠른 회복을 보여 임상 적자를 포함하여 인간의 열공 경색을 모방 특성을 가지고 있습니다 병변을 생산하고 있습니다. 쥐의 흰색 물질을 표적으로하는 것은 기계적인 연구를 지원할 수있는 유전자 조작의 다양한 있습니다.

임계프로토콜의 단계에서는 정확한 정위 좌표를 이용 포함한다. 쥐의 흰색 물질의 크기가 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
L-N5-(1-이미노에틸)오르니틴, 디하이드로클로라이드	Calbiochem	400600-20MG
이소플루란	피닉스 제약, Inc.	NDC 57319-559-06
모세관	세계 정밀 기기	50-821-807
Picospritzer	Parker 계측	Picospritzer II
입체 설정	Kent Scientific	KSC51725
피펫 풀러	KOPF	모델 720
실체 현미경 SZ51	Olympus	88-124
파인 가위	파인 사이언티픽 툴	14084-08
포셉스	하버드 장치	PY2 72-8547
곡선 포위	하버드 장치	PY2 72-8598
무딘 해부 도구	파인 사이언티픽 툴	10066-15
드릴	드레멜	8220-1/28
드릴 비트	파인 과학 도구	19007-05
Vetbond	3M	1469SB
Marcaine	HOSPIRA	NDC 0409-1610-50
Trimethoprim-Sulfamethaxole	STI 약국	NDC 54879-007-16
Fluororuby	Fluorochrome Inc	30 mg
파라포름알데히드	Fisher	O4042-500
자당	Fisher	BP220-10
저온 유지 장치	Leica CM3050 S
유리 슬라이드	Fisher	12-544-7
Fast Green	Sigma	F7252-5G
해부 현미경	Nikon	SMZ1500
23G 나비 바늘	Fisher	14-840-35
10x Hank's Balanced Salt Solution	Life Technologies	14065056
1M HEPES-KOH, pH 7.4	Affymetrix	16924
D-Glucose	Sigma	G8270
중탄산 나트륨	시그마	S5761
시클로 헥사 미드	시그마	01810

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