Balb-c Ola Hsd-Fox1nu 마우스의 췌장에 녹색 형광 단백질 발현 췌장암 세포(PANC-1 GFP)를 항소적으로 이식하여 종양 진행 및 전이를 평가하는 절차가 여기에 나와 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
췌장암은 생존 지난 수십 년에 실질적으로 개선되지 않은의 암 중 하나 남아있다. 만 진단 된 환자의 7 % 5 년 이상 살아남을 것입니다. 이해 췌장 종양 미세 환경을 모방하기 위해, 우리는 실시간 종양 진행의 비 침습성 영상화를 허용 췌장암 동소 뮤린 모델을 이용했다. 녹색 형광 단백질 (PANC-1 GFP)을 발현 췌장암 세포 (예, 마트 리겔 HC), 혈청이없는 배지로하고이 개복술을 통해 췌장의 꼬리 주입 기저막 매트릭스 높은 농도로 현탁시켰다. 실온에 도달하면 고농도 기저막 매트릭스에서 세포 현탁액은 겔상 물질된다; 이 주사 부위에서의 밀봉을 만들고 셀 누설 방지 췌장과 접촉 할 때 따라서 겔화. 다른 장기에 종양의 성장과 전이를 실시간으로 모니터링된다형광을 이용하여 동물. 이 GFP의 여기 및 방출에 대한 적절한 필터를 사용하는 것이 중요합니다. 연구자들이 쉽게 누드 마우스의 절차를 복제 할 수 있도록 소성을 주입하는 단계는이 문서에 자세히 설명되어 있습니다. 이 프로토콜의 주요 단계는 생체 이미징 세포 현탁액의 제조 외과 이식 및 전신 형광이다. 이 동 소성 모델은 기본 및 전이성 종양에 대한 새로운 치료제의 효능을 조사하기 위해 설계되었습니다.
서론
췌장암은 다른 암에 비해 빈도 증가로 진단하고 미국에서 암 관련 사망의 4 번째 주요 원인이다. 진단시에서 환자의 90 % 이상이 5 년 이내에 1,2- 다이. 현재 외과 적 종양 제거 췌장암 유일한 치료법이지만, 환자의 20 % 이하로 인해 질병이 상당히 진행되고 3,4 전이있다 진단시 주로 수술을받을 수있다. 특정 증상의 부족은 췌장암에게 자동 질병을 만든다; 증상 중 일부는 복부 통증, 허리 통증, 식욕 부진, 황달과 구토의 손실을 포함한다; 이는 쉽게 일반적인 소화기 질환 (4)로 해석 될 수있다. 이 때문에, 췌장 암의 진단 및 치료에 도움이 새로운 약물 학적 도구를 개발하는 것이 중요하다.
동물 모델의 사용은 pancre의 생물학을 이해하기 위해 우리가 할 수 있습니다ATIC 암과 인간이 지식을 적용에 대한 통찰력을 제공한다. 종양이 기원 (5)의 장기 성장 때문에 췌장암의 이종 이식 동 소성 모델은 현실이다. 세포주 또는 종양 단편을 피하 주입 이소성 모델과 달리 소성을 모델링 주변 6 종양 미세 환경을 모방하고 종양 세포의 상호 작용의 오락을 허용한다. 여기에 설명 된 이종 이식 모델은 유전 녹색 형광 단백질....
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프로토콜
아래에서 설명하는 프로토콜은지도와 웨스턴 대학의 동물 관리 및 사용위원회의 승인하에 실행된다. 모든 실험은 모든 관련 지침, 규정 및 규제 기관 준수 수행됩니다.
1. 세포 배양
- 전체 매체의 제조
- 클래스 II 생물학적 안전 캐비넷을 사용 무균 RPMI 배지 500㎖의 병에 소 태아 혈청 (FBS) 및 페니실린 스트렙토 마이신 (P / S)을 첨가하여 완전 배지를 준비한다. 소용돌이에 의해 부드럽게 섞는다. 각 보충제의 최종 농도는 10 % FBS와 1 % P / S (V / V). 예를 들어, 56 ML의 FBS 6 ML의 P / S와 미디어 500㎖의 보충.
- 37 ° C에서 물을 욕조에 완전 배지를 놓습니다.
- 해동 및 전파 세포
- 액체 질소에서 PANC-1 GFP 세포를 검색합니다. 37 ° C에서 물을 욕조에 부드러운 교반하여 병을 해동.
노트:(- 3 분 약 2) 해동은 신속해야한다. - 라벨 T-75 플라스크 (a) 셀 라인 명, (B)의 통로 번호, (c) 기간, 및 (d) 연구자의 글자와 함께 사용될 수있다.
- 바이오 안전성....
- 액체 질소에서 PANC-1 GFP 세포를 검색합니다. 37 ° C에서 물을 욕조에 부드러운 교반하여 병을 해동.
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결과
이 방법은 주사, 설치류 적절한 마취 개복술을 통해 세포 현탁액을 전달하기위한 세포 현탁액의 제조에 초점을 형광 인간 췌장암 세포 수술 동 소성 이식을 설명 형광 생체 작은 동물 이미징 용도. 이 3 주 사이에 녹색 형광 신호 (GFP 신호) 후 주입의 검출은, 현상 췌장암 종양 (그림 1)의 존재를 확인하기 위해 연구자에게 시각적 큐를 제공한다. (1)와 마우스의 세 가지 이미지로 구성도 PANC-1 GFP 형광 종양. 첫 번째는 백색광 (그림 1A)에서 촬영입니다; 두 번째 이미지는 푸른 형광 빛에서 촬영입니다 (여자 : 455-495 nm의, 방출 : 513-557 nm의) 이미지에 PANC-1 췌장 종양 (그림 1B)에서 방출 된 녹색 형광; 세 번째의 복합체 인처음 두 및 마우스 .......
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토론
따라서 우리는 생체 내 형광 이미징 (그림 1) 몸 전체를 사용하여 종양 성장의 비 침습적 모니터링을 허용, GFP를 표현 췌장암의 소성을 쥐 모델을 설명합니다. 이 기술은 실시간으로 종양 발생을 모니터링있게 해준다 (도 3); 이 연구팀은 췌장암에 대한 새로운 제제의 치료 효과를 연구하기위한 중요한 도구가 될 수 있습니다. 이 모델의 또 다른 중요한 측면은 GFP의 형광이 성공적으로 주입 및 췌장암의 성장을 나타내는 시각적으로 제공하는 것입니다; 이는 달리 살아있는 동물에서 측정하기 어려울 것입니다. 임상 설정과 일치,이 모델은 전이에 대한 통찰력을 제공한다. 비장, 장간막 림프절, 간 및 위장관 (그림 4)는 주변 장기에 전이를 보여줍니다. 우리는 일찍 칠주 이식을 게시로 전이를 관찰했다. PANC-1 전이는 담당자되었습니다18주 11-10의 범위 orted. 전이가 관찰되는 시간이.......
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공개 사항
저자는 공개 아무것도 없어.
감사의 글
교내 보조금에 대해 Western University of Health Sciences에 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| RPMI 미디어 1640 | Caisson Labs | RPL03-500ML | |
| 태아 소 세럼 | Gibco | 10437-077 | |
| 페니실린 스트렙토마이신 | Thermo Ficher Sci | 15140-122 | |
| Matrigel HC 기저막, 고농도 | Corning | 354248 | |
| SutureVet PGA 6-0 PGA | Henry Schein | 39010 | |
| Alcare 또는 Foamed Antiseptic Handrub | Steris | 639680 | |
| DPBS (Dubelcco's Phosphate-Buffered Saline) | Thermo Ficher Sci | 21300025 | |
| TB 주사기 27 G 1/2 | Becton Dickinson | 305620 | |
| Isoflurane | Blutler Schein | 50562 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge 동물 건강 | ||
| 수술용 가위, 5.5" 직선 마요네즈 | Henry Schein | 22-1600 | |
| PANC-1 GFP 세포주 | Anticancer, Inc | ||
| 소동물 이미징 시스템: iBox Scientia | UVP, LLC. Upland, CA. | 살아있는 동물의 형광 종양을 관찰하기 위한 소동물 이미징 시스템 |
참고문헌
- Siegel, R. Pancreatic Cancer Stats: American Cancer Society: Cancer Facts & Figures. , Available from: http://www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf (2014).
- Smyth, E., Cunningham, D. Harrison's Principles of Internal Medicine. Kasper, D., et al. , 19th edn, McGraw-Hill Education. (2015).
- Mahipal, A., Frakes, J., Hoffe, S., Ki....
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재인쇄 및 허가
