다세포 유기체에서 분비된 용해성 인자는 부분비 신호의 결과로 다른 세포 유형으로부터 반응을 이끌어냅니다. Insert co-culture 시스템은 세포-세포 접촉이 없을 때 분비된 용해성 인자에 의해 매개되는 변화를 평가하는 간단한 방법을 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
세포 반응의 변형에서 분비된 용해성 인자의 역할은 모든 조직과 시스템에 대한 연구에서 반복되는 주제입니다. 다세포 유기체를 구성하는 여러 세포 아형 간의 매우 복잡한 관계를 간단하게 하기 위한 시도로, 연구자들이 단일 세포 집단에 대한 자세한 이해를 얻을 수 있도록 체외 기술이 개발되었습니다. 이러한 기술 중 하나는 분비된 용해성 인자를 확산시킬 수 있는 투과성 멤브레인이 있는 삽입물을 사용하는 것입니다. 따라서, 삽입물에서 성장한 세포 집단은 세포-세포 접촉이 없는 상태에서 부분비 신호전달에 따른 세포 변화를 평가하기 위해 다른 세포 유형을 포함하는 웰 또는 접시에서 공동 배양할 수 있습니다. 이러한 인서트 공동 배양 시스템은 다른 공동 배양 기술에 비해 양방향 신호전달, 보존된 세포 극성 및 세포 변화의 집단별 검출과 같은 다양한 이점을 제공합니다. 염증, 암, 혈관 신생 및 분화 분야에서 활용되는 것 외에도 이러한 공동 배양 시스템은 특히 신경 염증의 맥락에서 중추 신경계에 존재하는 다양한 세포 아형 사이에 존재하는 복잡한 관계를 연구하는 데 가장 중요합니다. 이 논문은 삽입 공동 배양 시스템을 사용하여 분비된 용해성 인자에 의해 매개되는 세포 변화를 평가하기 위한 실험을 설정하기 위한 일반적인 방법론적 지침을 제공합니다. 또한, 리포다당류 활성화 N9 미세아교세포가 뉴런 PC12 세포에 미치는 사이토카인의 신경염증 효과를 측정하기 위한 구체적인 프로토콜에 대해 자세히 설명하여 삽입 공동 배양 방법론에 대한 구체적인 이해를 제공합니다.
서론
시험관 내에서 조직, 기관 또는 시스템의 연구는 다세포 유기체를 포함하는 여러 세포 아형 사이에 존재하는 매우 복잡한 관계를 단순화하기위한 시도이다. 실제로, 시험 관내 연구는 가능한 하나의 세포 집단에 대한 자세한 이해를 취득 할 수 있습니다. 1) 쉽게 휴대 환경을 조작 할 수 2) 능력 세포 상호 작용을 감소하고, : 시험 관내 실험에서 수행의 두 가지 장점이 있습니다. 따라서, 이러한 두 가지 장점이 허용 한 연구진은 전체 유기체 외부 영향의 결과를 조절하는 능력에 이르는, 생체 내에서 특정한 유형의 세포의 행동을 예측한다. 그런 의미에서, 체외 세포 배양은 종종 기초 및 응용 생명 과학을 연결하는 다리로 작동합니다. 그럼에도 불구하고, 시험 관내에서 작동하는 여러 단점도 있는데, 가장 중요한 특정 예약 생리적으로 거하여되는 것을관찰 된 표현형의 알 관련성. 실제로, 하나의 세포 유형은 용기에서 배양하면, 배양은 다양한 범위까지 상실, 다른 세포 유형, 조직과 기원의 유기체 및 앵커 내에서 체액 환경에 기여와의 세포 간 연결 이를 활성화 조직 세포 기능에 중요한 때로 특정 입체 구조를 유지한다.
세포 간 관계의 문제가 혼합 된 배양 기술....
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프로토콜
NB는 : 포유류 세포 배양에 필요한 다음 각 단계를 층류 후드에서 멸균 조건 하에서 수행되어야한다. 또한, 최적의 무균 세포 배양에 대한 일반적인 가이드 라인, 적용 예., 팁 언제든지 그들이 교차 오염을 초래할 시각 세포의 양을 줄일 수있다 폐기 적절 전체 미디어 변경을 수행하지만 부드럽게 교반 할 때, 공기에 노출 될 세포 현탁액은 또한, 삽입 특수 처리가 필요 plasticware의 친절 등 자신의 균일 한 피펫을 보장합니다. 인서트를 조작 할 때마다 먼저, 쉽게 눈물 때문에 실험을 위태롭게 할 수있는 깨지기 쉬운 멤브레인을 만지지 마십시오. 멤브레인을 관통하거나 부착 세포를 해리 위험이 있으므로 또한, 상기 세포 배양 배지의 진공 흡인을 수행하기에 적합하지 않다. 다음으로, 삽입 따라서,주의 때 모 이용해야는 멀티 웰 조직 배양 판에 느슨하게 걸고plasticware을 ving 또는 부착 세포를 해리 피하기 위해 피펫 팅 할 때. 큰 기공 크기를 갖는 인서트를 사용할 때, 세포 배양 배지 따라서, 빈번하게 액체의 레벨을 모니터하는 것이 중요하다 멤브레인을 통해 스며 가능성이있다. 마지막으로, 다음과 같은 프로토콜이 부착 세포에 대한 설계 및 서스펜션 세포에 적합하기 위해 약간의 수정을 요구된다는 점에 유의.
삽입 공동....
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결과
삽입 공 배양 시스템의 사용은 CNS의 다른 세포 분비 플레이어 사이의 관계를 보여주는 신경 염증성 과정의 연구에 특히 적절하다. 중추 신경계에서 면역은 휴식 분지의 상태 (그림 2A)에서 자신의 환경을 모니터링하고 감지 방해 할 수있는 미세 아교 세포라는 거주자 세포에 의해 주로 수행되는 수 문제가 적절한 신경 기능 76-78에 필요한 매우 귀중한 항상성. 아메바 모양 (그림 2B)와 세포 인구의 곱셈의 채용 특징 소교 활성화, 같은 사이토 카인과 같은 염증성 매개 물질의 방출 다음 microgliosis (그림 3)라고 신경 염증 (79)의 주요 부분을 구성한다 . 사이토 카인의 방출은 유해한 공격에 대해 신경 세포를 보호하는 고귀한 목적을 제공하고 클입니다엘리 모니터링. 신경 염증이 엄격한 제어를 탈출 때, 그것은 파괴적인 성격을 채택.......
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토론
모든 삽입 공동 문화 시스템 실험의 가장 중요한 단계는 실제로 사용하기에 적합한 인서트를 선택하는 거. 공극 크기 및 막 재료 시드 될 세포 형태 및 실험 목적을 고려 잊지 않고 철저한 고려되어야한다. 예를 들어, chemotaxic 분석은 세포 - 세포 접촉이없는 수용성 분비 인자에 의해 유도 된 세포 행동 변조를 분석하는 세포 공동 배양보다 공막의 동일한 유형을 사용할 수있다. 세포의 이동 및 세포 - 세포 접촉을 배제하기 위해, 세포 이동을 허용하기 이전에 대한 더 큰 것, 그리고 후자 작은 것 : 그러나, 실험의 두 종류의 서로 다른 기공 크기를 필요로한다. 세포 - 세포 접촉이없는 분비 가용성 인자에 의해 매개되는 세포 변화의 평가를 들어, 0.4 ㎛의 3 ㎛, 크기는 통과하지만 고에서 가장 세포를 방지하기 위해 그들이 단백질과 같은 큰 분자를 허용로서 보통 적절한 기공 그래서. 막재료는 주로 세포의 종류에 따라 상기 기술은 세포 배양 프로토콜의 마지막에 사용된다. 그들은 명확하지만 콜라겐 지지체가 처리 될 필요 부착.......
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작업은 MGM에 대한 캐나다 자연과학 및 공학 연구 위원회(NSERC)의 보조금으로 지원되었습니다. JR은 NSERC-Vanier 학생 펠로우입니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| RPMI-1640 미디엄 | 시그마 | R8755 | 웜 37 ° Dulbecco를 사용하기 전에 C 수조 |
| 를 사용하십시오. 의 변형된 독수리' s 매체/영양 혼합물 F-12 햄 | 시그마 | D6421 | 37°C에서 따뜻하게; 사용 전에 C 수조는 0.365 gm/L L-글루타민 |
| 호스 세럼 | ATCC | 30-2040 | Warm in 37 °로 보충해야 합니다. C 사용 전 수욕 |
| Fetal bovine serum | MultiCell | 80350 | Warm in 37 ° 사용 전 C 수욕 |
| Nerve Growth Factor-7S 쥐 하악선에서 추출 | Sigma | N0513 | 0.1&ndash를 포함하는 완충된 식염수 또는 조직 배양 매체의 용액에서 동결건조된 분말을 재구성하십시오; 1.0% 소 혈청 알부민 또는 1-10% 혈청 |
| 트립신-EDTA 용액 | 시그마 | T3924 37 | 에서 따뜻함; C 사용 전 수조 |
| 지방 다당류 대장균 055 : B5 | Sigma | L2880 | |
| 24 웰 플레이트와 함께 사용하기위한 독성 세포 배양 인서트 | BD Falcon | 353095 | 0.4 μ m 모공 |
| 24웰 플레이트 | TrueLine | TR5002 | 사용 전 콜라겐 코팅 |
| 루틴 PC12 세포 배양 배지 | 루틴 N9 세포 배양 배지 | ||
| nbsp; 85% RPMI 중간 | - 90% DMEM-F12 중간 | ||
| - 10% 열 비활성화 말 혈청 | - 10% 열 비활성화 말 혈청 | ||
| - 5% 열 비활성화 소 태아 혈청 | |||
| PC12 분화 매체 | N9 처리 매체 | ||
| - 99% RPMI 중간 | - 99% DMEM-F12 중간 | ||
| - 1% 열 비활성화 소 태아 혈청 | - 1% 열 비활성화 소 태아 혈청 | ||
| - 50 ng/mL 신경 성장 인자 | |||
| PC12 치료 배지 | |||
| - 99% RPMI 중간 | |||
| - 1% 열 비활성화 소 태아 혈청 |
참고문헌
- Grobstein, C. Morphogenetic interaction between embryonic mouse tissues separated by a membrane filter. Nature. 172 (4384), 869-870 (1953).
- Hoffman, R. A. Intraepithelial lymphocytes coinduce nitric oxide synthase in....
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재인쇄 및 허가
