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방법 논문

전위도의 동시 녹화 및 마취 된 흰쥐의 비주얼 사건 관련 전위

12.5K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/54158

⸱

2016년 7월 1일

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Optometry and Vision Sciences, University of Melbourne

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 마취된 쥐에서 망막전도와 시각적 유발 전위를 동시에 측정하는 것을 설명합니다.

초록

망막전도(ERG)와 시각 유발 전위(VEP)는 일반적으로 시각 경로의 무결성을 평가하는 데 사용됩니다. ERG는 빛 자극에 대한 망막의 전기적 반응을 측정하는 반면, VEP는 동일한 빛 사건 이후 망막에서 1차 시각 피질까지의 시각 경로의 해당 기능적 무결성을 측정합니다. ERG 파형은 다양한 망막 신경 세포 및 신경교세포 부류의 반응을 반영하는 구성 요소로 나눌 수 있습니다. VEP 파형의 초기 구성 요소는 시신경과 고등 피질 중심의 무결성을 나타냅니다. 이러한 녹음은 응용 프로그램에 따라 단독으로 또는 함께 수행할 수 있습니다. 이 논문에 설명된 방법론을 통해 양쪽 눈과 양쪽 반구에서 망막 및 피질 시각 유발 전기생리학을 동시에 평가할 수 있습니다. 이는 망막 기능과 망막 기능의 변화가 시각 유발 피질 기능에 미칠 수 있는 상위 효과를 보다 종합적으로 평가하는 데 유용한 방법입니다.

서론

전위도 (ERG) 및 시각 유발 전위 (VEP)의 측정은 시각 경로의 무결성의 유용한 정량적 평가를 제공합니다. VEP이 같은 빛 이벤트 다음 차 시각 피질에 망막에서 시각 경로의 해당 기능 무결성을 측정하면서 ERG는 빛 자극에 망막의 전기 반응을 측정한다. 이 원고는 일반적으로 사용되는 실험실 모델 쥐의 기록 및 ERG와 VEP 응답의 분석을위한 프로토콜을 설명합니다.

르 빛의 플래시에 망막의 총 전기 반응을 정량화하여 키 망막 세포 클래스의 숫자의 기능 무결성의 인덱스를 제공합니다. 이온 플럭스의 조율 된 일련의 광 개시에 의해 시작 오프셋, 눈의 외부 표면에 배치 된 전극을 사용하여 측정 할 수있는 전압 검출 가능한 변화를 생성한다. 얻어진 파형은 자체의 조합을 나타내는진폭, 타이밍 및 주파수의 다른 잘 정의 된 컴포넌트 RIES. 연구의 실질적인 몸체는 이러한 성분이 비교적 많은 척추 동물 망막 통해 상기 구성 요소가 서로로부터 분리 될 수 있다는 것을 잘 보존되어 있는지 보여 주었다. 적절하게 자극 (플래시 자극, 배경, interstimulus 간격) 조건을 선택하고 분석하는 복합 파형의 특정 기능을 선택하여 하나의 망막 세포 1,2의 특정 그룹의 측정 값을 반환 확신 할 수 있습니다. 이러한 특성은 유틸리티 따라서 망막 기능의 비 침습적 척도로서 ERG의 광범위한 애플리케이션을 기초. 이 원고는 (긍정적를 ERG을 측정하고 망막의 주요 세포 종류, 즉 광 수용체합니다 (PIII 구성 요소), 양극성 세포 (개인 식별 구성 요소) 및 망막 신경절 세포의 일부에 대한 정보를 반환하는 데 그 특징을 분석하는 방법론에 초점을 맞추고 암순응 임계 응답 또는 pSTR).

는 VEP는 빛에 대한 대뇌 피질의 응답의 분석을 제공합니다; 먼저 망막에서 발생한 후, 피질 3의 영역 V1에 시신경, 시신경 기관, 시상 (측면 geniculate 핵, LGN) 및 광섬유 방사선을 통해 직렬 통신. 설치류에서, 다수 - 각 눈 decussate 4에서 시신경 섬유 (90-95 %)과는 반대측의 중간 뇌에 분포. 르 달리 5 따라서 시각적 통로가 VEP 파형에 영향을 미칠 수있는 어느 곳 따라 변경 특정 세포 종류에 VEP의 다른 구성 요소를 돌리는 아직 가능하지 않다. 그럼에도 불구하고, VEP 시각적 성능 및 시각적 경로 무결성 유용한 비 - 침습적 측정은이다. VEP는 ERG와 함께 사용될 때, 시각 시스템 (즉, 망막 / 시각 경로)의보다 완전한 평가를 제공 할 수있다.

ERG 및 VEP 녹화는 애플리에 따라 단독으로 또는 조합하여 실시 할 수있다양이온. 이 문서에서 설명하는 방법은 망막과 대뇌 피질의 시각 유발 양쪽 눈에서 전기 생리학 및 마취 쥐의 두 반구의 동시 평가를 할 수 있습니다. 이것은 더 포괄적으로 망막 기능의 변화가 시각 유발 대뇌 피질의 기능에 미칠 수있는 망막 기능과 상류 효과를 평가하는 유용한 방법입니다.

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프로토콜

모든 실험 절차는 호주 국립 보건 의료 연구위원회에 의해 규정 된 관리 및 과학적인 목적을위한 동물의 사용을위한 연습 호주 코드에 따라 실시 하였다. 윤리 통관은 멜버른 대학 과학 학부, 동물 윤리위원회 (승인 번호 0911322.1)로부터 얻은 것입니다.

만성 VEP 전극 1. 사전 주입

주 : 동시 ERG와 VEP 신호가 수술 VEP 이식해야한다 동물은 적어도 일주 컬렉션 신호 전에 전극 수집 할 경우.

  1. 클로르헥시딘 (70 % 에탄올 중의 0.5 %) 세정 실험에 의해 종래의 수술 벤치를 소독. 사용하기 전에 모든 수술 장비를 압력솥. 멸균 수술 드레이프와 동물을 커버. 모든 실험자 수술 마스크, 가운 및 멸균 장갑을 착용해야합니다.
  2. 3 L / min의 유량으로 2 O 3.5 %의 이소 플루 란 - 3 마취를 유도한다. 메탄 유지수술 전반에 걸쳐 1.5 %, 2 L / 분 sthesia. 발 핀치 반사의 부재에 의해 마취의 충분한 깊이를 확인합니다.
  3. 눈의 건조를 방지하기 위해 각막에 1 % 카르복시 메틸 셀룰로오스 나트륨을 적용합니다.
  4. 눈에 이마를 통해 후방을 30mm의 X 30mm의 영역을 면도하고 귀에 전방.
  5. 체온을 유지하고, 고정대와 동물의 머리를 안정화하는 열 패드 (37 ℃)에 동물을 놓는다.
  6. 10 % 포비돈 - 요오드로 3 회 면도 영역 소독. 연습의 표준에 부합되고, 눈 주변 지역에 대한 알코올 계 소독제의 사용을 피 외과 기술자 협회에 의해 설정합니다.
  7. 두개골 뼈를 노출 메스와 피부 조직이 소비세 ~ 20mm 직경의 원형에서 머리에 중간 화살 절개를합니다.
  8. 긁어 및 관상 및 시상 두개골 봉합을 노출 거즈로 건조하여 기본 골막을 제거합니다.
  9. 우리7mm의 꼬리가 정수리에, 중간 선에 3mm 측면 다음 정위 좌표에서 두 반구의 두개골을 통해 두 개의 구멍 (0.7 mm 직경, 깊이 1 ~ mm)을 두개골을 잘라내는 톱, 드릴에 부착 된 치과 버를 보내고.
  10. 스테인레스 스틸 나사의 나사 (직경 0.7 mm는, 클로르헥시딘과 살균 길이 3mm) ~ 1mm (노출 나사 2 mm)의 깊이까지이 미리 만들어진 구멍에 확고한 고정을 허용합니다. 기본 대뇌 피질의 조직을 손상시키지 않고이 접촉 경질합니다.
  11. 4 ~ 8시에 0 봉합 - 거즈와 두개골 뼈를 건조, 2 개의 3 느슨한 피부를 수축에 의해 치과 아말감에 대한 수술 영역을 준비합니다.
  12. 대신에 (단계 1.10에 기재된 스테인리스 나사)의 나사 전극을 고정하기 위해 노출 된 두개골 위에 치과 아말감 확산. 나사 ~ 1.5 mm가 기록 노출 상태로 확인.
  13. 후퇴 봉합사를 제거합니다.
  14. 진통제와 식염수 (염화나트륨 0.9 %, 1 0.5 % 카프로 펜 피하 (5 ㎎ / ㎏)을 주입유체 교체 0.5 ml)을 피하.
  15. 동물은 별도의 케이지에 복구 할 수 있습니다. 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물 두지 마십시오.
  16. 완전히 수술 (최소 오일)에서 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 동물을 반환하지 않습니다.
  17. 4 일 동안 0.5 %에게 하루에 한 번 통증에 대한 카프로 펜 피하 (5 ㎎ / ㎏)을 관리하기 위해 계속합니다.
  18. 기록 ERG와 VEP 수술 후 일주.

2. ERG와 VEP 기록

  1. 데이터 수집 준비
    1. 동시에 자극을 유발 아래 권장 설정에 따라 데이터 2를 획득하기 위해 컴퓨터 소프트웨어를 사용합니다.
      1. 신호 3 증폭 (ERG을 : 1000, VEP × : 10,000 배) 내부에 고립 된 프리 앰프와 앰프에 의해 설정된 이득 및 임피던스 정합 두 눈.
      2. 650 이상 4 kHz로 ERG에 대한 설정 샘플링 속도밀리 초 기록 창 (2560 점),이 작업을 수행하려면, "500 밀리"샘플은 "2560"를 선택하고 (이름 및 재료에 대한 소프트웨어를 참조 테이블의 버전) 데이터 수집 소프트웨어의 "타임베이스"에 대한 탭을 클릭합니다 시간이 650 밀리 초 기록 창을 반환한다.
        1. 250 밀리 초 에폭 10 kHz로 VEP 대한 샘플링 속도를 설정하는 방법과 동일한 방법을 사용한다. 모두 ERG와 VEP 레코딩을위한 10 밀리 초 사전 자극 기준을 허용합니다. 이렇게하려면 "설정"탭을 클릭합니다; 새로운 대화 창을 불러옵니다 "자극"을 선택; 그 창에서 "모드"에 대한 드롭 다운 목록에서 "펄스"를 선택; 그리고 "10 밀리 초"를 "지연"에 대한 값을 설정합니다.
      3. 1,000 Hz에서 - (- 3dB) 0.3 필터링 설정 ERG의 대역 통과. 이 작업은 데이터 수집 소프트웨어에서 "바이오 앰프"를 클릭하면됩니다. 그런 다음에 "0.3Hz" "하이 패스"의 값과 "로우 패스"를 "1 kHz의 값을 설정".
      4. 100 Hz에서 - (- 3dB) 비전 (ISCEV)의 임상 전기 생리학에 대한 국제 학회에서 권장하는 인간의 VEP 녹음 6 2.1.1.3에 언급 된 방법을 사용하여, 0.1 VEP 대역 통과 설정을 설정합니다.
  2. 전극 준비
    1. 각각 2, 전극 리드에 실버 와이어 또는 악어 클립을 부착하여 ERG 활성 / 비활성 및 VEP 활성 / 비활성 전극을 사용자 정의-합니다. 상업적으로 접지 전극을 구하십시오.
    2. 4 맞춤 전극의 경우, 전극 리드 확장의 남성 끝을 잘라. 내부 배선을 보장 메스 블레이드가 손상되지와 외부 폴리 테트라 플루오로 에틸렌 절연 코팅의 1cm를 제거합니다.
    3. 사전 패션 쥐 눈을 둘러싸 직경 루프 ~ 8​​mm를 은선 (0.3 mm 두께)을 70 mm의 길이를 잘라내어 형성함으로써 ERG 비활성 전극. 1 ML의 피펫 팁에 루프를 형성하여 균일 원을 준비합니다.
      4. 실버의 70mm 길이를 절단하고 쥐 앞니 사이에 끼어하는 길이 현명한 지름 타원 ~ 8mm을 형성함으로써 사전 패션 VEP 비활성 전극.
    4. 사전 패션 실버 와이어의 30mm 길이를 절단하고 부드럽게 쥐의 각막에 문의 작은 루프를 형성하여 ERG 활성 전극 (~ 지름 1~2mm)
    5. 안전하게 노출 된 내부 와이어 실버 entwining에 의해 (2 ERG가 비활성화 활성화 ERG, 1 VEP 비활성) 전극 리드에 전극을 연결합니다.
    6. 태양 광 유물을 줄이기 위해 마스킹 테이프로 과잉 노출 된 금속을 절연.
    7. 르 비활성 전극 훅 앤 루프 패스너의 작은 조각 스틱에 (~ 20mm × 5mm) 마스킹 테이프는 설치류 넥 스트랩에 안정적으로 부착을 활성화합니다.
    8. 전극의 내부 배선에 악어 클립을 연결하면 VEP 활성 전극을 만들기 위해 리드.
    9. 이전에 녹음,은 배선의 노출 된 표면 (즉, 비활성 링 ACTI 전기 도금신호 전도를 개선하기 위해 20 초 9 V DC 소스를 사용하여 염화 팁)했습니다.
      1. 이를 위해서는 생리 식염수로 (일차 전지의 애노드로서 작용)을 ERG 전극선의은 끝 몰입; 9 V 배터리의 양극 단자에 상기 전극 와이어의 타 단부를 연결한다.
      2. 전지의 음극 단자에 다른 선 (음극)을 연결하고,뿐만 아니라 염에 다른 끝 몰입. 20 초 후 분리와 화이트 컬러에 균일하게 코팅 할 수있는 ERG 전극 와이어의 은색 팁을 관찰합니다.
        참고 : 염화 코팅의 개방성을 보장하기 위해 (~ 최대 8 시간까지) 각 실험 세션에 대한 새로운 ERG 전극을 준비합니다.
  3. 동물 준비
    1. 가벼운 꽉 방에서 사전 녹음에 동물 하룻밤 (≥ 8 시간)을 어두운 적응. , 실내 조명을 끄고 모든 문 블라인드를 닫아 최대 어두운 적응을 확인합니다. 주변 광 절연 재료를 배치하여 빛 누설을 최소화두꺼운 검은 커튼 외부 문 / 창문 및 배치의 컴퓨터 화면의 접합.
    2. 어두운 적색 발광 다이오드의 도움으로 어두운 실내에서 동물의 준비를 실시 (LED; 17.4 cd.m -2, λ 최대 = 600 nm의)로드 감도를 유지 할 수 있습니다.
    3. 근육 (5 ㎎ / ㎏ 60) 케타민 / 자일 라진을 주사하여 쥐를 마취. 발을 핀치 반사의 부재에 의해 마취의 충분한 깊이를 확인합니다.
    4. 진정 작용을 유지할 필요 50 분 후 마취의 추가 용량 (초기 용량의 50 %)을 관리한다.
    5. 추가 국소 마취를 들어 각 눈에 0.5 % proxymetacaine 한 방울을 적용하고, 초과 유체를 깜박입니다.
    6. 동공 팽창을 위해 다음 각 눈에 0.5 % tropicamide 한 방울을 적용 초과 유체를 건조.
  4. ERG와 VEP 전극 위치
    1. 패러데이 케이지에 위치한 Ganzfeld 그릇 앞의 ERG 플랫폼에서 동물을 놓습니다. 그것은을 C로, 전기 가열 패드를 사용하지 마십시오전기 생리 녹음에 전기 노이즈를 소개합니다. 주 : 플랫폼은 체온을 유지하기 위해 순환 온수 플랫폼에 부착된다.
    2. 목덜미 주위에 단단히 단단히하지 배치 훅 앤 루프 패스너의 스트립 플랫폼에 대한 보안 동물.
    3. 마취 된 쥐의 아래 앞니 주변의 비활성 VEP 전극 후크.
    4. 눈의 적도 주위에 비 침습적 공막 고리를 포위하여 ERG 비활성 전극을 배치합니다. 목덜미 주위 벨크로 파스너 스트립에 전극을 부착하여이를 안정시킨다. 반대편 눈에 대해 반복합니다.
    5. 고정시킵니다 VEP 스테인리스 스틸 나사 두개골에 사전 주입에 악어 클립을 부착하여 활성 전극.
    6. 신호 품질을 개선하기 전에 ERG 활성 전극의 배치에 각막 1 % 카르복시 메틸 셀룰로오스 나트륨의 작은 방울을 놓는다. 참고 : 비스코스 유체는 미니에 대한 실험을 통해 각막 수분을 유지하는 데 도움이설치류 7 탈수 형 백내장 형성 마이즈.
    7. VEP 비활성 전극의 접촉을 향상시키기 위해 하부 앞니에 1 % 카르복시 메틸 셀룰로오스 나트륨의 작은 방울을 배치함으로써 신호 품질을.
    8. 가볍게 맞춤형 정위 팔에 부착 된 미세 조작기를 이용하여 각막 표면을 만지지하기 ERG 활성 전극을 배치합니다.
    9. 피하 꼬리에 지상 바늘 전극 (스테인리스 스틸)의 5mm - 2를 삽입합니다.
    10. 필요한 경우 하부 눈꺼풀의 사전 신호 품질을 개선하기 위해 기록에 남는 유체를 건조.
    11. 가까운 동물의 눈은 모두 망막의도 조명을 사용하는 그릇의 개통에 맞춰 보장 Ganzfeld 그릇에 슬라이드 플랫폼 (단계 2.4.1 참조).
    12. 외부 소음을 줄이기 위해 패러데이 케이지를 닫습니다.
  5. 데이터 수집
    1. 전극 placem 여부를 평가하기 - (0.52 로그 cd.sm -2) 희미한 테스트 플래시를 사용천만에 2 만족입니다. 제어 조건이 ~ 800 μV의 ERG의 진폭 크지 10 % 이상 간 눈 변동을 초래할 것이다. 필요한 재배치 전극 경우.
    2. 테스트 플래시 다음과 동물 이전 기록에 완전한 어둠 속에서 10 분 동안 어두운-적용 할 수 있습니다.
    3. ERG와 VEP를 수집하는 동안 Ganzfeld 그릇을 사용하여 빛 자극의 현재 깜박은 ~ 500 밀리 초 시간 창을 통해 동시에 신호를 보낸다. 조광기에서 진행 특정 파형에 대한 충분한 어두운 적응을 유지하기 위해 빛의 수준을 밝아합니다.
    4. STR, B-파도와 ERG의 A / B 파 파형을 이끌어내는 발광 에너지의 범위에서 신호를 수집합니다. 밝은 발광 에너지 (1 반복)에서 디머 빛 수준 (20 반복) 이하에서 평균 이상의 신호. 점차적으로 1에서 가장 어두운 영역에서 가장 밝은 빛 레벨 180 초에 간 자극 간격을 연장. 예를 들어 프로토콜에 대한 표 1을 참조하십시오.
    5. 이소로늦게 ERG로드와 콘 응답, 페어링 플래시 패러다임 (8)을 사용한다. 1.52 로그 cd.sm 4 개의 점멸을 시작 -2 년 사이에 500 밀리 초 간 자극 간격 2. 디지털 추정로드 응답을 유도하기 위해 혼합 파형 (1 일 플래시)에서 콘 파형 (3 번째 또는 4 번째 플래시)를 뺍니다.
    6. 밝은 발광 에너지에서 VEP 신호, 평균 20 반복을 기록하기 위해 (즉, - 0.52 로그 cd.sm -2, 5 초 간 자극 간격 1.52까지). 이 시퀀스의 첫 번째 플래시가 기존의 어두운 적응 ERG 응답을 반환합니다.
    7. (20) VEP는 광량에 따라 다음 밝은 ERG 단계 전에 스윕 후 재 적응을위한 3 분 1 - 허용합니다.
    8. 데이터 수집의 완료 후에, 펜토 바르 비탈 나트륨 (325 ㎎ / ㎖, 3 ㎖)의 심장 내 주사로 마취 된 동물을 안락사.
파형 자극 빛 에너지 (cd.sm를 기록 -2) 반복 수 interstimulus 간격 (초)
STR -6.24 (20) 이
STR -5.93 (20) 이
STR -5.6 (20) 이
STR -5.33 (20) 이
로드 B 파 -4.99 (10) 이
로드 B 파 -4.55 (10) 이
로드 B 파 -4.06 (5) (5)
로드 B 파 -3.51 (5) (5)
로드 B 파 -3.03 1 1(5)
로드 B 파 -2.6 1 (15)
로드 B 파 -1.98 1 (15)
혼합 A- / B 파 -1.38 1 (30)
혼합 A- / B 파 -0.94 1 (30)
플래시 1 : 20의 혼합 A- / B 파의 평균 : VEP -0.52 (20) (5)
(다음 전에 90 초)
플래시 1 : 20의 혼합 A- / B 파의 평균 : VEP 0.04 (20) (5)
(다음 전 120 초)
플래시 1 : 20의 혼합 A- / B 파의 평균 : VEP 0.58 (20) (5)
(다음 전 180 초)
FLA는시간 1 : 20의 혼합 A- / B 파의 평균 : VEP 1.2 (20) (5)
(다음 전 180 초)
플래시 1 : 20의 혼합 A- / B 파의 평균 : VEP 1.52 (20) (5)
(다음 전 180 초)
콘 A- / B 파 1.52 4 0.5

자극 에너지의 범위를 사용하여 표 1 ERG와 VEP 기록 프로토콜. 충분한 간 자극 간격 밝은 (아래)이 깜박에 희미 (위)에서 자극 프리젠 테이션 진행 어두운 적응을 보장합니다. 프로토콜의 마지막에, 짧은 간격으로 반복 점멸 네 원뿔 매개 된 반응을 유도하기 위해 제공된다.

ERG 파형 3. 분석

참고 : ERG와 VEP 분석 이전에 상세하게 설명하고있다 3,9,10합니다.다음 섹션에서는 간단한 개요를 제공합니다.

  1. 데이터 분석을 위해 스프레드 시트 소프트웨어 디지털 전압 - 시간 형식으로 내보내기 신호.
  2. 로드 photoreceptoral 기능
    1. 지연 가우스 (식 1) (11)와 A-파 PIII의 첨단 모델.
      PIII는 (내가, t)는 = Rm의 PIII는 ∙ [1 - 특급은 (- 내가 S (t ∙ - t의 d)를 2)]의 t> t D (식 1)
    2. 두 개의 밝은 발광 에너지의 앙상블을 통해 12, 13 (즉, 1.22 및 1.52 로그 cd.sm -2) 착용감을 최적화합니다.
    3. ㄱ 파 진폭의 90 %에 모델까지 포스트 receptoral 침입 (14)을 방지 할 수 있습니다.
      참고 :이 모델은 photoreceptoral 응답의 포화 진폭 (RM PIII, μV), 감도 (S, m 2 .CD -1 .S -3)과 지연 (t d를, 밀리 초)을 반환합니다.
  3. 막대 양극 세포 (SECURITY) 기능을 비활성화이온
    1. 디지털 상부 진동 전위와 혼합 PII를 반환하는 혼합 파형에서 PIII 모델 (위 참조) 뺍니다.
    2. 혼합 PII에서로드 PII를 추출하려면, 디지털 혼합 PII에서 콘 응답 (3 차 또는 1.52 로그 cd.sm에서 4 번째 플래시 -2) 빼기 (1.52 로그 cd.sm에서 1 차 플래시 -2).
    3. 이어서, 진동 전위를 제거하는 파형 (46.9 ㎐, -3 dB, 블랙맨 윈도우)에 저역 통과 필터를 적용한다. 나머지 파형로드 PII 응답 (10)이다.
    4. 로드 PII 피크 진폭을 추출하고 10 (1.52 로그 cd.sm -2에서 -2 로그 cd.sm -2 봉 고립 PII 이하) 모든 자극 강도에 대해 그것을 음모.
    5. 내부 망막 세포의 무결성 측정 값을 제공하는 쌍곡선 함수 (수학 식 2)를 사용하여 이러한 데이터 모델.
      V (i)는 V의 최대 = (I N / (I N+ 케이 N)) (식 2)
      참고 :이 방정식은 최대 PII 응답 (V 맥스, μV), 1 / 감도 반환하고 기능 (N) (15)의 기울기 (K를, cd.sm-2를 기록).
  4. 콘 양극 세포의 기능
    참고 : 콘 응답이 하나의 강도로 촬영 한 바와 같이 (1.52 로그 cd.sm -2) 진폭과 타이밍이 빛 수준에서 재곡된다.
    1. 최대 콘 PII 응답 2.16 압축을 풉니 다.
    2. 이 최대 응답이 2.16에 해당되는 암시 적 시간의 압축을 풉니 다.
  5. 신경절 세포 기능
    1. 이 STR 작은 신호이기 때문에, 고주파 및 라인 노이즈 제거 파형 50 Hz의 노치와 저역 통과 필터를 적용 (46.9 Hz에서, -3 dB, 블랙맨 윈도우).
    2. 최대 pSTR 응답, 17의 압축을 풉니 다.
    3. 이 최대 응답이, 17에 해당되는 암시 적 시간의 압축을 풉니 다.

4. 아나VEP 파형의 용해

  1. VEP (P1, N1 및 P2)의 최대 및 최소 구성 요소의 압축을 풉니 다. 세부 사항 참조의 3,6을 참조하십시오.
  2. 그 앞의 피크 또는 트로프 (P1N1 및 N1P2) 3,6에서 골 - 투 - 피크 진폭으로 고속 진폭.
  3. 암시 적 시간 (IT) 추출에있는이 최대 응답 대응 (P1 그것은, N1 그것은, P2 그것은) 3,6-.

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결과

르 A-파 (> -1.38 로그 cd.sm -2), B-파도 (> - 4.99 로그 cd.sm -2) STRs (<- 4.99 로그 cd.sm -2)와 VEPs (> - 0.52 cd.sm를 기록 -2)를 동시에 (그림 1 및 기록 하였다 3). 아주 희미한 깜박에서 긍정적 STR (pSTR)는 110 밀리 초 플래시 후 약 보지하고, 약 220 밀리 초에서 제외 STR (nSTR) (도 1 및도 2). 큰 B 파장을 가진 ERG 그 PII 응답을 분석 할 수있는 적당한 플래시의 개시 후 50 내지 100 밀리 초 사이의 피크 (도 1 및도 2). 이 자극 에너지에서, 피크 전에 네거티브 파장은 무시할 수있다. 밝게 빛나는 에너지에 부정적인 편향은 파...

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토론

르와 VEP는 각각 망막 및 피질에서 시각 기능의 객관적 측정합니다. 동시 기록의 장점은 전체 시각적 경로의보다 포괄적 인보기가 수득된다는 점이다. 특히, 자신의 동시 평가에서 보완적인 정보는 예를 들어, 시신경 병증 차 뇌 위축 (19)와 공존 할 수 ERG 아직 뚜렷한 VEP 18 발현 중복과 장애에 대한 (시각 경로에 부상의 사이트의 명확한 묘사를 제공 할 수있다, 20, 또는 VEP 손실) 시각 통로 (21, 22)의 여러 위치에서 부상의 증상으로 혼동 할 수있는 경우. 동시에 ERG 및 VEP을 측정함으로써 망막 피질 응답 간의 게인의 지표도 유도 될 수있다. 이것은 미묘한 병리학 적 변화를 검출하기에 유용한 도구를 제공 할 수있다. 현재의 프로토콜은 일반적으로 사용되는 실험실 쥐에 ERG와 VEP 측정이 가능하지만, 쉽게 광고 할 수있다다른 포유 동물 종의 23 ~ 25에 apted. 설치류에서 ERG와...

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공개 사항

저자는 이 작업과 관련된 공개가 없습니다.

감사의 글

이 프로젝트를 위한 자금은 National Health and Medical Research Council (NHMRC) 1046203 (BVB, AJV) 및 Melbourne Neuroscience Institute Fellowship (CTN)에서 제공했습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
악어 클립일반 브랜드HM3022스테인레스 스틸 VEP 나사 전극을 케이블에 연결하기 위한 26mm 클립
생체 증폭기ADInstrumentsML 135ERG 및 VEP 신호 증폭용
카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 1.0%AllerganCAS 0009000-11-7활성 ERG 전극의 신호 품질 향상을 위한 점성 유체
Carprofen 0.5%Pfizer Animal Health GroupCAS 53716-49-7소유명 : Rimadyl 주사 가능 (50 mg / ml). 수술 후 진통제의 경우 생리 식염수 클로르헥사딘 0.5%에 0.5%(5mg/ml)로 희석
Orion Laboratories27411, 80085수술 기구 소독용
순환수 수조Lauda-Kö nigshoffenMGW Lauda수술 및 전기 생리학적 기록 중 마취된 동물의 체온을 유지하기 위해
Dental amalgamDeguDent GmbH64020024전극-두개골 어셈블리를 감싸서 더 견고하게 만들기 위해
Dental burrStorz Instruments, Bausch and Lomb#E0824AVEP 나사를 삽입하기 위해 각 반구의 두개골에 작은 구멍을 만들기 위한 ~ 0.7 mm 직경의 소형 드릴
드릴 BoschDremel 300 시리즈트레패닝하기 위한 자동 드릴
 F-E2-30은선 전극을 증폭기
패러데이 케이지맞춤형적응을 유지하기 위해 내광을 보장합니다. 신호 대 잡음비를 개선하기 위해 Ganzfeld 설정을 둘러쌉
거즈 면봉Multigate Medical Products Pty Ltd57-100B수술 중 절개 부위 및 노출된 두개골 표면을 건조시키기 위해
Ganzfeld 통합 구Photometric Solutions International맞춤형 광 자극기: 직경 36mm, 조리개 크기 13cm
벨크로VELCRO Australia Pty Ltd벨크로 브랜드 재사용 가능 전극과 동물을 기록 플랫폼
Isoflurane 99.9%Abbott Australasia Pty LtdCAS 26675-46-7독점 이름: Isoflo(TM) 흡입 마취제에 고정하기 위해 후크 앤 루프 패스너를 감습니다. VEP 전극 임플란트 수술용 산소 가스와 혼합된 제약 등급 흡입 마취제
케타민 Troy LaboratoriesIlium Ketamil독점 이름 : Ketamil Injection, 브랜드 : Ilium. 전기 생리학적 기록을 위한 제약 등급 마취제
Luxeon LEDPhillips Lighting Co.광 자극용: 2개의 5W LED 및 1개의 1W LED용.
MicromanipulatorHarvard ApparatusBS4 50-2625녹음 중에 ERG 활성 전극을 유지합니다.
바늘 전극잔디 텔레팩터 F-E2-30ERG와 VEP
페닐에프린 2.5% 최소Bausch and LombCAS 61-76-7ERG 기록을 위한 최대 확장을 달성하기 위해 Tropicamide를 주입했습니다
Povidone 요오드 10%Sanofi-AventisCAS 25655-41-8소유명: Betadine, 수술을 위해 면도한 피부를 준비하기 위한 방부제 10%, 500 ml
Powerlab 데이터 수집 시스템ADInstrumentsML 785는 LED
Proxymetacaine 0.5%Alcon Laboratories& 주의;CAS 5875-06-9ERG 기록 중 각막 마취용
식염수 GelflexNon-injectable, 전기 도금은선 전극용
범위 소프트웨어ADInstruments버전 3.7.6Powerlab 시스템을 통해 자극을 동시에 트리거하고 데이터 수집
은(가는 원형 와이어)A& E 금속0.3 mm활성 및 비활성 ERG 전극을 만드는 데 사용되며, 비활성 VEP 전극
스테인리스 스트릴 나사 MicroFasterners0.7mm 샤프트 직경, 3mm 길이 1차 시각 피질 위에 이식하고 활성 VEP 전극 역할을 합니다
입체 프레임David Kopf모델 900Paxinos & 왓슨의 2007년 쥐 뇌 아틀라스 좌표
수술용 블레이드Swann-Morton Ltd.0206VEP 전극을 이식하기 위해 주요 시각 피질에 오버레이된 피부 영역을 절개하기 위해
SutureShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd3-0 실크 꼰 봉합사 비흡수성, VEP 전극 이식 수술 중 피부 수축
Tobramycine 눈 연고 0.3%Alcon Laboratories CAS 32986-56-4독점 이름 : Tobrex. 수술 후 피부 상처 주위에 적용되는 예방적 항생제 연고
Tropicamide 0.5%Alcon Laboratories CAS 1508-75-4독점 이름 : 0.5 % Mydriacyl 점안액, ERG 기록을위한 mydriasis를 달성하기 위해 주입
XylazineTroy LaboratoriesIlium Xylazil-100전기 생리학 기록을위한 제약 등급 마취제
피펫 팁Eppendorf Pty Ltd0030 073.169Eppendorf epTIPS 100 - 5,000 ml, 맞춤형 전극
Microsoft Office ExcelMicrosoft데이터 분석을 위한 버전 2010스프레드시트 소프트웨어
Lethabarb Euthanazia InjectionVirbac (Australia) Pty LtdLETHA450신속한 안락사를 위한 325 mg/ml 펜토바르비탈 나트륨
전극 리드 잔디 텔레팩터를 에 연결하기 위한 백금 케이블 어두운 니다 , 은 의 접지 전극으로 꼬리에 피하로 삽입;은 .

참고문헌

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