질량 분석 기반 phyloproteomics (MSPP)는 캄 필로 박터 jejuni와 SSP의 모음을 입력하는 데 사용되었다. doylei는 multilocus 시퀀스 입력 (MLST)에 비해 변형 수준에서 분리합니다.
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질량 분석 기반 phyloproteomics (MSPP)는 캄 필로 박터 jejuni와 SSP의 모음을 입력하는 데 사용되었다. doylei는 multilocus 시퀀스 입력 (MLST)에 비해 변형 수준에서 분리합니다.
MALDI-TOF MS는 종 및 아종 수준 그러나 심지어 아래 균주 수준에서뿐만 아니라 일부 박테리아를 차별화 할 수있는 가능성을 제공한다. 검출 가능한 바이오 마커의 대립 이온 이성체 분리는 특정 질량 변화 될. 질량 분석 기반 phyloproteomics (MSPP)를 참조 균주 염기 서열을 게놈에 비해 분리 특정 질량 변화에서 phyloproteomic 관계의 공제를 허용하는 방식으로 질량 분석 검출 바이오 마커의 질량을 결합하는 새로운 기술이다. 추론 된 아미노산 서열은 MSPP 기반 dendrograms을 계산하는 데 사용된다.
여기서 우리는 캄 필로 박터 jejuni와의 SSP를 입력하여 MSPP의 흐름을 설명합니다. 일곱 균주의 분리 수집을 doylei. 모든 일곱 균주는 유전 적 다양성을 보여 인간의 기원과 multilocus 시퀀스 입력 (MLST)의했다. MSPP-입력 충분히 자신의 PHY를 반영 일곱 가지 MSPP 시퀀스 유형의 결과logenetic 관계.
C. jejuni와는 SSP. MSPP 방식은 2 ~ 11 kDa의 질량 범위에서 14 개 바이오 마커 이온, 주로 리보솜 단백질을 포함 doylei. MSPP 원칙적으로, 확장 된 질량 범위와 다른 질량 분석 플랫폼에 적용 할 수있다. 따라서,이 기술은 변형 된 미생물 레벨 입력을위한 유용한 도구가 될 가능성이있다.
지난 십년 동안, 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화 비행 시간 형 질량 분석계 (MALDI-TOF MS)가 임상 미생물학 1,2 미생물 속과 종의 식별을위한 높은 값의 표준 방법으로 진행 하였다. 종 식별은 그대로 세포 또는 세포 용 해물의 작은 단백질 지문의 기록에 기초한다. 일상적인 임상 미생물에서 사용되는 질량 분석 장치의 일반적인 질량 범위는 2-20 kDa 이상이다. 또한, 결과적인 스펙트럼은 다음 종의 균주 및 아종 이하 레벨 3을 구별하는데 사용될 수있다. 초기 선구적인 연구는 캄 필로 박터 jejuni와 4 균주의 특정 하위 그룹, 클로스 트리 디움 디피 5, 살모넬라 엔테 SSP에 대한 특정 바이오 마커 이온을 확인했다. 엔테의 혈청 형 Typhi (6), 황색 포도상 구균 7-9, 및 E12 - scherichia 10 대장균.
대립 유전자 아형에 해당하는 여....
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1. 바이오 안전성 조건을 고려하여 안전한 작업 환경을 준비
2. 참조 및 컬렉션 분리 된 균주
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이전에, 우리는 성공적으로 C.에 대한 MSPP 체계를 확립 jejuni와의 SSP. 13 jejuni와. 여기서, 우리는 C. 형제를 아종하는 방법을 확장하는 목적 jejuni와의 SSP. doylei. 이 특정 설정에서 일곱 C. jejuni와의 SSP. doylei 분리는 / 연구소 미생물학 UGent BCCM / LMG 겐트, 벨기에의 미생물의 벨기에 컬렉션에서 획득 하였다. 우리의 분석에 사용 된 모든 일곱 분리는 인간의 기원이었다. 설사가 기준으로 봉사와 게놈 염기 서열을 변형 ATCC 49349 (8843 LMG)는 원래 2 세의 호주 아이의 대변에서 분리. LMG 9143, LMG 9243 및 LMG 9255 어린이 설사 고통과 벨기에 브뤼셀에 살고의 대변에서 분리; 컬렉션에서 여섯 추가 균주를 사용할 수 있.......
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MSPP 방식의 설립에서 가장 중요한 단계는 바이오 마커 이온 정체성의 명확한 유전 적 결정이다. 그것은 틀림없이 바이오 마커를 식별 할 수 없다면, 이것은 반응식 13에서 제외한다.
C. jejuni와의 SSP. doylei 방식은 14 개 바이오 마커 이온을 포함한다. 이 5 이하 C. 비교입니다 검출 가능한 C. 사이 jejuni와의 SSP. jejuni와 MSPP 방식 (13) 국지적 가장 큰 차이 jejuni와 SSP. jejuni와와 C. jejuni와의 SSP. doylei 바이오 마커는 L31 (-M) 및 L35 (-M) (13)의 경우에는 아미노 - 말단 메티오닌의 번역 후 제거했다.
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저자는 공개할 것이 없습니다.
탁월한 기술 지원을 제공해 주신 Hannah Kleinschmidt에게 감사드립니다. 이 논문은 Deutsche Forschungsgemeinschaft의 오픈 액세스 지원 프로그램과 괴팅겐 게오르그 아우구스트 대학의 출판 기금의 지원을 받았습니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| acetonitrile | Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany | 34967 | |
| Autoflex III TOF/TOF 200 system | Bruker Daltonics, 브레멘, 독일 | GT02554 G201 | 질량분석기 |
| 세균 검사 표준 BTS | Bruker Daltonics, 브레멘, 독일 | 604537 | |
| BioTools 3.2 SR1 | Bruker Daltonics, 브레멘, 독일 | 263564 | 소프트웨어 패키지 |
| Bruker IVD Bakterial Test Standard | Bruker Daltonics, 브레멘, 독일 | 8290190 | 5개의 튜브 |
| 캄필로박터 jejuni subsp. doylei isolate | 벨기에 미생물 조정 수집/미생물학 연구소 UGent BCCM/LMG Ghent, Belgium | LMG8843 | ATCC 49349; IMVS 1141년; NCTC 11951년; 균주 093 |
| 캄필로박터 jejuni subsp. doylei isolate | 벨기에 미생물 공동 수집/미생물학 연구소 UGent BCCM/LMG Ghent, Belgium | LMG9143 | Goossens Z90 |
| Campylobacter jejuni subsp. doylei isolate | 벨기에 미생물 조정 수집 / 미생물학 연구소 UGent BCCM / LMG Ghent, Belgium | LMG7790 | ATCC 49350; CCUG 18265; 카스퍼 71; 경기관총 8219; NCTC 11847 |
| 캄필로박터 jejuni subsp. doylei isolate | 벨기에 미생물 공동 수집 / 미생물학 연구소 UGent BCCM / LMG Ghent, Belgium | LMG9243 | Goossens N130 |
| Campylobacter jejuni subsp. doylei< / em> isolate | 벨기에 조정 미생물 수집 / 미생물학 연구소 UGent BCCM / LMG Ghent, Belgium | LMG8871 | NCTC A603 / 87 |
| Campylobacter jejuni < / em> subsp. doylei< / em> isolate | 벨기에 조정 미생물 수집 / 미생물학 연구소 UGent BCCM / LMG Ghent, Belgium | LMG9255 | Goossens B538 |
| Campylobacter jejuni< > subsp. doylei< / em> isolate | 벨기에 조정 미생물 수집 / 미생물학 연구소 UGent BCCM / LMG Ghent, Belgium | LMG8870 | NCTC A613 / 87 |
| Columbia 한천 기지 | Merck, 다름슈타트, 독일 | 1.10455 .0500 | 500 g |
| FlexSeries 1.2 SR1 | Bruker Daltonics용 | 251419 | 소프트웨어 패키지 |
| 탈분된 양 피 | Oxoid Deutschland GmbH, Wesel, Germany | SR0051 | |
| 에탄올 | Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany | 02854 Fluka | |
| formic acid | Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany | F0507 | |
| HCCA matrix | Bruker Daltonics, Bremen, Germany | 604531 | |
| Kimwipes paper tissue | Kimtech Science via Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany | ||
| MALDI Biotyper 2.0 | Bruker Daltonics, 브레멘, 독일 | 259935 | 소프트웨어 패키지 |
| Mast Cryobank 바이알 | Mast Diagnostica, Reinfeld, 독일 | CRYO/B | |
| MSP 96 광택 스틸 타겟 | Bruker Daltonics, 브레멘, 독일 | 224989 | |
| QIAamp DNA Mini Kit | Qiagen, Hilden, Germany | 51304 | |
| 재조합 인간 인슐린 | Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany | I2643 | |
| 트리플루오로아세트산 | Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany | T6508 | |
| 물, 분자생물학 등급 | Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany | W4502 |
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