여기에서는 분리 성능 향상을 위해 CF(Curtain flow) 모드에서 AFT(Active Flow Technology) 컬럼의 작동 및 최적화를 위한 프로토콜을 제시합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
Active Flow Technology(AFT)는 특별히 제작된 멀티포트 엔드 피팅을 사용하여 HPLC 컬럼의 분리 성능을 향상시키는 컬럼 기술의 한 형태입니다. 커튼 흐름(CF) 컬럼은 AFT 컬럼 제품군에 속하며, 특히 CF 컬럼은 샘플이 베드의 방사형 중앙 영역에 주입되고 용질 주입을 둘러싼 이동상의 커튼 흐름이 샘플이 벽으로 방사형 분산되는 것을 방지하도록 설계되었습니다. 컬럼은 '무한 직경' 컬럼으로 기능합니다. 이 설계의 목적은 컬럼 베드의 방사형 이질성을 극복하는 동시에 컬럼 베드의 방사형 중앙 영역으로의 샘플 부하를 최대화하여 검출 감도를 높이는 것입니다. 여기에 설명된 프로토콜은 최적화된 무한 직경 '가상' 컬럼에 대한 시스템 및 CF 컬럼 설정과 튜닝 프로세스를 간략하게 설명합니다.
서론
최근에는 고속 액체 크로마토 그래피 (HPLC) 컬럼을위한 기술이 크게 발전하고있다; 최대 용량은 주로 작은 입자 크기를 사용하고,보다 효율적으로 코어 쉘 입자 상당히 확실히 증가하고있다. 분리는 일반적으로 더 효율적이기 때문에 피크가 지금 선명하고 1-8 따라서 키가 있기 때문에, 플로우에 대한 효과는 감도가 증가하고있다.
그럼에도 불구하고, 방사 층 얼룩이 모든 컬럼의 성능에 제한 요소가 여전히 있지만, 이것은 크로마토 그래피 수년이 알려진 이후 새로운 스토리 아니다. 열 침대 반경 방향 9-12 모두에서 이질적이며, 10,12-15 축 열을 따라. 벽 효과, 특히 분리 성능 7,16-18 손실에 중요한 공헌자이다. Shalliker와 리치 7 최근에 열 침대 이질성의 측면을 검토하고, 따라서이 discusse 할 필요는 없다D 여기에 추가. 충분할 말하고 있지만, 열 베드 패킹 밀도의 변동과 벽 효과 밴드 부분적 스프 충전과 유사한 플러그의 컬럼을 통해 용출되도록 용질 플러그의 왜곡을 초래할 오히려있는 얇은 평평한 고체 디스크 7보다 그릇 일반적으로 기본 교육 텍스트에 묘사. 실험 베드를 통하여 용질 이동이 가시화 될....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
주의 : (메탄올에 대한, 즉 MSDS)를 사용하기 전에 모든 재료 및 시약에 대한 물질 안전 보건 자료 (MSDS)를 참조하십시오. 용매 및 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC) 용리액을 처리 할 때 모든 적절한 안전 관행의 사용을 확인합니다. HPLC, 분석 균형과 검출기 장비의 공학적 통제의 적절한 사용을 보장하고, 개인 보호 장비 (안전 안경, 장갑, 실험실 코트, 전체 길이 바지와 폐쇄 발가락 신발)의 사용을 보장합니다.
참고 :이 프로토콜은 UV-마주 검출기와 결합 된 HPLC 시스템에 CF 열을 사용하는 방법에 대한 지침이 포함되어 있습니다. 프로토콜은 독자를 가정하는 크로마토 그래피의 기본 지식과 경험을 가지고 작성되었습니다.
HPLC 기기의 1. 설치
참고 : 용매의 선택, 검출기 파장이 섹션 즉 애널리스트의 요구를 맞게 변경 될 수 유량이관심있는 샘플에 적합하다.
- 이동상으로 라인 B의 라인 A에 대한 100 % 초순수와 HPLC 기기 (예를 들면, 밀리 Q 물) 100 % 메탄올을 준비하고 제조업체의 요구 사항에 따라 펌프를 제거. ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
AFT 열은 열 상 이성을 극복하고 분리 성능을 향상시키기 위해 멀티 컬럼 엔드 피팅 전문 프릿 디자인 (도 1)를 사용하여 개발되었다. CF 크로마토 그래피 컬럼 (그림 2)의 분리 성능에 간 실험실 연구는이 프로토콜 (23)의 3 절에 설명 된대로 (그림 3B)를 설정 이중 펌프 시스템을 실시 하였다. 세 컴포넌트 테스트 혼합물은 CF 열의 중앙 출구 흐름의 21 %가 검출기에 관한 한 '가상'2.1 mm ID를 통해 하에서 분석 하였다. 세 컴포넌트 테스트 혼합물의 분리는 표준 열로 CF 칼럼 상대 효율 및 감도의 측면에서 개선 된 성능을 나타낸다. 세 가지 구성 요소 테스트 혼합물 페 네톨, 부틸 벤젠 및 펜틸을 포함하고 기존의 4.6 및 2.1 mm ID 컬럼과 4.6 분석 하였다 22:78 (중앙 : 주변)의 분할 비율 mm.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
본 연구는 효율 및 감도의 측면에서 분석 성능을 테스트하기 위해 CF 크로마토 그래피 컬럼 간 실험실 분석을 포함했다. 3 '섹션에 설명 된대로 CF 열은 이중 펌핑 시스템으로 설정했다. (: 주변 센터)가 CF 컬럼의 입구에 이중 펌프 시스템은 40:60의 흐름 비율을 달성하기 위해 '설정합니다. 40:60 (중앙 말초) 유량의 비율은 각각 40 % 및 총 유량의 60 %를 나타내는 값으로, 각 펌프의 유량을 설정하여 수행 하였다. CF 컬럼 출구 "절에 설명 된 절차에 따라 2.1 mm의 ID와 '가상'항목에 동조 4-. CF 배출 유량 조정 '. 페 네톨, 부틸 벤젠 및 펜틸을 포함하는 시료 액 4.6 mm 아이디 CF 컬럼 (22:78) 및 종래의 4.6 및 2.1 mm의 ID 컬럼 사이의 분리 성능 비교 시험 표준으로 사용 하였다.도 4은 chromatograp의 오버레이이다테스트 혼합물의 HIC 분리는 세 개의 열 각각을 사용하여 수행. 이 .......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
이 작업은 UWS와 ThermoFisher Scientific의 지원을 받았습니다.
감사의 글
저자 중 한 명(DK)이 Australian Postgraduate Award 수상을 인정합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| HPLC 기기 | |||
| 2 펌프 CF 시스템 설정을 사용하는 경우 | 추가 펌프 | ||
| 커튼 플로우 HPLC 컬럼 | Thermo Fisher Scientific | 정의되지 않음 | 곧 상업화 |
| 예정 메탄올 | 모든 브랜드 | HPLC 등급 | |
| PEEK 튜빙 | 모든 브랜드 | 다양한 길이와 내경 | |
| PEEK 튜브 절단기 | 모든 브랜드 | ||
| 분석 저울 저울 모든 | 브랜드 | ||
| 스톱워치 | 모든 브랜드 | ||
| 용리액 수집 용기 | 모든 브랜드 | 1-2ml 샘플 바이알을 용리액 수집 용기로 사용할 수 있습니다. | |
| T-piece | 모든 브랜드 |
참고문헌
- Camenzuli, M., et al. The use of parallel segmented outlet flow columns for enhanced mass spectral sensitivity at high chromatographic flow rates. Rapid Commun. Mass Sp. 26 (8), 943-949 (2012).
- Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
