Method Article

작은 오염 물질의 면역 학적 분석을위한 물 샘플의 자동화 된 고체상 추출을위한 간단한 방법

DOI:

10.3791/53438

⸱

January 1st, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centre Suisse d'Electronique et de Microtechnique, 2Department of Chemistry and Applied Biosciences, ETH Zurich, 3Department of Information Technology and Electrical Engineering, ETH Zurich

In This Article

Summary

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자동화되고 소형화된 시스템을 사용하여 물 샘플에서 에스트라디올을 추출하고 사전 농축하기 위한 프로토콜이 제시됩니다.

Abstract

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환경 물 샘플의 고체 상 추출 (SPE)을위한 새로운 방법을 제안한다. 개발 된 프로토 타입은 비용 효율적이고 사용자 친화적이며, 신속한 자동화 및 간단한 SPE을 수행 할 수 있습니다. 예비 농축액 낮은 유기 용매 함량, 면역 측정법에 의한 분석과 호환 가능하다. 방법은 100 mL의 물을 샘플에 천연 호르몬 17β-에스트라 디올의 추출 및 미리 농도를 설명한다. 역상 SPE는 옥타 - 실리카 흡착제로 수행되고 용출 메탄올 50 % V / V를 200 μL로 이루어집니다. 용출액은 메탄올의 양을 낮추는 디 물을 첨가하여 희석한다. 수동 SPE 칼럼을 준비한 후, 전체 절차는 1 시간 이내에 자동으로 수행된다. 프로세스의 끝에서, 에스트라 디올 농도 상업용 효소 결합 면역 흡착제 분석법 (ELISA)을 이용하여 측정된다. 100 배 사전 농도를 달성하고 10 %의 V / V에서 메탄올 내용. 분자의 전체 복구1 NG로 달성된다 / L은 드 이온화 및 합성 해수 샘플을 아군.

Introduction

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샘플은 분석 준비 과정에서 중요한 단계이다. 특히, 매트릭스 효과, 간섭의 감소, 및 분석 물의 농축 제거하여 정확한 결과를 획득하고 검출 하한에 도달하는 데 필요한. 내분비 방해 화합물 (EDCs)은 인해 생물에 대한 자신의 행동에 특별한 관심의 경우에도 환경에서 현재 매우 낮은 수준. 천연 호르몬 17β-에스트라 디올은 유럽 물 기본 지침에 의해 규제되는 우선 순위 물질 목록에 추가 할 수있는 유럽 연합 (EU)의 수질 오염 감시 목록에 현재와 경향이있다. 고체 상 추출 (SPE)는 일반적으로 화학 양 1-5 (크로마토 그래피, 질량 분광 분석) 6-9 및 면역 학적 검출 방법으로, 작은 물 오염 물질의 분석에 적용된다. 후자는 면역이 형식의 대형 다양한에서 사용할 수있는 TA에 고유 한, 환경 모니터링 분야에 대한 관심을 얻었다피검 rget 및 검출 하한에 도달한다. 6, 7, 10, 11, 각종 효소 결합 면역 분석법 (ELISA)은 시판되고 멀티 웰 플레이트에 한 번에 여러 개의 시료를 분석 가능하게한다. 절차는 몇 시간이 걸릴 수있는 연속 반응 단계에있다. 반응의 최종 생성물은 검량선에 기초하여 상기 표적 분자의 농도를 결정하기 위해 광학적으로 검출 할 수있다.

고전 S....

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Protocol

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참고 : 다음 프로토콜은 SPE가 50 % v / V를 메탄올로 C18 흡착제 및 용출 100 ml의 물 샘플에서 수행에 대해 설명합니다. 농축 샘플 (ELISA) 키트를 분석 면역 연결 효소 분석하기 전에 10 % v / V를 메탄올에 도달하기 위해 희석한다.

1. 시약 준비

  1. 물 샘플을 준비
    1. 이전의 임의의 다른 단계에, 0.2 ㎛의 공극 크기의 필터를 각각 100 ml의 물 샘플을 필터링.
    2. 물의 부피 기준으로 용액의 적절한 용적을 희석하여 목적하는 농도를 갖는 샘플 스파이크. 예를 들어, 300 μg의 / L의 농도에서 E2 참조 용액 3.3 μL 희석 E2 100 겨 / L의 물 샘플을 100㎖를 준비한다. 샘플 10 NG / L (E2)와 아군 얻기 위해이 솔루션을 10 번을 희석. 1 NG / L E2와 100 ㎖의 샘플을 얻기 위해 후자의 또 다른 열 배 희석.
    3. G와 유리 병 (수정되지 않은 또는 아군) 필터 샘플을 배치L45 스레드. 같은 날 샘플을 사용합니다. 작은 부분을 가지고하는 초기 농도를 추정하기 위해 ELISA로 분석된다.
  2. 타이트한 튜브에 50 % v / V를 탈 이온화 (디) 물에 메탄올을 희석하여 리제 300....

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Results

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흡착재 충전부의 재현성이 건조에 의해 평가하고 유리 바이알에 피펫 흡착제 가중치 및 초기 및 사전에도 2. 농도로 나타낸 바와 같이 결과는, 100 mL의 시료에 대해 시험 하였다 주입시의도 1. 재현성에 도시 된 농축 된 샘플은 17β-에스트라위한 상용 ELISA 키트를 사용하여 측정하고,도 3에 도시되어 아군.

제안 된 방법은 흡착제의 제조 단계 (도 1)의 사용자를 포함한다. 흡착제 입자를 기계적 안정성 개의 막 사이에 유지되는 조밀 열의 피펫 팅하면서 현탁액을 주사기로 가해지는 압력에 의해 포장된다. 그 결과 열은이 값에 6 % 오차 선택 흡착제의 6 mg을 최적화 된 금액이 포함되어 있습니다. 이 단계는 또한 작용흡착제 조절로서, .......

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Discussion

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면역 분석을 사용하여 분석 하였다 물 샘플의 제조를위한 새로운 방법이 제안되었다. 악기가 자동 사용자 친화적 방식으로 고체상 추출을 수행 할 수있다.

종래의 시스템에 주입 물 샘플의 여과는 매우 중요하다. 용액에 존재하는 임의의 미립자는 여전히 잠재적으로 유체 망의 막힘을 일으키고 SPE 칼럼을 방해한다. 다른 중요한 단계는 SPE 칼럼의 제조이다. 열에있는 입자의 양이 최상의 성능을 달성하기 위해 중요하다. 입자의 응집을 방지하기 위해, 흡수제 입자의 현탁액을 제조하는 경우에 특별한주의를 기울여야한다. 이는 디 물 분획을 건조 흡착제에 제 용매 분획을 첨가 한 다음에 의해 달성된다. 이어서, 포장 공정 중에, 상기 피펫 100 μl를 잘 흡입하면서 현탁액을 혼합하는 것이 중요하다. SPE 프로의 끝에서시저, 제대로 시스템을 청소하는 것은 매우 중요하다. 다른 샘플로 작업 할 때 첫째, 교차 오염을 방지하고, 사용하지 않을 때, 둘째로는 악기의 생물 오염의 위험을 피할 수있다.......

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Disclosures

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저자는 공개할 것이 없습니다.

Acknowledgements

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이 작업은 보조금 계약 번호 265721에 따라 유럽 연합 7차 프레임워크 프로그램 FP7/2007-2013의 자금 지원을 받았습니다. 저자는 이 프로젝트에 대한 RIKILT Institute for Food Safety(NL)의 지원에 감사드립니다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
필터 멤브레인 0.2 μ m 기공 크기Merck MilliporeGNWP04700샘플 여과 용
나일론 멤브레인 11 μ m pore sizeMerck MilliporeNY1104700SPE 컬럼용
일회용 생검 펀치 5 mm의료 예산39302439
Nucleodur C18 ec Macherey Nagel713550.0150 &뮤; m 입자 직경
합성 해수Sigma AldrichSSWS500-500ML
메탄올VWR
17beta-estradiol 표준Enzo Life Science300 ng/ml
17beta-estradiol ELISA 키트Enzo Life ScienceADI-900-00896 웰, 범위 30 - 3,000 ng/L

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water. J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).
  2. Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E.

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Solid Phase ExtractionAutomated SPEWater Sample AnalysisImmunoassay CompatibilityEstradiol DetectionOctadecyl Silica SorbentMethanol ElutionELISA AnalysisEnvironmental MonitoringPollutant Pre concentration

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