이 프로토콜은 시판중인 물질과 광 반응 형 리포좀 집적 금 나노 입자에 대한 간단한 제조 방법을 설명하는데 이용된다. 또한, 펄스 레이저의 치료에 합성 리포좀 마이크로 버블 공동화 과정을 측정하는 방법을 보여준다.
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방법 논문
펄스 레이저인가 전압에 따라 금 나노 입자 통합 사진 응답 리포좀과 그들의 마이크로 버블 공동 현상의 측정의 합성
이 논문에서
요약
초록
광반응성 나노입자(NP)는 약물 방출에 대한 공간적, 시간적, 투여량 조절을 제공할 수 있는 잠재력 때문에 상당한 주목을 받았습니다. 그러나 대부분의 관련 기술은 아직 개발 과정에 있으며 클리닉에서 조달할 수 없습니다. 여기에서는 시판되는 금 NP와 열 반응성 리포좀을 사용하여 이러한 광 반응성 NP를 쉽게 제작하는 방법을 설명합니다. Calcein은 열/광 자극에 대한 캡슐화 효율과 방출 역학 프로파일을 평가하기 위한 모델 약물로 사용됩니다. 마지막으로, 우리는 이 광으로 유발된 방출이 수중청음기로 측정할 수 있는 미세 기포 캐비테이션으로 인한 막 파괴로 인한 것임을 보여줍니다.
서론
가능성은 극대화 특이 최소한의 부작용과, 공간 - temporal- 및 투여 량 조절 패션에 약물을 전달하는 매력적인 방법을 외부 자극이다 사용하여 약물 방출을 유발합니다. 외인성 자극 - 반응 시스템 (빛, 자기장, 초음파, 마이크로파 방사선)의 넓은 범위 중, 빛 트리거 플랫폼은 병원에서의 비 침습, 단순성 및 적응성에 의해, 매력적이다. 지난 10 년 1 광범위한 연구 그러나 이러한 근적외선 광 책임 금 플랫폼 기술의 다양성을 제공하고있다 (호주) nanocages 스마트 중합체 코팅, 약물 3 및 자기 조립 porphysome의 nanovesicles와 접합이 포토 - 불안정성 중합체 나노 입자 (NP에). (4) 이러한 기술 개발의 전임상 단계에서 정지하고, 개시하고 계속 과정에 관련된 파라미터들의 명확한 이해 및 최적화를 필요약물 방출 롤링.
이러한 시스템의 제조를위한 단순하고 용이하게 접근 방법 중 하나는 시장에서 널리 이용되고 광범위 전임상과 임상 실험에도 조사 된 둘 열 민감성 리포좀 5,6-과 금 NPS를 통합하는 것이다. 작은 동물이나 인간의 국소 전달을 위해 사용하는 경우 근적외선 활성화 금 나노 구조 (예를 들어....
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프로토콜
1. 준비
- 100 ㎖ 둥근 면도 왕수 (농질산 1 부 (HNO 3), 농축 염산 (HCL) 3 부) 및 DI 물로 씻어 플라스크를 이용하여 바닥 플라스크. 플라스크를 오토 클레이브에서 15 분 동안 100 ℃에서 열풍 오븐에서 건조한다. 싸서 사용할 때까지 무균 플라스크를 저장합니다.
- 70 % 에탄올을 사용하는 휴대용 소형 압출기 세트 소독.
- 회전 증발기를 켜고 각각 37 ° C 4 ° C의 온수 욕조와 냉각탑의 온도를 설정합니다.
- 10 ml의 0.1 mm의 인산염 완충 생리 식염수 (PBS) (PH 7.4)에 칼 세인의 374 mg을 용해하여 원액을 칼 세인 60 밀리미터를 준비합니다. 1 M 수산화 나트륨 (NaOH) 용액을 사용하여 7.4의 pH를 조정한다.
리포좀 2. 합성
- 지질을 제거 (1,2- Dipalmitoyl- SN -glycero -3- 포스 포 콜린 (DPPC), 1- 팔미 토일 -2- 하이드 록시 SN -glycero -3- phosphocho라인 (MPPC) 및 1,2- distearoyl- SN -glycero -3- phosphoethanol ....
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결과
10 : 4 또는 7.95 : 리포좀 86 몰비 DPPC, MPPC 및 DSPE-PEG2000과 종래의 박막 수화 기술을 사용하여 제조 된 0.65 :. 1.39 ㎎ / ㎖ (12)의 Au NP에의 크기는 광을 결정하는 것이 중요 다음 레이저 여기 실험 기간 동안의 변환 효율을 가열. 금 NP에의 작은 크기, 더 높은 13 따라서 5 nm의 금 NP에 공급 업체에서 가장 작은 샘플, 캡슐화를 위해 선택되었다. 열 변환 효율이다. 합성 중에 수화 금 NPS를 함유 배지 및 칼 세인이어서 자유 금 및 NP에 칼 세인을 제거 사이즈 압출 및 겔 여과 크로마토 그래피를 실시 하였다 멀티 라멜라 소포를 생성시켰다.
칼 세인이 친수성 형광 염료는 60 mM의 농도로 리포좀의 수성 코어 내에 캡슐화된다. C의 높은 농도에서, 형광.......
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토론
박막 수화 리포좀을 제조하는 통상적 인 방법이다. 유기 용매 (여기에서는 클로로포름) 제 플라스크에 지질 박막을 생성하기 위해 37 ℃에서 회전 증발기에서 지질을 용해하는 데 사용하고 제거 하였다. 이 지질 막을 60 mM의 칼 세인 5 nm의 금 NPS를 함유하는 수용액으로 수화 하였다. 수화 과정 동안, 온도는 50 ° C의 주위를 유지하고, 플라스크를 지속적 플라스크를 회전시켜 교반 하였다. 이 단계에서의 핵심은 증발과 수분이 각각 수행 하였다되는 온도의 선택입니다. DPPC, 리포솜의 주성분의 상 전이 온도 (T m)는 41 ° C이다. 지질의 형성 필름을 생각하는 동안, 온도는 건조 된 지질의 응집 덩어리의 형성을 방지하기 위해 41 ℃ 이하이어야한다. 수화 동안 T 분보다 더 높은 온도에 인지질을 구동하기 위해 선택되었다구형 다중 층 구조로 자기 조립. 박막 수화 방법을 수행하기 쉽지만, 이것은 수용액 또는 Au NP에 칼 세인의 불량한 캡슐화 효율 (<1 %)에 의해 제.......
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공개 사항
관심 없음 충돌이 선언되지 않습니다.
감사의 글
이 작품은 부분적으로 교육 싱가포르 교육부 (CX에 RG 12분의 64)과 나노 의학의 NTU - 노스 웨스턴 대학에서 1 등급 학술 연구 기금에 의해 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DPPC) | Avanti Polar Lipids (Alabama, US) | 850355P | 분말, -20°C에서 보관; C |
| 1-팔미토일-2-하이드록시-sn-글리세로-3-포스포콜린(MPPC) | Avanti 극성 지질(앨라배마, 미국) | 855675P | 분말, -20°C에서 보관; C |
| 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanol-amine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (암모늄 염) (DSPE-PEG2000) | Avanti Polar Lipids (Alabama, US) | 880120P | 분말, -20°C에서 보관; C |
| 금 나노 입자 | 시그마 알드리치 | 752568-100mL | 5 nm 입자, 0.1 에서 안정화됨; mM PBS |
| 칼세인 | 시그마 알드리치 | C0875-10g | 60 mM, pH 7.4 (NaOH를 사용하여 조정) |
| 인산염 완충 식염수 (PBS) | Sigma Aldrich | P5493 | 0.1 mM, pH 7.4 |
| 이중 증류수 | Millipore Milli-DI 정수 시스템 | ||
| Triton X100 | Sigma, Life Sciences | X-100 | 계산하기 위해 리포좀을 파괴하려면 |
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| , 1,000 μ l | Avanti Polar Lipids (Alabama, US) | 610017 | 의 압출에 사용 |
| , 200 nm | Whatmann | 800281 | 리포솜 필터 |
| 지원 | Avanti Polar Lipids (Alabama, US) | 610014 | 리포솜 PD |
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| 하이드로폰 | ONDA | HNR-1000 | 1 mm 직경 및 450 nV/Pa 감도에 사용, 적절한 작동 주파수 범위: 0.25-10 메가헤르츠; 캘리브레이션: 50 mV/바; 음향 신호를 측정하는 데 사용됩니다 |
| Digital Osciloscope | LECORY - Wave Runner 64Xi-A | 주파수: 600 MHz; 최대 샘플 속도: 10 Gs/sec(2개 채널에서); 측정된 음향 신호를 기록하는 데 사용됩니다. |
참고문헌
- McCoy, C. P., et al. Triggered drug delivery from biomaterials. Expert Opin. Drug Deliv. 7 (5), 605-616 (2010).
- Yavuz, M. S., et al. Gold nanocages covered by smart polymers for controlled release with near-infrared light. Nat. Mater. 8
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재인쇄 및 허가
