인 - 더 - 필드 응용 프로그램에 대한 설계 및 앱 타머 - 금 나노 입자 기반 비색 분석법 개발

요약

인 - 필드 응용을위한 작은 분자 검출하는 앱 타머 - 금 나노 입자의 비색 분석의 디자인 및 개발 평가 하였다. 또한, 스마트 디바이스 측색 프로그램 (APP)이 유효하고, 분석의 장기 보존이 분야에 사용하기 위해 설립되었다.

초록

인 - 필드 응용을위한 작은 분자 검출하는 앱 타머 - 금 나노 입자 (AuNP) 비색 분석의 디자인 및 개발 평가 하였다. 대상 선택 AuNP 기반 컬러 세이 제어 개념 증명 실험 설정에서 개발되었다. 그러나 이러한 방식들은 실험실 설정 이후 실용화를 결정하는 고장 지점으로 작용하지 않았다. 이 작품은 작은 분자 분석 및 인 - 더 - 필드 설​​정에 대한 분석을 사용하는 앱 타머-AuNP 비색 분석을 설계, 개발 및 문제를 해결하는 일반적인 방법을 설명합니다. 흡착 된 압 타머의 나노 입자 표면에 패시베이션 및 줄이고 비 표적 분석을 거짓 양성 반응을 제거하기위한 수단을 제공하기 때문에 분석은 이점이있다. 실질적인 사용이 시스템은 앱 타머-AuNP 에세이뿐만 아니라 유통 기한을 한정해야 천이하지만 장기 저장 capabil를 확장하기위한 방법 및 절차를 확립ities. 또한, 측색 판독으로 인식 된 문제들 중 하나를 정확하게 컬러의 미묘한 변화를 자주 확인하는 분석의 부담이다. 필드 분석에 대한 부담을 완화하기 위해, 컬러 분석 프로토콜은 실험실 수준의 장비에 이러한 작업을 수행 할 필요없이 컬러 식별 임무를 수행하도록 설계되었다. 데이터 분석 프로토콜을 작성하고 테스트하는 방법을 설명한다. 그러나 이해 흡착 앱 타머 세이의 설계에 영향을, 상호 작용은 앱 타머 대상과 연관 AuNPs 더욱 연구를 필요로한다. 얻은 지식은 개선 된 기능을 앱 타머를 맞게 발생할 수 있습니다.

서론

색채는 분석 화학에서 사용되는 가장 오래된 기술 중 하나입니다. 이 기술의 경우, 분석 물의 정 성적 또는 정량적 판정 착색 화합물 ^1의 제조에 기초하여 이루어진다. 통상적으로, 컬러 분석은 가시광 스펙트럼에서 관찰 또는 검출 가능한 색상 변화를 초래 분석 종의 존재하에, 컬러 시프트가 발생 시약을 사용한다. 측색 그러한 디옥시리보 산 (DNA), 펩타이드 및 단백질 ^2-4 복잡한 생물학적 분자 원자, 이온 및 소분자 이르기 타겟의 검출에 사용되었다. 지난 수십 년 동안, 나노 물질, 특히 색상 기반 분석 ^5-6으로 검출 분석의 분야에 혁명을했다. 항체, 올리고 뉴클레오티드 앱 타머 또는 펩티드 앱 타머 등의 표적 선택적 인식 요소와 나노 물질의 독특한 화학적, 물리적 특성을 결합하여 부활하게되었다 난설계 및 발색 검출법 ^(7)의 발전 N.

금속 나노 입자는 다수의 비색 분석의 설계에 이용 된 증명 사이즈 - 의존 색 변화 특성을 갖는다. 금 나노 입자 (AuNPs)이 때문에 입자의 분산 솔루션은 일반적으로 소금의 정확한 추가하여, ⁸ 집계 유도하는 특유의 붉은 - 투 - 파랑 색상 변화에 특히 관심이다. 응집 된 (청색) 상태로 분산 된 (적색)의 전환을 제어하는 기능은 이온, 작은 분자, 펩티드, 단백질 발색 센서, 세포 표적 ^2-4,9 생성하게되었다. 이러한 센서의 대부분은 대상 인식 모티브로 앱 타머를 사용합니다.

압타 머는 10 ⁽¹²⁾ -10 ⁽¹⁵⁾ 다른 시퀀스 ^10-11의 임의의 풀에서 선택 DNA 또는 리보 핵산 (RNA) 분자이다. 상기 선택 프로세스는 타겟 재를 식별인지의 낮은 나노 몰 정권에 결합 친 화성을 ​​가진 요소, 지수 농축 (SELEX)에 의해 리간드의 체계적인 발전은 가장 일반적으로 알려진 과정 ^{12 ~ 13입니다.} 센싱 애플리케이션을위한 올리고 뉴클레오티드를 기반으로 앱 타머의 장점은 합성의 용이성, 제어 화학 수정 및 화학적 안정성 ^{14-15을 포함한다.}

비색 분석을 만드는 한 가지 방법은, 인식 요소 나노 결합 AuNP 표면에 DNA-앱 타머 분자의 물리적 흡착을 통해 두 종과 함께 구성된다. 목표 압 타머 바인딩을 통해, 앱 타머은 염의 첨가 유도 적색 대 청색 반응 ^(19)에 이르는 AuNP 표면 앱 타머와의 상호 작용을 변화시키는 구조 ^변화가 발생 ^16-18. AuNPs 이러한 놀라운 특징은 해제하는 데 사용할 수있는 앱 타머 기반 장치에 대한 관찰 비색 반응 메커니즘을 제공한다다른 분석을위한 비색 분석에 서명.

AuNP 표면에 비 - 공유, 물리적으로 흡착 된 DNA 앱 타머를 사용하여 디자인 색상 분석으로 인해 안정성, 제어 실험실 설정 이외의 실패에 대한 성향 및 실제에 사용 가능한 정보의 부족 문제에 약한 센서 플랫폼이라는 오명을 설정. 그러나, 압 타머 AuNP - 기반 비색 분석법 때문에 운전 및 관찰 색 반응의 간략화 관심이었다. 이 연구의 목적은 분석 물로 대표 코카인하여 DNA-AuNP 기반 비색 분석법의 설계, 개발, 조작면의 환원과 관련된 거짓 양성 반응 및 장기간 저장을위한 프로토콜을 제공하는 것이다. 또한, 우리는 때문에이 앱 타머-AuNP 엉덩이에 대한 기존의 접근 방식보다 적은 단계의 결과 사용의 간편성과 용이성에 유리한 것으로이 흡착 된 앱 타머 분석 방법 (그림 1) 제안AYS. 이 분석의 경우, 앱 타머 먼저 장시간 표면에 흡착 할 수 있었다 AuNPs에 첨가 하였다. 이 방법의 추가 장점은 AuNP 표면의 상호 작용에 관련된 비 표적 분석 물 분자에 응답하여 감소되었다. 그러나, 거짓 양성 반응의 감소 분석 민감도의 희생되었다. 따라서 표면 보호 분석 접근성 간의 균형은 적절한 분석 기능을 유지하는 것이 필요하다. 또한, 통해 컬러 분석을 분석의 주요 결함은 색상의 미묘한 차이를 구별하기 위해 노력하고 특히 계측 결과는 종종 주관적이고 분석 - 투 - 애널리스트의 해석에 열려있는 것입니다보다 다른 것을 의미한다. 반대로, 그러한 작품 등에 전력 가용성, 이동성과 실용성으로 실험실 외부 가능한 실험 계측 계를 만드는 문제의 개수가, 컬러 분석 프로토콜을 위해 개발 된 MOR전자 이동성과 일반적으로 색상 기반 분석 해석 ^{20 ~ 21과} 관련된 추측의 일부를 제거하기. 이전 방식에 비해, 이러한 노력은 실험실 설정 이외의 응용 프로그램에 대한 자신의 한계에 이러한 분석을 밀어 노력.

프로토콜

구연산 금 나노 입자의 감소 (AuNP) 및 특성화를 통해 1. 합성

1. 5 ml의 삼각 플라스크 (500 mL) 및 큰 교반 막대를 청소 질산을 농축시키고 15 ml의 화학적 안전성 후드에서 진한 염산.
   1. 산 세척과 플라스크의 전체 표면을 젖은, 뉴 클레아 무료 물 플라스크를 씻어하고, 플라스크를 건조 할 수 있습니다.
2. 1 mM의 금 (III) 클로라이드 100 ml의 추가; 비등까지 핫 플레이트에서 연속 교반하면서 산 세정 삼각 플라스크 가열의 상단을 덮는 알루미늄 호일 시트를 사용한다.
3. 38.8 mM의 시트르산 나트륨의 10 ML을 추가합니다. 색상은 몇 분에 걸쳐 어두운 / 블루 블랙, 그리고 마지막으로 어두운 빨간색으로 취소 / 회색으로 변경됩니다. 10 분 동안 더위와 오프 교반을 계속합니다.
4. AuNP 현탁액을 실온으로 냉각 연속 교반하면서 디 에틸 피로 카보 (DEPC)의 110 μl를 추가 할 수 있습니다.
5. 와 전체 플라스크를 커버알루미늄 호일은 DEPC 처리 하룻밤 배양 할 수 있습니다. 황색 저장 용기에서 어두운 AuNPs 모두를 저장하거나 알루미늄 호일로 덮여있다.
6. 실온까지 냉각 될 AuNP 현탁액을 오토 클레이브하고, 0.22 ㎛의 세공 셀룰로스 아세테이트 멤브레인 필터를 통해. 4 ℃에서 어둠 속에서 여과 멸균 AuNP 원액을 저장합니다.
   참고 : DEPC로 처리, 4 ° C에서 오토 클레이브를 통해 살균 및 저장은 압 타머 - AuNP 분석의 저장 수명을 향상시킬 수 있습니다. 이와 같이 스토리지 2 개월 이상에 대한 기능 유지 분석을 허용 할 것이다.
7. 520 nm의 자외선 - 가시 흡수를 획득하여 AuNP 농도를 계산하고, 농도 (C)를 ​​계산하여 흡광 계수 (ɛ) 2.4 × 10 ⁸ L 몰 ^-1 cm ^-1 맥주의 법칙을 사용합니다. 농도는 동적 광 산란에 의해 결정 15 nm의 크기가 10 nm 인 것으로 측정되었다.
   참고 : 농도는 FR 달라집니다톰 배치 별. 원하는 10 nM의 AuNP 서스펜션을 유지하기 위해 필요에 따라 클레아 무료로 물을 AuNP의 주식을 희석.

2. DNA-앱 타머, 버퍼, 솔루션 및 분석 준비

1. 구입 또는 표준 포스 화학 ^(22)를 사용하여 앱 타머 서열을 결합 다음과 코카인의 합성 :
   MN4 ¹⁹ : 5'-GGC GAC AAG GAA AAT CCT TCA ACG AAG TGG GTC GCC-3 '
   MN6 ¹⁹ : 5'-GAC AAG GAA AAT CCT TCA ATG AAG TGG GTC-3 '
2. 표준 탈염 ^(23)를 사용하여 앱 타머를 정화. 100 μM 또는 1 mM의 재고 솔루션 중 하나에 뉴 클레아없는 물에 올리고 뉴클레오티드를 복원합니다. 몇 개월 동안 -20 ° C에서 나누어지는 및 저장.
3. 구매 또는 멸균 1 M 4- (2- 히드 록시 에틸) -1- 피페 라진 에탄 술폰산 (HEPES) pH가 7.4 주식 제조, 100 mM의 염화 마그네슘 (의 MgCl _2), 1 M 염화나트륨.
4. 클레아없는 물 위스콘신에서 버퍼의 50 ㎖를 준비개월간 실온 번째하는 20 mM HEPES, 2 mM의의 MgCl _2, pH 7.4의 농도 및 저장.
5. 실온에서 3 ~ 4 시간에 대한 재고 AuNP 용액 (10 ㎚)으로 DNA를 품어와 빛으로부터 보호합니다. 테스트가 (2.5-7.5 ml)로 수행 할 수있는 충분한 샘플을 제공하기 위해 원하는대로 AuNPs의 용적을 변화한다.
   1. 여기,이 연구에서 90, 120, 150, 180 DNA 분자 / AuNP의 적재 밀도를 사용합니다. 볼륨 이에 따라 DNA의 농도를 변화한다. 조정 비 표적 분석의 의도 AuNP 표면 관련된 색 반응을 줄이기 위해 DNA 커버리지.
      참고 : DNA의 범위를 증가 시키면 분석 감도를 줄일 수 있습니다. 로딩 밀도는 AuNP 스톡의 농도를 알고있는 실험에서 사용하기 위해 요구되는 양으로 존재 AuNPs의 총 수를 계산하는 단계에서 계산된다. 실제 적용 밀도가 요구되는 경우, 프로토콜은 이러한 값 ^7을 얻었다 존재한다. DNA의 범위가 50 kDa의 m을 사용하여 측정 하였다olecular 무게 차단 스핀 열은 무료 DNA에서 AuNP 결합 된 DNA를 분리합니다. 무료 DNA 쉽게 통과 할 동안 AuNPs는, 스핀 컬럼을 통과하기에 너무 큽니다. 다음 단계는 흡광도 측정 또는 단일 가닥 DNA의 형광 염료를 사용하여 수집 자유 DNA를 정량화하는 것이다.
6. 20 mM의 HEPES, 2 밀리미터의 MgCl _2, pH 7.4의 버퍼의 동일한 볼륨을 추가하고 어두운 하룻밤에 4 ° C에서 샘플을 배치합니다. 앱타 머는-AuNP 분석은 10 mM의 HEPES, 1 ㎜의 MgCl _2, pH가 7.4 (분석 완충액)에 있었다.

3. 소금 적정 및 분석 설정

1. 상기 분석 빈 염 적정에 의해 분석 색 반응을 유도하는 데 필요한 초기 염 농도를 결정한다. 96 웰 플레이트에 앱 타머-AuNP 분석 180 ㎕를 분취 액에 메탄올 (빈)의 20 μl를 추가합니다. 당량점 재고 NaCl 용액 (1 M 2 M)의 부피가 증가함에 따라 샘플을 적정하고 결정 (도 2 참고 : 분석이 동일한 앱 타머-AuNP 분석에 빈 메탄올 (또는 용해 분석)의 비율을 유지하여 작은 볼륨을 확장 할 수 있습니다.
   1. 여기서, 육안으로 조금 색 변화를 야기하는데 필요한 염화나트륨 볼륨을 결정한다. 분석의 시작 농도는 60 DNA 분자 / AuNP 범위의 밀도로 각각 밀리미터 및 MN4 130 밀리미터 및 MN6 (75)이었다.
      주 : 초기 염 농도에 대한 정량 결정, 적정 곡선의 중간 점은 좋은 출발점으로 기능한다. 또한, 사용 농도는 매일 매일의 성능 및 배치 별에서 앱 타머, DNA 범위의 밀도에 따라 달라집니다.
2. 분석 반응을 최적화 상온에서 96 웰 플레이트에 앱 타머-AuNP 분석을 180 ㎕의 분취 액을 메탄올로 희석하여 분석 물 분자의 20 μL를 추가한다. 즉시 분석 색 반응을 개시하기 이전 단계에서 결정된 염화나트륨 농도를 추가한다.
   아니TE는 : 동시에 여러 실험을 수행하는 멀티 채널 피펫을 활용합니다.
3. 증가 또는 염화나트륨 농도를 감소 블랭크 응답 타겟 응답을 비교하여 가능한 한 최대의 색 변화를 얻었다. 가장 큰 응답의 차이를 제공하는 염화나트륨 농도를 사용합니다.
4. 관찰 또는 염화나트륨 또한 다음과 같은 분석 응답 150 초를 측정한다. 분광 광도계를 사용하여 650 nm 내지 53​​0 nm에서의 흡광도를 분석하거나 분석 응답 (사진 분석 프로토콜의 섹션 4 참조)의 디지털 카메라의 사진을 얻었다.
   주 : 마이크로 플레이트 판독기 작품에 대한 측정치를 획득 하였다.
5. 분석 물 농도의 함수로서 650 nm 내지 530 nm의 (E ₆₅₀ / E _(530))에서 얻어진 흡광도의 비율로 결과를 플롯. 이 연구에서 수행 된 같은 빈 신호 분석 응답을 정상화.

4. 사진과 디지털 이미지 색 분석 프로토콜 분석

1. 위해 준비 할설명 (섹션 3.2-3.3)로 분석 샘플을 전자. transilluminator가의 96 웰 플레이트를 놓습니다.
   주 : 표준 실험실 transilluminator가 일반적이 분석을 위해 사용할 수있는 디지털 이미지를 얻을 너무 밝습니다. 이 transilluminators 정기적으로 인해 광원의 세기에 디지털 이미지에 표시 "어두운 라인"간격의 원인이됩니다. 발광 다이오드 (LED) 기반 광 박스에서 transilluminator가 제작 불투명 플라스틱 조각이 잘 작동한다.
2. 수학 식 1 내지 ^24에 도시 된 바와 같이, 증분 평균화 기술을 사용하여, NaCl을 첨가 한 후 150 초에서 96 웰 플레이트의 사진을 구하는 영상 분석 소프트웨어로 이미지를 반입하고, 보통, 적색, 녹색 및 청색 (RGB) 값을 계산한다 :
   (1)
3. 하기 식 ^(24)을 사용하여 표준 RGB (의 sRGB) 색 공간에서 색도도 (CIExyY) 색 공간을 RGB 값으로 변환 :
   (2)
   (삼)
   (4)
4. 수학 식 2 수학 식 3에 규정 된 행렬을 이용하여 선형 RGB 값을 지수 RGB 값을 변환하는 CIE 색 공간 ^(24)의 X, Y 및 Z 값을 계산하기 위해 사용된다.
5. 분석 ^(24)에 대해 선택된 영역의 화소의 평균 색을 나타내는 수학 식 4를 이용하여 x 및 y 색도 값을 계산한다.
6. 모든 웰에서 분석을 수행하고, 검정 곡선 (도 4)을 생성하기 위해 색도 값을 플롯. 동일한 웰의 다른 영역의 색을 분석하여 표준 오차를 구합니다.

장기 저장을위한 앱 타머-AuNP 분석 냉동 (5)

1. 섹션 2.4 및 2.5에 설명 된 앱 타머-AuNP 분석 성분을 준비. 한제 솔루션을 만들기 위해 클레아없는 물 1 g / ㎖ 트레 할로 오스 1 g / ml의 자당을 포함하는 별도의 솔루션을합니다.
   주 : 트레 할로 오스 수크로오스 고농도의 동결에 대한 분석을 준비 할 때, 희석 비율을 감소시키기 위해 사용되었다. 철저하게 사용하기 전에 설탕을 용해 물을 비이커에 뜨거운 접시에 설탕 솔루션을 가열.
2. 19.2 ㎎ / ㎖ 트레 할로 오스 1.5 ml의 마이크로 원심 튜브에 200 μL의 최종 부피의 60 MN4-DNA / AuNP 분석으로 4.8 ㎎ / ㎖ 자당을 포함하는 솔루션을합니다. 최종 한제 솔루션 농도는 DNA 범위에 따라 달라집니다.
   참고 : 샘플 300 μl를 초과 할 수 없습니다 냉동한다. 큰 볼륨이 제대로 고정되지 않을 수 있습니다.
3. 플래시는 -146 ° C의 냉동고 나 액체 질소를 이용하여 샘​​플을 동결. 사용할 때까지 냉동 샘플을 저장합니다. 스토리지는 -80 ° C에있을 수 있습니다 또는 -20 ° 동결이 완료되면 깜박 한 번 C.
4. 이 작업을 위해, 이상 -146 ° C 형 냉장고에 샘플을두고박하고 장기 저장에 대해 -20 ℃ 냉동고에 옮긴다.
   참고 : 플래시 동결은 압 타머 - AuNPs 집계 될 수 있습니다. 흡광도 프로파일을 모니터링하고, 고정 된 샘플과 비교하여 냉동 프로세스의 무결성을 테스트. 응집이 관찰되는 경우,이 문제를 보상하기 위해 냉각제 용액의 양을 증가시킨다.
5. 실온에서 샘플을 해동하고 실험에 대해서만 충분한 샘플을 필요를 사용한다. 해동 샘플의 흡광도 스펙트럼을 구하는와 고정 된 한제 솔루션 처리 샘플의 기준 스펙트럼을 비교합니다. 400 nm 내지 700 nm의 흡광도를 측정한다.
6. 분석 (3.2)을 테스트, 소금 적정 (3.1)을 수행하고, 이전에 설명 된대로 결과 (섹션 3.3 및 3.4) 플롯.

결과

이 연구의 주요 목적은 개발 분야에 사용하기 위해 AuNP 비색 분석을 기반으로 안정성과 앱 타머의 견고성을 알아보고자 하였다. 이전 책에서 강조 표시된 바와 같이, 분석을 만들기위한 두 가지 전략 ^(7)을 조사 하였다. 분석법은 무료 앱 타머 분석 및 흡착 앱 타머 분석을 명명했다. 흡착 압 타머 분석은 fieldable 검출법 (도 1)의 목적을 위해 더 매력적이다.

. 앱 타머 흡착 분석법도 1 개략도 앱타 머는는 AuNPs와 혼합하고, 밤새 인큐베이션 하였다; 메탄올에 용해 된 분석 물 분자는 즉시 대상 추가시 AuNP 응집을 유...

토론

지난 10 년간, 나노 입자 기반 비색 분석법은 표적의 검출을 위해 개발 된 소형 분자, DNA, 단백질, 세포 ^{2-4을 포함한다.} 나노 입자와 DNA-앱 타머를 사용하여 분석은 관심을 얻고있다. 일반적으로 이러한 비색 분석법 AuNPs ^9-10에 첨가하여 분석 물 분자와 DNA 앱 타머 - 혼합함으로써 수행된다. 그러나 이러한 분석은 제어 실험실 설정 개념 증명 시연과 제한된 선택 컨트롤과 함께 사용되어왔다. 최근 발전은 필드에이 기술이 ^{7되었습니다} 전환합니다. 이 방식에서, AuNP에 흡착 된 DNA 앱 타머-는 분석 분자의 첨가에 앞서 (도 1)를 시험 할 표면. 어느 앱 타머 - 금 나노 입자 기반 비색 분석법의 개발 제조 / 분석 프로세스의 다양한 단계에서의 최적화를 필요로한다. 디스크에 따라서, 그 새로운ipline는 정제 및 분석 방법의 문제를 해결하는 것은 성공하기와 관련된 미묘한 차이를 알고 있어야합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
염화금(III) 하이드레이트	시그마	254169	99.999%의 순도가 중요하며, 매번 신선하게 정액을 만들었습니다
시트레이트 이하이드레이트 나트륨	시그마	W302600-1KG-K	제조사가 AuNP 분석에 큰 영향을 미치며, 용액은 매번 신선하게 만들어졌습니다
시너지	바이오-TEK	HT	어떤 흡광도 분광기도 작동하지만, 플레이트리더는 다중 샘플 분석을 제공합니다
4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-에탄설폰산(HEPES) 완충제, 1  M, 불임 수술	암레스코	J848	멸균된 브랜드라면 어떤 브랜드든 괜찮아요
코닝, 250ml 필터 시스템, 0.22 & nbsp; µ M 셀룰로오스 아세테이트	어부	430767	AuNP를 제거하는 다른 막들도 발견되었습니다
UV 분광광도계	바리안	캐리 300번과 nbsp;	어떤 흡광도 분광기든 작동합니다
염화마그네슘 육수화물	플루카	63068	≥ 98% 어떤 브랜드든 잘 맞아요
DNA	IDT	관습	DNA는 탈염 기둥으로 정제되었으며, 더 높은 정제 기법도 사용할 수 있습니다
프로카인 하이드로클로라이드	아크로스	AC20731-1000	메탄올 1mg/ml 비축량의 99%가 준비되었습니다
염산	어부	A144S-500	다른 브랜드를 사용하면 36.5-38.0% 정도면 잘 작동합니다
코카인 하이드로클로라이드	리포메드	COC-156-HC-1LM	제조사가 AuNP 분석에 큰 영향을 미친다는 것을 발견했습니다
질산	어부	A509-SK212	65% 다른 브랜드를 제외하면 잘 작동합니다
염화나트륨 용액, 5M 바이오시약 등급	시그마	S5150-1L	고체로 만든 멸균 용액은 효과가 있습니다
디에틸 피로카보네이트	시그마	D5758-25 mL	≥ 97%는 어떤 브랜드든 잘 맞아요
에코닌메틸레스터 하이드로클로라이드	리포메드	COC-205-HC-1LM	우리는 코카인 타겟과 같은 제조사에서 EME 대조군을 입수했습니다
마이크로 원심분리기 튜브, Axygen Scientific, 비멸균, 1.7  ML	VWR	10011-722	제조사가 AuNP 분석에 큰 영향을 미친다는 것을 알게 되었고, 튜브는 사내에서 오토클레이브되었습니다
뉴클레이즈 프리 워터
메탄올