쥐에서 간 섬유증의 동물 모델을 제작하는 방법을 설명하고, 간의 조직학적 검사를 통해 섬유화의 정도를 평가합니다. 이 모델은 간 질환의 발병을 연구하고 잠재적인 항섬유화제의 효능을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
세 개의 주에서 6 수컷 위 스타 래트 간 섬유화 동물 모델을 제조 하였다. 이 과정은 일주일에 세 가지 일 연속 복강 주어진 10 ㎎ / ㎏이 dimethylnitrosamine (DMN)의 투여 4 주 필요합니다. DMN이 알려진 hepatoxin과 발암 물질로 복강 주사는 흄 후드에서 수행 하였다. 이 모델은 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, 간 변경은 순차적으로 또는 관심의 특정 단계에서 공부하실 수 있습니다. 둘째, 간 질환의 단계 혈청와 ALT 및 아스 파르 테이트 아미노 트랜스퍼 라 아제 (AST) 효소의 측정에 의해 모니터링 될 수있다. 셋째, 다른 단계에서 간 손상의 정도는 메이슨의 Trichome 염색 간 조직의 조직 학적 검사 한 후, 지정된 시점에서 동물을 희생하여 확인할 수있다. DMN 투여 4 주 후, 전형적인 섬유화 점수는 5 Ishak 규모 6이다. 이 모델은 일관되게 재생 될 수있다널리 전위 항 섬유증 제제의 효능을 평가하기 위해 사용된다.
서론
DMN은 강력한 간 특정 독소이다. 래트의 간 부상을 야기하기 위해 대사 조직 분포 및 능력 매기 1로보고하고, 아폽토시스에 의한 간세포 손상과 세포 사멸의 메카니즘은 프리 차드 및 버틀러 (2)에 의해 설명되었다. 이 화합물의 간헐적 투여 개와 쥐 3,4에서 간 섬유증을 유발하는 것으로보고되었다.
메커니즘과 간 섬유증의 형태 학적 변화는 광범위하게이 모델을 사용하여 조사되었다. 래트를 사용하는 초기 연구에서, DMN 3 주간의 치료 지방증 5없이 micronodular 간경변 뒤에 중심 소엽 출혈성 괴사를 일으켰다. 그것은 초기 섬유화에 그를 줬습니다 형성 콜라겐 더 크로스 타입 I (6)보다 더 눈에 띄는되는 유형 III와 연결했다. 다른 원인에 대해 공통적으로, DMN 유발 섬유증 변화는 쿠퍼 세포에서의 증가와 관련되었다; 내가 상주 간 대 식세포n은 사인 곡선. 이 세포는 근육 섬유 모세포로 변신하고 섬유증 7의 기본 문제가 세포 외 기질의 과도한 양을 생산하고 있습니다.
세포 신호 전달의 측면에서, 나카무라 등. TGF-β는 간 섬유증
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프로토콜
모든 동물 실험은 응용 과학의 학교, 테마섹 폴리 테크닉의 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.
DMN 1. 준비
- 피펫 (200) DMN의 μL (1 ㎍ / ㎖ 원액)와 주입을위한 10 ㎎ / ㎖의 DMN 용액을 제조 PBS의 19.8 ml를 추가합니다.
참고 : DMN은 발암입니다. 동물의 주사를 DMN을 준비하고 수행하는 흄 후드를 사용합니다.
DMN 2. 복강 내 주사
- 200g - 150의 평균 무게 남성의 Wistar 쥐를 사용합니다. 실험의 시작 7 일 전 - 4 쥐를 적응.
- 12 시간 빛과 12 시간 어두운 사이클, 22 ± 1 ℃의 실온에서 쥐를 유지한다. 쥐 Chow 및 임의 량의 물을 제공한다.
- 매일 음식과 물 섭취량을 측정합니다. 체중 주간을 측정합니다.
- 10 mg / kg 체중의 투여 량에 기초하여 각각의 래트에 대해 DMN의 양을 계산한다. 25 게이지 바늘 t으로 1 ML의 주사기를 사용하여오 주사기에 DMN 솔루션의 계산 된 볼륨을 그립니다.
- 복강 내 주사 (21)의 쥐를 억제.
- 쥐가 제대로 억제로, 복부....
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결과
DMN 처리 된 쥐들은 체중을 잃고 주름 장식 헤어 코트 덜 활발한된다. DMN 처리 된 쥐의 평균 체중에 상당한 손실이; 제 2 검출 후의 DMN 처리 주,이 차이는 DMN 처리 (도 1a) 후 3 주와 4를 통해 유지된다. 쥐가 연속 주간 DMN을받을 때, 간 손상은 작아됩니다. 간 지수; 이는 최종 체중의 간 중량의 비율이 DMN 처리 된 쥐들 (도 1b)에 대한 낮았다이다.
그림 1 : A) DMN의 바디 무게는 쥐를 처리 하였다. 데이터는 SD ± (- 8 N = 6) 수단으로 표시됩니다. * P <정상 대조군 b) 간 인덱스에 비해 0.05.; DMN의 최종 체중.......
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토론
우리는 간 섬유화 동물 모델을 만들기 위해, 간 섬유증의 정도를 평가하는 방법을 설명 하였다. DMN의 정확한 용량을 제공하고 주간 복강 내 주사의 일정을 준수하는 것이 중요합니다. 실험이 진행되는 동안, 래트 체중 및 DMN 주사의 매주의 시작시에 용량을 다시 계산하는 것이 중요하다. DMN은 독성과 연기 캐비닛에서 처리 될 필요가 명심하십시오. 우리는뿐만 아니라 연기 캐비닛에 복강 주사를 수행합니다. 반복 주사의 필요성으로 주입 억제 및 정확한 기술은 내장에 오염 물질의 도입 및 손상을 방지하는 것이 중요하다. 우리는 거의 복강 내 주사에서 사망률이 없습니다.
쥐 실험 기간 동안 하루에 2 배 모니터링해야합니다. DMN 주입의 마지막 주 동안, 동물들은 죽어가는 징후를 더 자주 밀접하게 관찰해야한다. 이 요정 인간 손상이 가장 심한 및 영향을받는 쥐가 inappetent 할 때 OD는 체중과 조건을 잃게됩니다. 25 - 어떠한 의학적 개입이 없으면 쥐의 40 %가이 기간 .......
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공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.
감사의 글
저자는 싱가포르 교육부의 보조금 번호 MOE2010-IF-1-025의 자금 지원을 인정합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 디메틸 니트로사민 | Wako | 147-03781 | |
| 포르말린 | 시노팜 화학 물질 | F63257009 | |
| 에탄올 | 시그마 | 64-17-5 | |
| 크실렌 | 피셔 | 1330-20-7 | |
| Masson 트리 홈 염색 | |||
| 아닐린 블루 | 전자 현미경 과학# | 42755 | |
| Acid Fuschin | Electron Microscopy Sciences | RT42685 | |
| Scarlet Red | Electron Microscopy Sciences | #26905 | |
| 포스포텅스텐 산 수화물 | ALFA AESAR | ALFA40116.4 | |
| 포스포몰리브딕산 수화물 | 시그마 SG | 221856-25G | |
| Weigert's Iron Hematoxilyn | Merck | 1.15973.0002 | |
| DPX 마운팅 미디엄 | Merck | HX066873 | |
| 티슈 프로세서 | Leica | Leica TP 1020 | |
| 임베딩 머신 | Sakura | Sakura Tissue Tek TEC5 임베딩 시스템 | |
| Microtome | Leica Leica | RM 2235 | |
| 수의사 검사 분석기 | Idexx | 수의사 검사 8008 |
참고문헌
- Magee, P. N. Toxic liver injury; the metabolism of dimethylnitrosamine. Biochem J. 64 (4), 676-682 (1956).
- Pritchard, D. J., Butler, W. H. Apoptosis-the mechanism of cell death in dimethylnitrosamine-induced hepatotoxicity. J Pathol. 158 (3), 253-260 (....
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재인쇄 및 허가
