지방 유래 줄기 세포 (ASCs) 쉽게 격리 하 고 정상 쥐의 지방에서 수확. ASC 시트 셀 시트 엔지니어링을 사용 하 여 만들 수 있습니다 하 고 주 커 전체 두께 전시 하는 당뇨 지방 쥐 결함 노출 된 뼈와 피부와 다음 인공 피부의 bilayer 덮여에 이식 될 수 있다.
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이 논문에서
요약
초록
인공 피부는 임상 연습에 상당한 치료 결과 달성 했다. 그러나, 당뇨병 환자 비능률적된 혈 또는 큰 상처와 상처에 대 한 인공 피부 치료 연장 될 수 있습니다. 세포 기반 치료 당뇨병 궤 양의 치료에 대 한 새로운 기술로 등장 하 고 셀 시트 공학 세포 이식의 효능을 향상 했다. 보고서의 수는 지방 유래 줄기 세포 (ASCs), 중간 엽 기질 세포 (MSC), 유형의 지방 조직 및 다른 조직에서 MSCs에 비교 될 때 컬렉션에 대 한 그들의 접근에서 그들의 관계 되는 풍부 때문에 치료 잠재력을 전시 하는 건의 했다. 따라서, ASCs 치료 용 줄기 세포의 좋은 원천이 될 나타납니다. 이 연구에서는 일반 루이스 쥐의 epididymal 지방 지방에서 ASC 시트 온도 응답 문화 요리와 의약품을 포함 하는 일반 문화 매체를 사용 하 여 성공적으로 창조 되었다. ASC 시트 커 당뇨병 지방산 (ZDF) 쥐에 이식 했다의 저하는 비만 2 형 당뇨병 쥐 모델 상처 치유. 상처 후부 두개골 표면에 만들어진, ASC 시트는 상처에 이식 했다 그리고 bilayer 인공 피부는 시트 커버를 사용 되었다. 받은 ASC 시트에서 쥐에서 쥐 ASC 시트 이식 없이 보다 치유 상처 더 했다. ASC 시트는 습 한 상처 환경 유지 보수를 필요로 건조 조건에 과민 하기 때문에이 접근은 제한 되었다. 따라서, 인공 피부 건조를 방지 하는 ASC 시트 커버를 사용 되었다. 인공 피부와 함께에서 ASC 시트 allogenic 이식 또한 다른 다루기 힘든 궤 양이나 화상, 말 초 동맥 질환 및 교원 질 질병, 관찰 등을 적용할 수 있습니다 그리고는 영양 또는 스테로이드를 사용 하는 환자에 게 관리 될 수 있습니다. 따라서,이 치료는 당뇨병 상처 치유에 대 한 치료 옵션을 개선 향한 첫 번째 단계를 수 있습니다.
서론
당뇨병 환자의 인구 세계 전반 증가 하 고 20151;에서 400 백만 도달 당뇨병 환자의 약된 15-25% 더 낮은 말단 당뇨병 궤 양2의 진행에서 위험에 있습니다. 더 낮은 말단 당뇨병 궤 세공 되지 않으며 완전 한 회복 후 재활 훈련으로 장기간 치료를 해야 할 수도 있습니다. 긴 치료 기간을 종종 환자 삶의 질에 있는 뜻깊은 감소에 있는 결과. 따라서, 당뇨병 상처 치료에 대 한 감소 또는 악화를 방지 하는 새로운 치료를 개발 해야 합니다. 당뇨병 상처 치유를 평가 하려면 우리는 당뇨 궤 양 상처 치유 모델 쥐, 모방 실용적인 임상 조건, 최적화 그리고 치유 상처 가속 지방 유래 줄기 세포 (ASC) 시트 셀 시트 엔지니어링을 사용 하 여 이식 여부 평가.
Mesenchymal stromal 세포 (MSCs) 그들의 자기 갱신, 그들의 immunomodulatory 효과 용량과 다양 한 세포 계보3으로 차별 하는 그들의 능력 때문에 상처 치유를 가속을 위한 우수한 잠재력을 전시. ASCs는 지방 조직에서 파생 된 MSC의 유형 그리고 그들은 그들의 잠재적인 신생 및 paracrine 활동
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프로토콜
아래에 제시된 모든 실험 프로토콜은 도쿄 여자 의과 대학 의과 대학 동물 복지 위원회의 승인을 받았으며 동물 실험의 올바른 수행을 위한 지침의 모든 요구 사항을 준수했습니다.
1. 동물, 악기, 문화 배지 및 요리의 준비
- 20% 소 태아 혈청(FBS)과 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 최소 필수 배지 알파를 사용하여 완전한 배양 배지를 준비합니다. 사용할 때까지 4 °C에서 몇 달 동안 보관하십시오.
- 성인 수컷 ZDF 쥐를 제2형 당뇨병성 비만 모델로 사용합니다. 수컷 루이스 쥐의 지방 패드를 사용하여 지방 조직을 분리하여 세포 시트를 준비합니다.
2. rASC의 격리 및 배양
- 루이스 쥐(8-33주령, 수컷)에서 이소플루란을 사용하여 전신 마취 하에 지방 조직을 얻습니다.
- 설치류 기계식 인공호흡기와 4% 이소플루란을 준비합니다. 멸균 면봉 몇 개, 깨끗한 거즈, 메스, 바늘 홀더, 작동 중인 가위, 집게 한 쌍, 5-0 나일론 봉합사를 준비합니다. 수술 기구 및 용품을 소독하십시오.
- 얻어진 지방 조직을 임시로 보존하기 위해 10mL의 멸균 인산....
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결과
이 프로토콜 다루기 힘든 당뇨병 상처에 대 한 새로운 세포 기반 치료를 설정 하려고 했습니다. ( 그림 1에서 그림)로 짧게 수용자 rASC 시트 셀 시트 엔지니어링을 사용 하 여 정상적인 쥐에서 만들어진 하 고 전체 간격 피부 결함에 인공 피부의 bilayer를 사용 하 여 당뇨병 쥐에 이식 했다. 가벼운 현미경의 이미지 rASC 시트 (그림 2A)의 좋은 본보기와 rASC 시트 (그림 2B)의 나쁜 예를 들어 그림 2에 표시 됩니다. 때 ASCs는 새로운 문화 접시에 도금, 접시 천천히 앞뒤로 누 볐 어 및 왼쪽 및 오른쪽 유니폼 rASC 시드 및 균일 두께 rASC 시트 (그림 2A)을 달성 하는 인큐베이터에 있어야 합니다. rASCs를 균일 하 게 붙어 있을 수 없습니다 있으며 문화 접시의 표면에 교양, 시트 연속.......
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토론
성공적으로 경작 된 rASC 시트에 대 한 가장 중요 한 단계는 다음과 같습니다: 1) 온도 약 37 ° C에서 온도 응답 문화 요리에 경작 하는 동안 유지 되어야 합니다. RASC 시트를 생성 하는 동안 모든 절차 37 ° C 온도-접시에, 수행 하 고 모든 시 약은 저절로 요리31에서 분리에서 세포를 방지 하기 위해 37 ° C로 예 열. 2) 받는 사람에서 쥐 rASC 시트의 성공적인 이식에 대 한 중요 한 비 접착 드레싱의 제거를 방지 하기 위해 모니터링 해야 합니다. 드레싱 제거 되 면 새로운 비 접착 드레싱 상처 사이트에서 분리에서 이식된 ASC 시트를 방지 하기 위해 적용 되어야 합니다.
이 절차를 사용 하 여, rASC 시트 일반적으로 얻은 했다 시드 통로의 5-7 일 이내 3 셀 온도 응답 문화 요리. 초기 셀 밀도와 AA를 포함 하는 완전 한 문화 매체 적용 시간 rASC 시트를 생성 하는 데 필요한 문화 시간을 조정할.......
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공개 사항
다음 저자 공개할 금융 관계가이 게시에 관련: 男 카노는 설립자와 셀 씨 주식 회사, 기술 및 도쿄 여자의과 대학에서 특허 라이센스, 위원회의 감독 이며 男 오 카노 마사유키 야마토 있으며 셀 씨 주식 회사 도쿄 여자 의과대학 관계자 받는 셀 씨 i n c.에서 연구 자금 다른 저자는 그들은 금융 관계가이 게시에 관련 없는 선언 합니다.
감사의 글
저자 실용적인 조언을 제공 하는 학과의 플라스틱 및 재건 수술, 준 텐도 대학의과 대학, 박사 유키코가 감사 합니다. 우리는 또한 당뇨병 센터의 도쿄 여자의 의학 대학의과 대학 우수 기술 지원의 씨 카 즈 무라를 감사합니다. 이 연구는 교육, 문화, 스포츠, 과학 및 기술 (MEXT) 일본에서 개발 혁신 시스템 "셀 시트 조직 공학 센터 (CSTEC)" 프로젝트의 학 제 연구 분야 프로그램 고급 혁신 센터의 창조에 의해 지원 되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| α-MEM glutamax | Invitrogen | 32571-036 | Carlsbad, CA |
| 태아 소 혈청 (FBS) | Japan Bioserum Co Ltd. | S1650-500 | |
| 페니실린/스트렙토마이신 | Life Technologies | 15140-122 | |
| 콜라겐분해효소 A | Roche Diagnostics | 10 103 578 001 | 독일 만하임 |
| 60 cm2 Primaria 조직 배양 접시 | BD Biosciences | 353803 | Franklin Lakes, NJ |
| Dulbecco의 인산염 완충액 식염수(PBS) | Life Technologies | 1490-144 | |
| 0.25% 트립신-에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA) | Life Technologies | 25200-056 | |
| L-아스코르브산 인산염 마그네슘염 n-수화물 | Wako | 013-19641 | |
| 35mm 온도 반응형 배양 접시(UpcellTM) | CellSeed | NUNC-174904 | 일본 도쿄( |
| MP-1000) | Kitazato Science Co., Ltd. | 1111 | |
| 설치류 기계식 인공호흡기 | Stoelting | #50206 | Wood Dale, IL |
| 4% 이소플루란 | Pfizer Japan | 114-13340-3 | Tokyo, Japan |
| 인공 피부 (Pelnac® ) | 스미스 & 조카 | PN-R40060 | 일본 도쿄 |
| -비접착성 드레싱 (Hydrosite plus® ) | 스미스 & 조카 | 66800679 | Allevyn non-adhessing®로 알려져 있습니다. 미국에서 |
| 5-0 나일론 봉합 | Alfresa | EP1105NB45-KF2 | |
| 20 CELLSTAR TUBES | greiner bio-one | 227 261 | |
| 15 mL 원심분리기 튜브 | Corning Incorporated | 430791 | |
| 14 GOLDMAN-FOX PERIOSTEAL | Hu-Friedy | P14 | Chicago, IL |
참고문헌
- International Diabetes Federation. IDF Diabetes Atlas, 7 ed.. , International Diabetes Federation. Brussels, Belgium. Available from: http://www.diabetesatlas.org/ (2015).
- Boulton, A. J., Vileikyte, L., Ragnarson-Tennvall, G., Apelqvist, J. The global burden of diabetic foot disease. Lancet. 366 (9498), 1719-1724 (2005).
- Zannettino, A. C., et al.
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재인쇄 및 허가
