1차 해마 뉴런의 저밀도 배양은 일반적으로 신경 영양 인자를 공급하고 수명을 유지하기 위해 신경교 공급층을 필요로 합니다. 여기에서는 고밀도 뉴런 공급층(neuronal feeder layer)이 있는 곳에서 유리 커버슬립에서 초저밀도 뉴런을 배양하는 단순화된 방법을 설명하며, 이는 특정 뉴런 자율 메커니즘의 연구를 용이하게 합니다.
방법 논문
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Neurobasal 매체 | Life Technologies | 21103-049 | 빛으로부터 보호 |
| B27 보충제 | Life Technologies | 17504-044 | 분주액, 0.6ml 크기에 보관 |
| GlutaMAX-I | Life Technologies | 35050-061 | 희석 100X |
| 항생제-항진균제 (AA) | Life Technologies | 15240-096 | 희석 100X |
| 완전한 배양 배지 | 1X B27, 1X AA, 1X GlutaMAX-I | ||
| Wash 매체 | 'Neurobasal 배지'와 동일 | ||
| 공급 매체 | Neurobasal 1X B27 보충제 | ||
| DNAse I | Sigma-Aldrich | D5025 | MW에서 100X 재고 준비 |
| 70000-150000 | |||
| 붕산염 완충액 | Sigma-Aldrich | B6768 (붕산); 71997 (붕사) | 1.24g 붕산 및 1.9g 붕사 400ml H2O, pH 8.5 HCl |
| 12mm 원형 유리 커버 슬립 | Glasswarenfabrik Karl Hecht GmbH | 1001/12 | No. 1 유리, Carolina Biological Supply |
| proFection transfection kit | Promega | E1200 | 자세한 |
| 내용은 프로토콜 참조2X HEPES 완충 식염수 (HBS) | Promega | E1200 | 세부 사항 프로토콜 참조 |
| 주사기 필터 | Pall Corporation | 4192 | 0.2um 기공 크기 |
| Endofree 플라스미드 준비 키트 | Qiagen | 12362 | transfection 등급 플라스미드 DNA |
| anti-MAP2 항체 | Millipore | MAB3418 | 마우스 항체, 클론 AP20 |
| anti-p-Tau 항체 | Millipore | AB10417 | 토끼 다클론 항체 |
| 항-NR1 항체 | Millipore | MAB1586 | 마우스 항체, 클론 R1JHL |
| 항-GluR1 항체 | Millipore | AB1504 | 토끼 다클론 항체 |
| Hank's balanced salt solution | ThermoFisher | 14025092 | 500ml 크기 |
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