우리는 유익한 박테리아로 경구 전처리를 통해 쥐의 열 스트레스 영향을 예방하기 위한 프로토콜을 설명했습니다. 이 프로토콜은 다양한 투여 경로 및 다양한 화합물의 분석에 수정 및 사용할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
본 연구는 열 응력과 관련된 합병증에 대한 바실러스 서브 틸리 스 (Bacillus subtilis) 균주의 보호 효과를 평가하기 위해 디자인되었다. 서른 두 흰쥐이 연구에 사용되었다. 동물을 경구 B. 두 일 동안 하루에 두 번 처리 하였다 서브 틸리 BSB3 변형 또는 PBS. 다음날 마지막 처리 후, 각 그룹을 분할하고, 두 개의 실험 그룹 (하나는 PBS로 처리 한 B. subtilis에 처리) 25 분 동안 45 ℃로 넣었다. 두 대조군은 실온에서 25 분 동안 머물렀다. 모든 쥐를 안락사시키고, 다른 매개 변수는 모든 그룹에서 분석 하였다. 열 스트레스의 악영향 융모 높이 및 장 상피 점막 전체 두께의 감소에 의해 등록된다; 루멘에서 박테리아의 전위; 혈액 (LPS) 수준 리포 폴리 사카 라이드의 적혈구의 수포 및 고도 증가했다. 치료의 보호 효능은 사전 평가되고이러한 부작용의 vention. 이 프로토콜은 열 스트레스 합병증의 예방을위한 박테리아와 쥐의 구강 치료를 위해 설립되었다, 그러나이 프로토콜은 수정 및 관리의 다른 경로에 대해 서로 다른 화합물의 분석에 사용할 수 있습니다.
서론
다양한 스트레스 요인이 인간과 동물의 건강에 영향을 미칩니다. 체온은 가장 스트레스가 많은 요인 중 하나이며, 만성, 급성 및 치명적인 질병을 유발합니다1. 열 스트레스 후 장 형태의 변화와 장 장벽 무결성의 상실이 많은 사례에서 보고되었습니다2,3. 이 보호 장벽은 장내 세균과 그 독소, 특히 지질다당류(LPS)가 내강에서 내부 순환으로 이동하는 것을 방어하는 역할을 합니다4,5. 장내 미생물총(microbiota)의 안정성은 장 장벽 기능, 숙주의 면역 반응, 스트레스 상태에 대한 내성에 큰 영향을 미친다6. 따라서 장내 미생물총(microbiota)의 조절은 스트레스 관련 부작용을 예방하기 위한 새로운 접근법을 제공할 수 있습니다.
>jove_content<유익한 박테리아는 설사, 염증성 장 질환, 아토피 피부염,대사 장애 7-10과 같은 다양한 임상 상태를 성공적으로 관리하기 위해 장내 미생물군을 변형하는 유망한 전략으로 사용되어 왔습니다. 유익한 박테리아의 프로바이오틱스 효과에는 장 건강을 지원하는 필수 대사 산물 생성, 면역 체계 자극, 유당 내성 촉진, 상피 기능 장애 회복이 포함됩니다. 프로바이오틱스는 시험관 내 및 동물 모델에서 스트레스 관련 합병증을 예....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
모든 실험 절차는 오번 대학의 IACUC, 어번, 알라바마에 의해 승인되었다.
문화 미디어, 요리 및 세균 문화 1. 준비
- 영양 한천 플레이트에 밤새 성장 바실러스 서브 틸리 스 (Bacillus subtilis)의 BSB3 문화의 하나의 식민지를 가진 플라스크에 영양 배지 10 ㎖를 접종한다.
- 리터 당 포자 매체 (19) (500 ml의 확인 : 박토 영양 국물, 8g, 10 % (w / v)의 KCl을 10 ml의 1.2 % (v)를 4 × 7H 2 O, 10 ml의 황산 / 승, 한천, (15) g) 및 20 분 동안 121 ℃로 오토 클레이브. 다음 멸균 솔루션을 50 ℃로 냉각하고 추가 할 수 있습니다 : 1 M 칼슘을 (NO 3) 2, 1 ml의; 0.01 M MnCl 2, 1 ㎖; 1 mM의 4, 1 ml의 병용했을.
- 실온에서 20 분 동안 40 O를 C에 차가운 준비 매체는 살균 캐비닛 (20) 무균 배양 접시의 각에 25 ml에 붓는다. 매체가 하룻밤 응고 수 있습니다.
- ....
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결과
열 스트레스 후 바로 전에 동물의 체온의 평균은 각각 36.7 ± 0.07 입출력 C 및 40.3 ± 0.17 O C (P <0.05)이었다. 열 (그룹 3)로 쥐의 노출 융모 높이의 현저한 억제 및 점막 전체 두께의 결과 (도 2, 3 참조). 열 유해한 영향에서 스트레스 보호 소장 전에 BSB3 균주의 경구 투여.
장내 세균은 세균의 전위 장간막 림프절 분석 (MLN) 간 및 각 쥐의 비장에 의해 결정 하였다. 1.7 × 103 ± 4.6 × 10 2 CFU / g 조직 (그림 4)의 농도로 세균 배양 MLN에서만 고립 된 쥐의 간 (그룹 3) PBS로 사전 처리 및 열에 노출. 대조군에서 모든 테스트 샘플 (그룹.......
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토론
심각한 건강 상태 (29)에서, 고온에 노출 된 결과. 예방 및 열 스트레스와 관련된 합병증의 조기 발견은 매우 중요 (30)이다. 제시된 프로토콜은 열 스트레스 부작용 방지를위한 다양한 방식의 효능을 평가하는 데 사용될 수있다.
이 프로토콜 내에서 중요한 단계는 다음과 같습니다 열처리 과정 (45 O C, 25 분); 수집 및 독소 오염을 방지하는 혈액 처리 중 apyrogenic 재료의 사용; 동결 융해를 반복을 피하기 위해 -20 ℃로 혈청 분취 량을 유지; 세균 전위의 분석에서 멸균 절차에 따라. 이 프로토콜은 열 스트레스의 부작용 방지를위한 박테리아와 쥐의 구강 치료를 위해 설립되었다. 관리 및 다른 화합물의 다른 경로의 경우,이 프로토콜은 수정 될 수 있습니다. TR의 예를 들면, 시간열 스트레스 전에 eatment은 확장 될 수있다. 경구 투여는 직장 .......
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공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.
감사의 글
이 작업은 Auburn University 기금 FOP 101002-139294-2050의 지원을 받았습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 인산염 완충 식염수(PBS) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | P4417 | |
| 에틸 알코올 | Pharmco products Inc. 미국 코네티컷주 브룩필드 | 64-17-5 | |
| 한 | VWR | 97064-334 | |
| 맥콩키 한천 플레이트 | VWR | 470180-742 | |
| 5% 혈액 한천 플레이트 | VWR | 89405-024 | |
| 브루셀라 혈액 한천 플레이트 Hemin, 비타민 K | VWR | 89405-032 | |
| Bouin' s Fixative | Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA | 15990 | |
| IL-10 Rat ELISA kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0101 | |
| IL-1beta Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0011 | |
| IL-6 Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0061 | |
| INF-gamma Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | ||
| TNF-alpha Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC3011 | |
| Rat LPS ELISA Kit | NeoBioLab, MA, USA | RL0275 | |
| Environmental Chamber 6020-1 | Caron, Marietta, OH, USA | 6020-1 | |
| 원심분리기 | Beckman Coulter, 인디애나폴리스, 미국 | , Optima L-90K | |
| 울트라 원심분리기 | |||
| 광학 현미경 광학 시스템 | CitoViva Technology Inc., Auburn, AL | ||
| Colony 카운터 | Fisher Scientific, 피츠버그, 펜실베니아, 미국 | RE-3325 | |
| Freezer | Haier, 브루클린, 뉴욕, 미국 | HCMO50LA | |
| 울트라 마이크로플레이트 리더 | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx 808 | |
| 자동 스트립 워셔 | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx50 | |
| 피펫 | Gilson, Pipetman, France | P100, P200, P1000 | |
| C24 인큐베이터 쉐이커 | New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA | Classic C24 | |
| Rocking Shaker | Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA | 55 | |
| 페트리 접시 | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA | 875713 | 100 mm x 15 mm |
| SterilGard III Advance | The Baker Company, Sanford, ME, USA | SG403 | |
| Culture Growing Flasks | Corning Incorporated, Corning, NY, USA | 4995 | PYREX 250 ml 삼각 플라스크 |
| 광학 분광계 Genesys 20 | Thermo Scientific, 미국 매사추세츠주 월섬. | 4001 | |
| Sony DXC-33 비디오 카메라 | Sony | ||
| Richardson 테스트 슬라이드 | 전자 현미경 과학, Hatfield, PA, USA | 80303 | |
| Millipore 정수 시스템 | Millipore | Direct-Q | |
| Image-Pro Plus 소프트웨어 | 미디어 사이버네틱스, MD, 미국 | ||
| 트리플 빔 밸런스 | 오하우스 코퍼레이션, Parsippany, NJ, 미국 | ||
| 조직 균질화기, Dounce | VWR | 71000-518 |
참고문헌
- Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J. Cardiovascular function in the heat-stressed human. Acta Physiol. 199, 407-423 (2010).
- Lambert, G. P. Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke. Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).
- Yu, J.,
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재인쇄 및 허가
